什麼叫微生物回收試驗

❶ 無菌檢驗方法驗證

無菌檢查 方法 是為了檢查葯典要求無菌的制劑及其他製品是否無菌而建立的試驗方法！至於無菌檢查具體有哪些驗證方法呢？下面就隨我一起來了解下吧！

無菌檢驗方法驗證

無菌檢查方法驗證一般分為前驗證和再驗證兩種。

前驗證，也稱預驗證，指在無菌分析方法正式使用前，按照預定驗證方案進行的驗證。如果沒有充分的理由，任何檢查方法必須進行前驗證。

再驗證，指某一檢查咐戚前方法經過驗證並在使用一段時間後進行的，旨在證實已驗證狀態沒有發生飄移而進行的重新驗證及對檢查方法進行修訂、改變時進行的驗證。

通常一個無菌產品的檢查流程為：首先基於產品的劑型、溶解度等性質，按照葯典的要求確定是否需要進行前處理;然後根據產品的特性是否有抑菌性，確定是否需要增加去除產品抑菌性的方法;最後驗證整個檢查方法中用到的一切及試驗過程中的每一個環節包括樣品的預處理方式、檢查過程、培養條件等均不影響樣品中微生物的生長。

前處理方法直接影響後續步驟的效果和重現性，應是驗證的重點。

供試品中抑菌活性的去除是當前驗證工作的重點，尤其強調應充仔跡分驗證供試品本身對微生物生長的影響。

(一)具體的驗證方法如下：

1. 菌種的選擇

無菌檢查方法驗證中通常選擇以下6種試驗中常用的控制菌的標准菌株，它們分別代表不同類型的菌種：枯草芽孢桿菌 [CMCC(B)63 501]代表葯品中常見的污染菌——芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌 [CMCC(B)26 003]代表革蘭陽性菌、生孢梭菌 [CMCC(B)64 941]代表厭氧菌、大腸埃希菌 [CMCC(B)44 102]代表革蘭陰性菌、白色念珠菌 [CMCC(F)98 001]代表酵母菌、黑麴黴菌 [CMCC(F)98 003]代表黴菌。

2. 菌液的制備

接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至營養肉湯培養基中或營養瓊脂培養基上，接種生孢梭菌的新鮮培養物至硫乙醇酸鹽流體培養基中，30~35 ℃培養18~24h;接種白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁培養基中或改良馬丁瓊脂培養基上，23~28℃培養24~48h，上述培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液製成每1ml含菌數小於100cfu的菌懸液。接種黑麴黴的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養基上，23~28 ℃培養5~7天，加入3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然後，採用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液製成每1ml含孢子數小於100cfu的孢子懸液。

3. 樣品的前處理

無菌產品中每個成分應該是均勻的，因此只要確定在驗證的方法中，按所需的總接種量即可，而不必像樣品日常檢測中按規定的容器數取樣。

如果制備樣品時需要使用溶解劑、稀釋劑、助溶劑、破乳劑等溶劑，需要確保這些溶劑是有效的，並且其使用對微生物生長無影響;或者制備過程中需要對樣品進行加熱助溶、離心等操作時，需要確保加熱的溫度、離心速度和離衡清心時間等對微生物生長或分布無影響。 不需前處理的樣品免做。

(二)消除樣品抑菌性的方法

無抑菌性樣品的驗證方法：依據產品溶解性和微生物限度選擇合適的中性稀釋劑溶解和稀釋，用直接接種法驗證，常用中性稀釋液或淋洗液。

對於具有抑菌性樣品的驗證方法，首先確定樣品的抑菌作用(抑細菌、真菌試驗驗證)，選擇敏感標准菌株對供試品抑菌活性去除效果檢查(陽性菌回收試驗)。 常用的消除樣品抑菌活性的方法如下：

1. 稀釋法：利用降低供試品的相對濃度，將樣品稀釋至最低抑菌濃度下進行。如：取規定量的樣品溶液至較大量的培養基中，使單位體積內的樣品含量減少，至不含抑菌作用。

2. 薄膜過濾法：利用體積差異分離，通過薄膜過濾，微生物被截於濾膜，培養薄膜觀察有無微生物生長。通常薄膜孔徑應不大於0.45μm，直徑一般為50?mm，若採用其他直徑的濾膜，沖洗量應進行相應的調整。濾器和濾膜在使用前採用適宜的方法進行滅菌。使用時應保證濾膜在過濾前後的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試液其濾膜和濾器在使用前應充分乾燥。 供試液經過濾膜過濾後，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100?ml。總沖洗量不得超過1000ml。

3. 化學中和法：利用化學(生物)專屬性滅活，常用中和劑或滅活方法有：對氨基苯甲酸、卵磷脂、聚山梨酯-80等。對化學中和劑不敏感的樣品，用酶中和，如β -內醯胺酶。

4. 聯合使用：將以上兩種或幾種方法組合運用，以消除樣品的抑菌性。適用於抑菌作用較強的中西葯制劑。

5. 其次按照以下要求制備3組樣品：

樣品組：選擇以上適當的方法中和樣品，加入少量驗證微生物(接種量少於100cfu)。

對照組：0.1%蛋白腖或pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液,加少量微生物(接種量少於100cfu)。

陽性對照組：將試驗菌株直接接種於培養基中(接種量少於100cfu)。

6. 最後結果分析如下：

樣品組與對照組微生物生長數量相似，表明中和劑的中和方式有效消除了樣品的抑菌性(即有效性)，如果對照組與陽性對照組的微生物數量相似，表明樣品預處理、消除樣品抑菌性的方法、檢測程序和培養條件等均不影響微生物生長(即無毒性)。樣品如無抑菌性，省去對照組試驗，樣品組與陽性對照組直接比較。樣品組微生物生長數量不及陽性對照組微生物生長數量，表明樣品的預處理、試驗用器具材料、培養條件等方面存在對微生物生長不利的因素。

(三) 為考查驗證方法的穩定性和重現性，驗證至少需3個不同批次的同類樣品，分別進行3次驗證試驗。

無菌檢查方法驗證試驗設計

薄膜過濾法：按照葯典的要求取每種培養基規定接種的樣品總量按薄膜過濾法過濾、沖洗，在最後一次的沖洗液中加入小於100cfu的試驗菌，過濾。取出濾膜接種至硫乙醇酸鹽流體培養或改良馬丁培養基中，或將培養基加至濾桶內。另取一裝有同體積培養基的容器，加入等量試驗菌，作為對照。按照葯典的要求的溫度和時間進行培養。

直接接種法：取符合直接接種法培養基用量要求的硫乙醇酸鹽流體培養基8管，分別接入小於100cfu的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2管;取符合直接接種法培養基用量要求的改良馬丁培養基4管，分別接入小於100?cfu的白色念珠菌、黑麴黴各2管。其中1管接入每支培養基規定的供試品接種量，另1管作為對照，按照葯典的要求的溫度和時間進行培養。

