⑴ 高中生物實驗方法
實驗一：使用高倍顯微鏡觀察幾種細胞
一、實驗目的：
1、學會如何使用顯微鏡觀察細胞；
2、了解細胞的結構；
3、學會製作臨時裝片。
二、實驗材料：（實驗材料可換）松針、動物血液、動物神經細胞永久裝片
三、實驗用具： 載玻片、蓋玻片、蒸餾水、滴管、鑷子、土豆、刀片、顯微鏡（物鏡5X、10X、40X）
四、方法步驟：
1、製作松針的臨時切片：
（1）取干凈的載玻片一個平置於試驗台上，用滴管在載玻片中央滴一滴蒸餾水。
（2）將土豆切成條狀（截面約：0.5X12.5px)取兩條，將一根松針夾在兩個土豆條之間，用刀片削成盡量薄的薄片，削時，手腕不動，靠大臂帶動小臂移動刀片。切片數次。從中選取較薄的切片，置於載玻片的水滴上。
（3）從一側輕輕蓋上蓋玻片，不要產生氣泡。用吸水紙輕輕吸去蓋玻片周圍的水滴，即完成臨時切片的製作。
2、觀察切片：
（1）取出顯微鏡，置於試驗台上靠左的位置，打開光源。
（2) 將上步製作好的切片置於顯微鏡的載物台上，調整載物台位置，使蓋玻片對准光源。
（3）使用5X物鏡觀察切片，使松針切片在視野中心，換成10X物鏡，觀察松針葉面橫切結構。
（4）換成40X物鏡觀察，注意細胞及細胞內物質結構，畫圖。
3、 動物血液臨時裝片的製作及觀察（除了不用切片，其他類似）
4、 動物神經細胞永久裝片的觀察。
五、考點提示：
1、松針的葉面結構是什麼樣的？
2、動物細胞的結構是什麼樣的？與植物細胞又什麼不同？
3、顯微鏡的物鏡倍數愈大，視野的亮度如何？物體的大小如何？
4、如何調節焦距？
5、如何才能使切片盡量的薄？切片的厚薄對顯微鏡下觀察的效果有什麼影響。
實驗二：檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質
一、實驗目的：
嘗試用化學試劑檢測生物組織中糖類、脂肪和蛋白質，闡明實驗原理—顏色反應，識記和區分用於可溶性還原糖、脂肪、蛋白質鑒定的試劑及產生的特定顏色，初步掌握鑒定上述化合物的基本方法，學會描述實驗現象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。
二、實驗原理：
某些化學試劑能使生物組織中的有關有機化合物，產生特定的顏色反應。
1、生物組織中普遍存在的可溶性糖類較多，有葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖。前三種糖的分子內都含有游離的具還原性的半縮醛