結果判斷

同對照管比較，如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好，則說明驗證通過;如含供試品的任一容器中的試驗菌生長微弱、緩慢或不生長，驗證失敗，應採用增加沖洗量、增加培養基的用量、使用中和劑和滅活劑、更換濾膜等方法，消除供試品的抑菌作用，重新進行驗證。

無菌檢查的常見方法

首先要檢查方法驗證方案設計的科學性和完整性，是否有與葯典方法相悖的地方，尤其是產品本身的抑菌性，檢查方法的選擇，是直接接種法還是薄膜過濾法等。

無菌檢查方法驗證的硬體是否具備及是否已經進行了相關的確認。如使用黑麴黴菌是否具有生物安全櫃並進行確認，無菌室的確認及日常監測，培養箱的型號及數量和進行確認的情況等，智能集菌器、全封閉無菌試驗過濾培養器的型號、性能，濾膜是否符合規定等。

驗證中各個環節有關數據的真實性，如產品本身抑菌性試驗數據，菌種回收率和培養基適用性和靈敏度檢查數據，菌種的傳代、銷毀和使用記錄，無菌檢查操作記錄、培養記錄等。

無菌檢查中偏差的處理是否真的找到了根本原因，是否在沒有確切的原因前就對樣品重新檢查並依據新的檢查結果放行產品。

驗證的方法與無菌檢查操作規程和無菌檢查記錄是否完全一致，如操作步驟、檢查方法、檢查環境、試驗耗材均需與實際檢查操作規程及驗證過程完全相符。

為了考查驗證方法的穩定性和重現性，驗證時是否至少採用了3個不同批次的同類樣品，分別進行了3次驗證試驗。

使用新的濾膜或過濾器(不同廠家或批號、型號)是否重新進行樣品試驗組、蛋白腖對照組和陽性對照組的驗證確認。

除非樣品不能採用過濾的方法(難溶解)，企業是否採用全封閉的薄膜過濾法。

菌液的保存條件和保存期限是否符合葯典的要求，對於黑麴黴孢子懸液是否有驗證的資料。

無菌檢查的注意事項

培養基的適用性檢查包括培養基的無菌性檢查和培養基的靈敏度檢查。

中國葯典附錄中規定的檢驗數量不包括陽性對照用樣品量，雖然附錄另處有專門說明，仍然容易忽略。

無菌檢查時應強調“檢驗數量”，主要是保證試驗結果的代表性，而陽性對照試驗和驗證時僅須滿足“檢驗量”總量要求即可，以保證試驗結果的可靠性，驗證試驗可以由此減少大量的樣品;工作菌株的傳代次數不得超過5代，以防止過度的傳代增加菌種變異的風險。這里“代”的定義是指，活的培養物接種到微生物生長的新鮮培養基中培養，任何亞培養的形式均被認為是轉種或傳代一次。

菌液加入，按規定應在最後一次沖洗液中加入陽性菌液，主要是考慮過濾器的有效性。過濾器的有效性應由提供企業控制，用戶可採用適當方法抽查(如檢查陽性菌液通過濾筒的流出液)。

實驗室菌種的處理和保存的程序應標准化，以盡可能減少菌種污染和變異。

試驗時菌懸液並不是只要活的菌體就行，而是要保持旺盛的生命力，所以菌懸液存放時間不能太長。

菌液制備後若在室溫下放置，應在2?h內使用，若保存在2～8℃，可在24?h內使用。黑麴黴孢子懸液可保存在2～8℃，在驗證過的貯存期內使用。

薄膜過濾法採用大樣品量集菌的方法，具有代表性，不易漏檢，儀器操作相對簡單。該系統是全封閉過濾系統，避免了操作過程中外源性微生物的污染，對試驗結果的可信性影響較小。因此無菌試驗採用薄膜過濾法還是直接接種法並不依賴於驗證結果，而是取決於樣品的特性，如能採用過濾的方法均應採用薄膜過濾法檢查。

若樣品含有抑菌成分，當採用薄膜過濾法時，應先將供試液稀釋後在過濾，這樣可以減少濾膜對樣品的吸附，減少沖洗量，進而減少微生物的損失或傷害。

無菌檢查應作為穩定性考察的項目進行，以便對產品有效期的制定和合理的確定儲存條件提供重要的依據。

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2. 保健食品標識規定
4. 無形資產的評估方法

❷ 微生物實驗有哪些

微生物實驗有葯敏試驗、血凝實驗、PCR、中和實驗腔大、瑞氏染色。

微生物實驗的用途：

檢測食品和飲用水中的微生物，微生物在食品和飲用水中的污染會引起食源性疾病，通過微生物實驗可以檢測到其中是否存在細菌、真菌、病毒等各種微生物，從而保障公眾健康安全。

檢測環境中的微生物，微生物可以反映出環境中的污染情況，如空氣中的菌落總數、土壤中的細菌、水中的藻類、真菌等等，微生物實驗可以幫助監測和評估環境衛生狀況。醫學診斷，微生物實驗可以幫助醫生確定患者體內是否存在特定的細菌或病毒，從而確定相應的治療方案。

微生物實驗也是研究微生物學領域中各種微生物的形態、生理、代謝、遺傳等基礎知識的重要手段。制葯過程中的質量控制，許多葯品的生產需要使用微生物，如青黴素、鏈黴素等，微生物實驗可以確保葯品中的微生物達到一定的標准並且不會對人體產生危害。搏拿

❸ 微生物檢驗包括哪些

問題一：通常微生物檢驗五項指標分別為哪些 菌種 菌群 總數? 位置? 顏色

問題二：微生物檢驗准備工作包括哪幾個方面 微生物檢驗工作是一項對前期准備要求很嚴格的工作，依照我的個人經驗，建議你要准備以下事項：1，清楚你的檢驗工作的目的，是檢測什麼樣品的什麼項目，依照什麼標准，例如依照GBT 4789.2-2008 食品衛生微生物學檢驗，檢測某食品樣品的菌落總數項目，那處你就要熟讀這個標准，要知道准備什麼用到的儀器器具，用到什麼培養基，要有怎樣的培養條件，怎樣去觀察結果以及數據處理，怎樣填寫檢驗報告。所有這些都瞭然於心，才建議你往下進行。2，所用器具的滅菌准備，培養基的制備、滅菌，樣品的前處理，這些在相應的標准，以及很多的指導書都可以輕易查到，我就不多說。3，檢驗操作環境的准備：如操作台的紫外照射消毒，自身勞保用品的佩戴等，4,培養環境的准備：培養箱的清潔騰空，溫濕度設定到指定數值，便於檢驗操作完成後，馬上放入培養。由於時間有限，個人經驗有限，只能為你提供微薄的經驗分享一下，有更多問題我們可以分享交流一下。

問題三：食品微生物檢驗的指標有哪些 我國衛生部頒布的食品微生物指標有菌落總數、大腸菌群和致病菌三項。
1、菌落總數
菌落總數是指食品檢樣經過處理，在一定條件下培養後所得1g或1ml檢樣中所含細菌菌落的總數。它可以反應食品的新鮮度、被細菌污染的程度、生產過程中食品是否變質和食品生產的一般衛生狀況等。因此它是判斷食品衛生質量的重要依據之一。
2、大腸菌群
大腸菌群包括大腸桿菌和產氣桿菌的一些中間類型的細菌。這些細菌是寄居於人及溫血動物腸道內的腸居菌，它隨著的大便排出體外。食品中如果大腸菌群數越多，說明食品受糞便污染的程度越大。故以大腸菌群作為糞便污染食品的衛生指標來評價食品的質量，具有廣泛的意義。
3、致病菌
致病菌既能夠引起人們發病的細菌。對不同的食品和不同的場合，應該選擇一定的參考菌群進行檢驗。例如：海產品以副溶血性弧菌作為參考菌群，蛋與蛋製品以沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、變形桿菌等作為參考菌群，米、面類食品以蠟樣芽孢桿菌、變形桿菌、黴菌等作為參考菌群，罐頭食品以耐熱性芽孢菌作為參考菌群等等。
4、黴菌及其毒素
我國還沒有制定出黴菌的具體指標，鑒於有很多黴菌能夠產生毒素，引起疾病，故應該對產毒黴菌進行檢驗。例如：麴黴屬的黃麴黴、寄生麴黴等，青酶屬的桔青酶、島青酶等，鐮刀酶屬的串珠鐮刀酶，禾穀鐮刀酶等等。
5、其它指標
微生物指標還應包括病毒，肝炎病毒、豬瘟病毒、雞新城疫病毒、馬立克氏病毒、口蹄疫病毒，狂犬病病毒，豬水泡病毒等；另外，從食品檢驗的角度考慮，寄生蟲也被很多學者列為微生物檢驗的指標：如旋毛蟲，囊尾蚴，住肉孢子蟲、蛔蟲，肺吸蟲，弓形體，蟎，薑片吸蟲，中華分枝睾吸蟲等等 。

問題四：臨床微生物學檢驗的任務有哪些? ① 研究感染性疾病的病原學特徵；② 提供快速、准確的病
原學診斷；③ 指導合理應用抗生素；④ 監控醫院感染。
微生物學檢驗的基本任務：
① 研究標本採集、運送和保存的方法，以及標本的處理方法對提高檢出率的關系。
② 各種感染性疾病的病原體的檢測方法，最佳方法的選擇、各種病原微生物的鑒定程序以及雙歧鑒定流程、質量控制。
③ 各種病原微生物的快速診斷法、自動化儀器和微量化裝制的使用。
④ 執行國際標准操作程序和方法做好抗菌葯物敏感試驗。
⑤結果分析、實驗方法的評價及臨床意義。

問題五：食品微生物的主要檢測指標有哪些 我國衛生部頒布的食品微生物指標有菌落總數、大腸菌群和致病菌三項。
1、菌落總數
菌落總數是指食品檢樣經過處理，在一定條件下培養後所得1g或1ml檢樣中所含細菌菌落的總數。它可以反應食品的新鮮度、被細菌污染的程度、生產過程中食品是否變質和食品生產的一般衛生狀況等。因此它是判斷食品衛生質量的重要依據之一。
2、大腸菌群
大腸菌群包括大腸桿菌和產氣桿菌的一些中間類型的細菌。這些細菌是寄居於人及溫血動物腸道內的腸居菌，它隨著的大便排出體外。食品中如果大腸菌群數越多，說明食品受糞便污染的程度越大。故以大腸菌群作為糞便污染食品的衛生指標來評價食品的質量，具有廣泛的意義。
3、致病菌
致病菌既能夠引起人們發病的細菌。對不同的食品和不同的場合，應該選擇一定的參考菌群進行檢驗。例如：海產品以副溶血性弧菌作為參考菌群，蛋與蛋製品以沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、變形桿菌等作為參考菌群，米、面類食品以蠟樣芽孢桿菌、變形桿菌、黴菌等作為參考菌群，罐頭食品以耐熱性芽孢菌作為參考菌群等等。
4、黴菌及其毒素
我國還沒有制定出黴菌的具體指標，鑒於有很多黴菌能夠產生毒素，引起疾病，故應該對產毒黴菌進行檢驗。例如：麴黴屬的黃麴黴、寄生麴黴等，青酶屬的桔青酶、島青酶等，鐮刀酶屬的串珠鐮刀酶，禾穀鐮刀酶等等。
5、其它指標
微生物指標還應包括病毒，肝炎病毒、豬瘟病毒、雞新城疫病毒、馬立克氏病毒、口蹄疫病毒，狂犬病病毒，豬水泡病毒等；另外，從食品檢驗的角度考慮，寄生蟲也被很多學者列為微生物檢驗的指標：如旋毛蟲，囊尾蚴，住肉孢子蟲、蛔蟲，肺吸蟲，弓形體，蟎，薑片吸蟲，中華分枝睾吸蟲等等 。

❹ 微生物檢驗常見問題解答

微生物檢驗常見問題解答

你知道什麼是微生物檢驗嗎?你對微生物檢驗常見問題了解嗎?下面是我為大家帶來的微生物檢驗常見問題解答的知識，歡迎閱讀。

一、方法驗證

1.做過驗證的樣品微生物檢驗方法是否都需要按照新的方法進行重新驗證?

答：對於微生物限度檢查的產品而言，由於培養時間調整，應重新進行驗證。對於無菌檢查的產品而言，如果方法未作實質性調整，可以不必重新驗證。個別產品在各論中收載了新的無菌檢查方法，對這些品種，應對收載方法的適用性進行驗證。

2. 以前做過無菌驗證的品種是否需要重新按照新的標准再驗證?

答：參見問題1。

3. “新增抗生素供試品應選擇低吸附的濾器及濾膜” 比如注射用克林黴素磷酸酯屬於抗生素，是否需要重新選取濾膜再驗證?

答：目前採用的方法如果經驗證表明可行，則可以繼續使用該方法。

4. 微生物方法學驗證時，培養時間是否跟樣品日常檢驗所培養時間一致?

答：應該一致。

5. 微生物限度驗證時，如果一個方法只有金葡回收率達不到要求，該方法時是否可以用來做細菌黴菌的檢測方法?

答：按葯典的規定，一個計數方法通過驗證，是指所有試驗菌的回收率均達到要求。如果採用各種方法以及方法的組合仍無法使金葡回收率達標，則可以採用使金葡回收率最高的方法作為計數方法。

6. 薄膜過濾的沖洗量不能超過1000ml，我公司的喹諾酮類產品原來的方法是每張膜沖洗量為1500和2000ml，請問有沒有合適的方法將沖洗量降至1000，各菌的回收率仍能符合規定?

答：有幾種辦法可以降低沖洗劑的用量：1)降低接觸濾膜的供試品的濃度;2)改進沖洗的方式，如少量多次地沖洗、降低蠕動泵的轉速等;3)添加中和劑，如高價金屬離子。

7. 微生物限度檢查法規定，技術方法驗證時，採用上述方法若還存在一株或多株試驗菌的回收率達不到要求，那麼選擇回收率最接近要求的方法和試驗條件進行供試品檢驗。請問，上述方法是指僅通過一種方法還是一定要通過幾種方法聯用的?

答：應該要把可能採用的所有方法包括方法聯用都進行驗證。

8. 供試品不溶於稀釋劑，同時又有抑菌性，限度檢查時應如何消除抑菌性?

答：採用低速離心的方式，盡可能把供試品去除干凈，取離心後的上層液，進行薄膜過濾。

9. 不溶於水的固體產品，加表面活性劑後，如何操作才能在方法驗證中得到較好的回收率?

答：同問題8。

10. 有些品種2010年葯典與2005年比較檢驗方法變了，是否需要驗證或確認?

答：同問題1。

二、菌種管理

1. 濃菌液的有效期該如何確定?

答：葯典沒有規定。可以通過實驗確定有效期。例如，在不同的時間點測定濃菌液的濃度，從而判斷其有效期。

2. 葯典要求菌液在制備後2小時內使用，若保存在2-8℃的菌懸液可在在24小時內使用，那我們在做驗證或陽性對照是要加一定量的菌就沒有時間進行平板計數了，該如何確保所加菌量准確?

答：葯典對稀釋菌液的使用期限作出規定，並不會影響操作過程中稀釋菌液的加入。即便不規定，也無法在准確知道菌液濃度的情況下加入試驗菌。菌液稀釋的實驗操作和加入菌液的實驗操作應該是在同一次實驗中完成的，要使加入的菌量符合葯典的規定，可以從濃菌液的制備方法、菌液稀釋的方法等方面進行規范，也可以引入濁度比較的方法。

3. 菌懸液能否在倒平板之前確定菌含量?

答：活菌含量是無法確定的。總菌量可以通過比濁的方式確定。

4. 具體從哪些方面進行菌種菌株的特性和純度確認?如何操作?

答：基層的微生物實驗室進行菌種純度確認可以考慮以下一些方面：1)形態學鑒定，包括菌落形態和染色形態;2)生化鑒定，可以考慮使用API鑒定系統。

5. 黑麴黴凍干菌種如何轉種，傳代?

答：與其他菌種一樣，所不同的是使用的培養基應改為改良馬丁瓊脂培養基。

6. 乾粉狀的是否可做第0代使用?

答：只要是菌種保藏機構提供的凍干保藏的菌種，可以確定為第0代。

7. 菌種每次傳代都要做純度、特性等的確認嗎?

答：從外部購入的菌種，在進入本實驗室的菌種保藏體系時，需要進行純度和特性的確認。以後的每次傳代，可以通過顯色培養基做簡單的確認即可。

8. 如採用低溫保存菌種，需購買哪些設備?能夠到省所進行實際操作培訓?

答：低溫冰箱，應能夠提供-70℃的低溫。可以到省所來培訓。

9. 做方法驗證時，工作用菌種能否同時操作，如何防止交叉污染?

答：可以同時操作。避免交叉污染的關鍵是無菌操作技術。

10. 是否等菌懸液的含菌數出結果後再做適用性等檢查?

答：沒有必要。可參見問題2。

11. 菌液制備中菌液是否都要驗證儲存期?

答：稀釋菌液可參考葯典規定。如要保存濃菌液，則需要驗證有效期。

12. 菌種CMCC是否可以用ATCC替代，從省所或中檢所購買的菌種是否每次都可以出具規范的COA?

答：中國葯典使用CMCC的菌種，並沒有規定可以使用其他等效的菌種。省所提供的菌種嚴格講屬於標准貯備菌種，無法提供ATCC這樣的COA。CMCC至今也無法提供這類證明。

13. 銅綠假單胞如何保藏?答：可以使用低溫冷凍保存的方法。14. 工作用菌液是否屬於亞培養或傳代一次?

答：工作用菌液應屬於一次傳代。

三、微生物限度

1. 包裝材料的大腸埃希菌檢查?

答：根據包裝材料的不同，大腸埃希菌的檢查方法大致有兩種，一種是將浸提液合並後，取一部分，接種膽鹽乳糖培養基進行檢查;另一種是將浸提液合並後，薄膜過濾，然後按規定的方法檢驗。

2. 抗真菌葯品的微生物限度檢查法

答：這類產品的黴菌和酵母菌計數方法需要進行調整，可以根據產品劑型的不同，選擇薄膜過濾法或培養基稀釋法等方法。

3. 為什麼在日常樣品檢測中還需要做陽性對照(國外不需要)?

答：為了確保每一次檢測對可能存在的微生物都是有效的`。

4. 對於同一個品種，葯典為什麼不規定統一的檢測方法?

答：本版葯典進行過這樣的嘗試，也有某些品種已經收載了統一的檢測方法，如注射用頭孢類抗生素的無菌檢查。之所以沒有大量收載，主要是由於檢測方法還沒有經過必要的復核。將微生物檢驗的統一方法收載在品種的各論項下，始終是努力的方向。

5. 梭菌檢查中需置厭氧條件下培養48小時，是否指在厭氧培養箱中?

答：需要在厭氧培養裝置中進行培養，未必一定是厭氧培養箱。

6. 控制菌檢查方法驗證時，採用多種方法均未檢出控制菌，如何處理?

答：在確保所使用的各種方法都沒有錯誤的情況下，如果仍無法使試驗菌生長，則應該採用薄膜過濾法進行檢查。理由是該方法能夠最大程度地去除產品的抑菌作用。

7.常規的監督抽樣檢品(包括原料)在進行微生物限度檢查時，是否一定要進行活蟎檢查並在原始記錄與報告書中體現?

答：需要進行檢查。可以在原始記錄中體現，報告書上可以不出現，除非當發現有活蟎檢出。

8. 葯包材微生物限度檢查規定了合格質量水平，通常產量下取樣8個，要求8個瓶子均符合規定，如何進行?

答：每個瓶子分別進行實驗。

9. 大腸埃希菌具體操作規程?

答：參見中國葯品檢驗標准操作規程。

10. 動物組織及動物類原葯材的提取物入葯，是否需要檢沙門菌?

答：需要進行沙門菌檢查。

11. 關於中國葯典菌落計數結果的判斷還存在疑義，望能舉例說明。

答：不清楚所指的存在疑義是指哪方面。2010年版對結果報告進行了較大篇幅的修訂，目前的規定應該比05版更為清晰、明確。

12. 需做沙門菌檢驗樣品量的確定?

答：10g(ml)用於樣品計數檢驗和其他控制菌檢查，10g(ml)用於沙門菌檢查，10g(ml)用於沙門菌檢查的陽性對照。需要進行沙門菌檢查的樣品，檢驗用量應為30g(ml)。

13. 日常的實驗室裝備能否達到梭菌無氧的培養要求?

答：完全可以。可以採用厭氧培養盒(罐)。

14. 如果一個產品有兩個規格，是否可以取其中之一做陽性對照?

答：每個規格均需進行陽性對照。

15. 細菌數為100g/g的，樣品稀釋級只做1:10,1:100的倍數就可以了嗎?

答：可以。

16. 培養時間3天，5天，可理解為72小時，120小時嗎?

答：可以。這樣更為嚴謹。

17.中國葯品檢驗標准操作規范“已做驗證試驗的供試品，在檢查時刻不必再做陽性對照”如何理解?

答：該標准操作規范中在無菌檢查法中規定“供試品無菌檢查應進行陽性對照試驗”，表明不論是否進行了方法驗證，在產品的每一次檢驗過程中，還必須進行陽性對照。在控制菌檢查的大腸埃希菌項下，指出“已做驗證試驗的供試品，在該供試品檢查時不必再作陽性對照”。該規定僅適用方法驗證與供試品檢查同時開展的情況。2005年版葯典和2010年版葯典在控制菌檢查中均對陽性對照試驗有明確規定，“進行供試品控制菌檢查時，應做陽性對照試驗。”產品檢驗中應以葯典規定為准。

18. 無菌檢查和微生物限度檢查中，產品中規定的溶解液是否可以換成其他的溶液?

答：可以。

19. 制劑通則中，沒有微生物檢查項目的，是否可不進行微生物項目檢測?

答：可以。主要是二部制劑通則中口服片劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑。

20. 在細菌、黴菌和酵母菌計數中，適用性檢查細菌是培養48小時，黴菌和酵母菌是培養72小時，供試品檢查中細菌是培養3天，黴菌和酵母菌是培養5天，那方法驗證中應參照哪個時間進行培養。

答：應按照供試品檢驗時的條件，即細菌3天，黴菌和酵母菌5天。

21. 測定純化水微生物限度時，每張濾膜過濾量是多少合適?需要先稀釋嗎?過濾完後需不需要沖洗?假如我取10ml純化水通過雙杯體封閉式薄膜過濾器過濾，每張濾膜上的計數是以5ml為單位還是10ml為單位?

答：過濾量應以培養後出現的微生物數不超過100cfu/膜為標准。一般可不稀釋。不需要沖洗。每張濾膜的過濾量為5ml。

22. 2010葯典中關於純化水的微生物限度是：細菌、黴菌及酵母菌總數每1ml不得過100個。這句話的意思是細菌總數每1ml不得過100個，黴菌及酵母菌總數不得過100個，還是細菌+黴菌+酵母菌總數每1ml不得過100個。如果是三者總數的話，那細菌總數限度是多少?黴菌及酵母菌總數限度又是多少?

答：是總數不得過100個。沒有必要考慮各自的限度值。

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❺ 微生物檢驗知識

微生物檢驗知識大全

你知道什麼是微生物檢驗嗎?你對微生物檢驗知識了解嗎?下面是我為大家帶來的關於微生物檢驗的知識，歡迎閱讀。

一.塗片鏡檢結果與培養結果不吻合?

1、塗片結果是報告所有檢見病原菌，而培養的目的是檢出致病菌，因此會產生不一致的情況。

2、一些苛養菌需要在特殊環境或培養基上生長，因此常規培養不一定能得到結果。

我們先來談談這第一個問題：塗片鏡檢結果與培養結果不吻合?。正如謝軼老師說的那樣：首先我們的搞懂什麼是塗片?什麼是培養?塗片的原則在排除一些檢查前或檢驗中的因素後其實就是：所見即所得!而培養呢?是根據檢驗的目的,檢出可能的致病菌，因此會產生不一致的情況;也正如一些老師聊到的那樣：一些苛養菌，厭氧菌等需要在特殊環境或培養基上生長，因此常規培養不一定能得到結果。

二.取的明顯是膿液標本，為何培養報告為無菌生長?

1、塗片結果是報告所有檢見病原菌，而培養的目的是檢出致病菌，因此會產生不一致的情況;

2、一些苛養菌需要在特殊環境或培養基上生長，因此常規培養不一定能得到結果。

我們先來談談這第一個問題：塗片鏡檢結果與培養結果不吻合?正如謝軼老師說的那樣：首先我們的搞懂什麼是塗片?什麼是培養?塗片的原則在排除一些檢查前或檢驗中的因素後其實就是：所見即所得!而培養呢?是根據檢驗的目的,檢出可能的致病菌，因此會產生不一致的情況;也正如一些老師聊到的那樣：一些苛養菌，厭氧菌等需要在特殊環境或培養基上生長，因此常規培養不一定能得到結果。

標本採集和培養方式：

1、未破裂膿腫：消毒覆於膿腫表面的皮膚，用注射器將膿腫內容物吸出，注射器針頭扎入無菌橡膠瓶蓋(青黴素小瓶橡膠塞)。---厭氧培養or需氧培養

2、開放病灶和膿腫：不建議做厭氧培養;用無菌生理鹽水或70%酒精擦拭除去表面分泌物，盡量去除表面菌群，用拭子採集病灶底部或邊緣的標本，置於需氧培養基中。---需氧培養。

三.今天的培養結果與前一天的'不一樣?

1、取材是否一致;

2、痰標本，選擇優勢菌做鑒定葯敏，就可能導致兩次結果不一致。

四.明顯是稀便，培養結果為何正常?

1. 大便培養，通常只能鑒定志賀菌、沙門菌感染。

2. 很少醫院常備致病性大腸桿菌鑒定血清。

3. 很少醫院能夠做艱難梭菌培養，但有一部分醫院能做培養和毒素檢測。

4. 很少醫院能常備霍亂弧菌血清。

與國際微生物檢驗的差距-缺項

1. 艱難梭菌：醫院感染常見病原菌，一些發達國家中排名第一

2. 肺炎鏈球菌尿抗原檢測

3. 軍團菌尿抗原檢測

4. 非典型分枝桿菌

5. 呼吸道感染病毒

五.培養陽性的病原菌都需要用抗菌葯物治療嗎?

1. 不是;

2. 培養陽性≠感染，可能為污染(血培養)，可能為定植(痰培養);

3. 任何結果必須結合臨床情況進行評價(重要);

4. 感染部位的清創、引流、換葯比使用抗菌葯更重要;

改善患者全身情況：器官功能支持、糾正酸鹼平衡、電解質紊亂、低蛋白血症、高血糖等。

六.選擇葯敏報告敏感的葯物，為什麼臨床療效無效?

1. 體外葯敏試驗只能預測體內治療效果，一般規律，耐葯=治療無效;敏感≠治療有效;

2. 可能不是真正的致病菌(定植或污染);

3. 細菌本身因素(如誘導耐葯，生物被膜);

4. 感染部位的葯代動力學因素;

5. 葯敏試驗中有些葯物單獨使用無效，但可以與其他葯物聯合用葯。

“嚴重的腸球菌感染，如心內膜炎，除非證明其對慶大黴素和鏈黴素高水平耐葯外，可用氨苄西林、青黴素或萬古黴素(對於敏感株)加一種氨基糖苷類進行聯合治療，起到協同殺菌作用。”

銅綠假單胞菌：對氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉維酸、復方新諾明、1、2代頭孢天然耐葯。對三代頭孢(噻肟、曲松)即使葯敏試驗敏感，在實際里程治療中也需要超大劑量才會取得療效。頭孢中僅他啶和吡肟。

銅綠假單胞菌有對跟多葯物的誘導耐葯性，在體外試驗可能沒有表現出來，但一旦接觸某種抗生素，其沉默的耐葯基因可能被誘導激活，耐葯性則表現出來，這種特性在β-內醯胺抗生素中尤為明顯，可導致體外敏感，但實際治療卻無效。

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❻ 科普小知識微生物檢測(微生物檢測技術的內容簡介)

1.微生物檢測技術的內容簡介
第一模塊 微生物檢驗基礎 項目一 微生物及微生物檢驗概述 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、什麼是微生物 二、微生物的特點 三、微蠢蠢薯生物對產品的污染 四、污染的預防與控制 五、微生物檢驗的任務和意義 六、微生物檢驗的對象 七、微生物檢驗的質量管理 八、微生物檢驗的發展趨勢 【思考題】 閱讀小知識：微生物的命名及分類 項目二 微生物的形態結構 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、細菌 二、放線菌 三、酵母菌 四、黴菌 五、病毒 【思考題】 閱讀小知識：小布商成了英國皇家學會的會員 微生物的奠基人——巴斯德 項目三 微生物的生理特性 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、微生物的營養 二、微生物的生長 三、微生物的代謝 【思考題】 閱讀小知識：抗生素的濫用及食品安全 第二模塊 微生物檢驗常規技術 微生物實驗室守則 實驗室的急救 項目四 微生物培養基的配製 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、培養基的分類 二、選用或設計培養基的基本原則 任務4 1配製常用的微生物培養基 【思考題】 項目五 消毒滅菌技術 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、消毒滅菌的有關概念 二、消毒滅菌的方法 任務5 1乾熱滅菌技術及玻璃器皿的滅菌 【思考題】 任務5 2高壓蒸汽滅菌技術及培養基的滅菌 【思考題】 任務5 3無菌室的消毒處理及超凈台的使用 【思考題】 任務5 4液體過濾除菌 【思考題】 項目六 微生物的分離、純化、培養技術 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、接種技術 二、分離純化技術 任務6 1微生物的接種 【思考題】 任務6 2微生物純種的分離培養及菌落 特徵觀察 【思考題】 項目七 微生物染色及顯微形態觀察技術 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、顯微技術 二、染色技術 任務7 1普通光學顯微鏡的使用 【思考題】 任務7 2細菌帶者的染色及形態結構觀察 【思考題】 任務7 3酵母菌、黴菌的染色及形態結構 觀察 【思考題】 閱讀小知識：顯微鏡 項目八 微生物的計數技術 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、細胞數量的測定 二、細胞生物量的測定 任務8 1顯微鏡直接計數 【思考題】 任務8 2平板菌落計數 【思考題】 項目九 菌種保藏技術 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、菌種保藏的基本原理 二、菌種保藏方法 任務9 1實驗室常用簡易菌種保藏法 【思考題】 任務9 2菌種的冷凍真空乾燥保藏法 【思考題】 任務9 3菌種的液氮超低溫保藏法 【思考題】 項目十 血清學檢驗技術 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、抗原、抗體及血清學反應 二、血清學反應的特點及影響因素 三、血清學反應的基本類型 閱讀小知識：單克隆抗體及 生物導彈 第三模塊 產品中的微生物檢驗綜合實訓 項目十一 微生物檢驗工作流程與質量控制 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、微生物檢驗工作流程 二、微生物檢測的質量控制 任務11 1對某一檢測結果的分析和報告 的撰寫 【思考題】 項目十二 食品的微生物學檢驗 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、概述 二、食品檢樣的採集與制備 三、食品檢樣的保存及送檢 四、食品衛生微生物學檢驗技術 五、食品中致病菌的檢測技術檔液 六、食品中黴菌和酵母菌的檢驗技術 七、微生物快速檢測技術 任務12 1食品中細菌總數和大腸菌群的檢測 【思考題】 任務12 2罐頭食品商業無菌的檢測 【思考題】 任務12 3酸乳中乳酸菌的檢測 【思考題】 任務12 4食品中糞大腸菌群的檢測 【思考題】 任務12 5紙片法快速檢測食品中金黃色 葡萄球菌 【思考題】 項目十三 化妝品的微生物學檢驗 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、概述 二、化妝品的衛生學檢驗標准 三、化妝品的採集與預處理 四、化妝品的衛生細菌檢驗 任務13 1化妝品中綠膿桿菌的檢測 【思考題】 項目十四 葯品的微生物學檢驗 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、葯品無菌檢查法 二、微生物限度檢查法 任務14 10?9%氯化鈉注射劑的無菌 檢驗 【思考題】 任務14 2咳嗽糖漿中細菌總數、黴菌及 酵母菌總數的測定 【思考題】 項目十五 環境的微生物學檢測 【知識目標】 【能力目標】 【背景知識】 一、空氣潔凈度的微生物檢測 二、水質的微生物學檢驗 三、活性污泥中微生物生物量的測定 任務15 1生活飲用水中細菌總數和總 大腸菌群的檢測 【思考題】 任務15 2發酵車間空氣中微生物的 測定 【思考題】 任務15 3活性污泥生物相的觀察 【思考題】 附錄 附錄1 微生物實驗室常用玻璃器皿及 洗滌 附錄2 實驗室常用培養基的配製 附錄3 實驗室常用染色液的配製 附錄4 食品生產相關產品的國家衛生 標准 附錄5 《中華人民共和國葯典》（2005年版） （二部）微生物限度標准 附錄6 化妝品衛生標准（GB7916-87） 參考文獻 隨著經濟的高速發展和加入WTO，我國已全面走向世界經濟大舞台，國際、國內貿易迅猛發展，商品貿易快速增加。

在產品的生產企業、流通領域及質量技術監督管理部門，迫切需要從事產品質量控制、商品質量檢驗、質量技術監督與管理等方面的專業人才，高職高專商品質量檢驗專業正是為適應這一新。
2.微生物常識
微生物的定義 形體微小，結構簡單，通常要用光學顯微鏡和電子顯微鏡才能看清楚的生物，統稱為微生物。

（但有些微生物是可以看見的，像屬於真菌的蘑菇、靈芝等。） 1 特點： 個體微小，一般<0.1mm。

構造簡單，有單細胞的，簡單多細胞的，非細胞的。進化地位低。

2 分類： 原核類： 三菌，三體。 真核類： 真菌，原生動物，顯微藻類。

非細胞類： 病毒，亞病毒 （ 類病毒，擬病毒，朊病毒）。 3 五大共性： 體積小，面積大； 吸收多，轉化快微生物； 生長旺，繁殖快； 適應強，易變異； 分布廣，種類多。

[編輯本段]微生物的類群 種類 原核：細菌、放線菌、螺旋體、支原體、立克次氏體、衣原體。 真核：真菌、藻類、原生動物。

非細胞類：病毒和亞病毒。 一般地，在中國大陸地區的教科書中，均將微生物劃分為以下8大類： 細菌、病毒、真菌、放線菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體。

1 細菌： （1）定義：一類細胞細短，結構簡單，胞壁堅韌，多以二分裂方式繁殖和水生性強的原核生物 （2）分布：溫暖，潮濕和富含有機質的地方 （3）結構：主要是單細胞的原核生物，有球形，桿形，螺旋形 基本結構：細胞膜 細胞壁 細胞質 核質 特殊結構：莢膜、鞭毛、菌毛、芽胞 （4）繁殖： 主要以二分裂方式進行繁殖的 （5）菌落： 單個細菌用肉眼是看不見的，當單個或少數細菌在固體培養基啊行大量繁殖時，便會形成一個肉眼可見的，具有一定形態結構的子細胞群落. 菌落是菌種鑒定的重要依據.不同種類的細菌菌落的大小，形狀光澤度顏色硬度透明度都不同. 2 放線菌 （1）定義：一類主要成菌絲狀生長和以孢子繁殖的陸生性較強的原核生物 （2）分布：含水量較低，有機物較豐富的，呈微鹼性的土壤中 （3）形態構造：主要由菌絲組成，包括基內菌絲和氣生菌絲（部分氣生菌絲可以成熟分化為孢子絲，產生孢子） （4）繁殖：通過形成無性孢子的形式進行無性繁殖 無性繁殖 有性繁殖 （5）菌落：在固體培養基上：乾燥，不透明，表面呈緻密的絲絨狀，彩色乾粉 3 病毒 （1） 定義：一類由核酸和蛋白質等少數幾種成分組成的「非細胞生物」，但是它的生存必須依賴於活細胞. （2）結構：蛋白質衣殼以及核酸（核酸為DNA或RNA） (3)大小：一般直徑在100nm左右，最大的病毒直徑為200nm的牛痘病毒，最小的病毒直徑為28nm的脊髓灰質炎病毒 （4）增殖：病毒的生命活動中一個顯著的特點為寄生性。病毒只能寄生在某種特定的活細胞內才能生活。

並利用會宿主細胞內的環境及原料快速復制增值。在非寄生狀態時呈結晶狀，不能進行獨立的代謝活動。

以 噬菌體為例： 吸附→DNA注入→復制、合成→組裝→釋放[編輯本段]微生物的特點 一、微生物的化學組成 C,H,O,N,P,S以及其他元素 二、微生物的營養物質 1 水和無機鹽 2 碳源：凡能為微生物提供生長繁殖所需碳元素的營養物質 來源 作用 3氮源：凡能為微生物提供所必需氮元素的營養物質 來源 作用：主要用於合成蛋白質，核酸以及含氮的代謝產物 4 能源：能為微生物生命活動提供最初能源來源的營養物質或輻射能 根據碳源和能源分類： 5生長因子：微生物生長不可缺少的微量有機物 能引起人和動物致病的微生物叫病源微生物，有八大類： 1.真菌：引起皮膚病。深部組織上感染。

2放線菌：皮膚，傷口感染。 3螺旋體：皮膚病，血液感染 如梅毒，鉤端螺旋體病。

4細菌：皮膚病化膿，上呼吸道感染 ，泌尿道感染，食物中毒，敗血壓症，急性傳染病等。 5立克次氏體：斑疹傷寒等。

6衣原體：沙眼，泌尿生殖道感染。 7病毒：肝炎，乙型腦炎，麻疹，艾滋病等。

8支原體：肺炎，尿路感染。 生物界的微生物達幾萬種，大多數對人類有益，只有一少部份能致病。

有些微生物通常不致病，在特定環境下能引起感染稱條件致病菌。 能引起食品變質，腐敗，正因為它們分解自然界的物體，才能完成大自然的物質循環。

微生物的作用 微生物對人類最重要的影響之一是導致傳染病的流行。在人類疾病中有50%是由病毒引起。

世界衛生組織公布資料顯示：傳染病的發病率和病死率在所有疾病中占據第一位。微生物導致人類疾病的歷史，也就是人類與之不斷斗爭的歷史。

在疾病的預防和治療方面，人類取得了長足的進展，但是新現和再現的微生物感染還是不斷發生，像大量的病毒性疾病一直缺乏有效的治療葯物。一些疾病的致病機制並不清楚。

大量的廣譜抗生素的濫用造成了強大的選擇壓力，使許多菌株發生變異，導致耐葯性的產生，人類健康受到新的威脅。一些分節段的病毒之間可以通過重組或重配發生變異，最典型的例子就是流行性感冒病毒。

每次流感大流行流感病毒都與前次導致感染的株型發生了變異，這種快速的變異給疫苗的設計和治療造成了很大的障礙。而耐葯性結核桿菌的出現使原本已近控制住的結核感染又在世界范圍內猖獗起來。

微生物千姿百態，有些是腐敗性的，即引起食品氣味和組織結構發生不良變化。當然有些微生物是有益的，它們可用來生產如乳酪，麵包，泡菜，啤酒和葡萄酒。

微生物非常小，必須通過顯微鏡放大約1000 倍才能看到。比如中等大小的細菌，1000個疊加在一起只有句。
3.微生物檢測
黴菌和酵母計數操作細則1 設備和材料 1。

1 溫箱：25~28℃。 1。

2 振盪器。 1。

3 天平。 1。

4 顯微鏡。 1。

5 玻塞三角瓶：300mL。 1。

6 試管：15mm*150mm。 1。

7 平皿：直徑9cm。 1。

8 吸管：1mL及10mL。 1。

9 酒精燈。 1。

10 載物玻片。 1。

11 蓋玻片。 1。

12 廣口瓶。 1。

13 牛皮紙袋：121℃滅菌20min。 1。

14 金屬勺、刀等。 1。

15 試管架。 1。

16 接種針。 1。

17 橡皮 *** 。 2 培養基和試劑 2。

1 馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基，附加抗菌素，按GB 4789。 28中4。

79規定。 2。

2 孟加拉紅培養基：按GB 4789。28中4。

81規定。 2。

3 滅菌蒸餾水。 2。

4 乙醇。 3 操作步驟 3。

1 采樣：取樣時須特別注意樣品的代表性和避免采樣時的污染。首先准備好滅菌容器和采樣工具，如滅菌牛皮紙袋或廣口瓶，金屬刀或勺等。

在衛生學調查基礎上，採取有代表性的樣品。樣品採集後應盡快檢驗，否則應將樣品放在低溫乾燥處。

糧食（包括糧庫貯糧，糧店或家庭小量存糧）樣品的採集，可根據糧囤或糧垛的大小和類型，分層定點取樣，一般可分三層五點，或分層隨機採取不同點的樣品，充分混合後，取500g左右送檢。 小量存糧可使用金屬小勺採取上、中、下各部位的混合樣品。

穀物加工製品（包括熟飯、糕點、麵包等）、發酵食品、乳及乳製品以及其他液體食品，用滅菌工具採集可疑霉變食品250g，裝入滅菌容器內送檢。 3。

2 以無菌操作稱取檢樣25g（或25mL），放人含有225mL滅菌水的玻塞三角瓶中，振搖30min，即為1:10稀釋液。 3。

3 用滅菌吸管吸取1∶10稀釋液10mL，注入試管中，另用帶橡皮 *** 的1mL滅菌吸管反復吹吸50次，使黴菌孢子充分散開。 3。

4 取1mL1∶10稀釋液注入含有9mL滅菌水的試管中，另換一支1mL滅菌吸管吹吸5次，此液為1∶100稀釋液。 3。

5 按上述操作順序做10倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換用一支1mL滅菌吸管，根據對樣品污染情況的估計，選擇3個合適的稀釋度，分別在做10倍稀釋的同時，吸取1mL稀釋液於滅菌平皿中，每個稀釋度做2個平皿，然後將涼至45℃左右的培養基注入平皿中，待瓊脂凝固後，倒置於25~28℃溫箱中，3d後開始觀察，共培養觀察5d。 3。

6 計算方法：通常選擇菌落數在10~150之間的平皿進行計數，同稀釋度的2個平皿的菌落平均數乘以稀釋倍數，即為每克（或毫升）檢樣中所含黴菌和酵母數。 3。

7 報告：每克（或毫升）食品所含黴菌和酵母數以個/g（個/mL）表示。
4.微生物檢測或鑒定技術或方法有哪些
通過顯微鏡直接觀察。

一般來說，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度以及培養時間），同種微生物表現出穩定的菌落特徵。這些特徵包括菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等方面。

（見高中生物選系1《生物技術實踐》圖2-8）因此可以通過顯微鏡觀察菌落特徵對微生物種類進行判斷。 使用選擇培養基培養微生物或人為提供有利於目的菌株生長的條件。

選擇培養基，顧名思義其作用是允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他微生物生長。例如，使用以尿素作為唯一氮源的培養基能夠培養出可合成脲酶的微生物；在培養基中PH調至酸性有利於黴菌的生長繁殖（抑制細菌的生命活動）等。

選擇培養一般是通過觀察微生物的同化作用類型或某一特徵進行間接判斷，得到的微生物往往並不只有一種，但是能夠大致確定這些微生物存在的共有特徵從而對其分類。
5.微生物食品檢測的檢測方法有哪些
Easy TestTMEasyTestTM測試片利用了特異性酶與特異性顯色底物反應的原理，使目標菌與非目標菌呈現可明顯區別的不同特異性顏色；EasyTestTM測試片的培養載體採用了無紡布和水溶性營養底物的設計，具有良好的吸水性，可快速吸收測試液，使微生物自動均勻分布於無紡布上，為測試液和營養底物創造了一個固定的混合區域；EasyTestTM測試片為一次性即用產品，操作簡便、無需耗費大量人力配製培養基和高壓滅菌、後續廢棄物的處理工作簡單、環保，並且最重要的是可以有效縮短檢測時間、提高檢測效率，非常適用於食品微生物檢測和環境衛生監測。

試驗方法選取100份食品樣品，包括肉製品、乳製品、蔬菜、豆製品、水果、油炸食品、面點、飲料、水產品、速凍食品和調味品，以國家標准方法GB4789-2010《食品安全國家標准食品微生物學檢驗》為檢測依據，採用EasyTestTM測試片、3MPetrifilmTM測試片和國標的傳統培養基法分別測定各個樣品的菌落總數、大腸桿菌數和大腸菌群數，再將EasyTestTM測試片的結果分別與3MPetrifilmTM測試片和國家標准中的傳統培養法得到的結果進行比較，然後根據相關性判斷EasyTestTM測試片的准確度和適用性。 結果分析菌落總數試驗EasyTestTM菌落總數測試片以TTC（氯化三苯四氮唑，一種氧化還原指示劑）為顯色物質，TTC接受微生物呼吸鏈產生的氫後可形成非水溶性的紅色三苯甲脂，紅色三苯甲脂經微生物作用會在EasyTestTM測試片的無紡布上形成紅色點狀物（EasyTestTM測試片上的菌落分布情況見圖3），通過計數紅點，即可獲得菌落總數。

EasyTestTM菌落總數測試片的培養條件為36±1℃，48±3h。
6.細菌感染的微生物學檢測方法是怎樣的
細菌感染的微生物學檢測方法：包括細菌學診斷 （檢測及鑒定病原菌）；檢測病原菌成分（抗原和核酸），以及檢測患 者血中特異性抗體。

①細菌學診斷：包括直接鏡檢、細菌染色檢查 法、分離與培養。細菌染色檢查法主要包括革蘭染色、抗酸染色和熒 光染色後光鏡檢查。

但很多細菌的形態和染色性缺乏明顯特徵，僅憑 形態學不能做確切的診斷。②檢測病原菌成分：包括抗原檢測及核酸 檢測。

a.抗原檢測常用的方法有玻片凝集試驗、協同凝集試驗、間接 血凝試驗、乳膠凝集試驗、對流免疫試驗、酶免疫技術、免疫熒光技 術和同位素標記技術等。這些試驗特異、敏感、簡便，即使是在採集樣品前患者使用了抗生素，對細菌的培養不易成功，但細菌的抗原仍 能被檢測出來。

b.核酸檢測是近年來廣泛應用的分子生物學技術，③抗體的檢測，即血清學檢測。常用的血清學 試驗包括玻片或試管凝集試驗、沉澱試驗、補體結合試驗和冷凝集試驗等，可根據病原菌的種類加以選擇。
7.食品微生物檢測檢什麼
食品中的微生物按照其對人類有無危害可分為兩類。

一類是有益菌；例如酵母菌、乳酸菌等，可用來釀造美酒或腌制鹹菜；另一類是有害菌，例如大腸菌群及其他腸道性致病菌，它們會引起食物中毒或引發傳染病。 食品的微生物檢測內容比較多。

其中，反映食品衛生質量的細菌污染指標是菌落總數和大腸菌群。 食品中的細菌數量一般是以單位（g、ml）食品中細菌的個數來計，常用菌落總數來表示。

利用菌落總數一方面可以起到監督食品的清潔狀態的作用，另一方面可以用來預測食品的保藏期。大腸菌群是腸道致病菌污染的指示菌，它一般直接或間接來自人與溫血動物糞便。

食品中如檢出大腸菌群，就表示食品曾受到污染。 菌落總數和大腸菌群是食品的衛生指標，絕大部分食品都需要檢驗這兩個指標是否合格。

其中，菌落總數培養時間是48小時，大腸菌群的檢測時間也在24到72小時之間。按照國標要求，菌落總數和大腸菌群是食品企業出廠時必須檢驗的項目。

除衛生指標之外，食品中還需檢驗是否含有致病菌（致病菌不得檢出），包括黴菌和酵母菌以及沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌等。 致病菌的種類很多，並非所有食品所檢致病菌都相同，常檢的致病菌有沙門、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌等。

當然，根據產品的類別不同，檢測項目也存在差別，一般可以按照產品和原材料等所屬的衛生標准來確定檢測的項目。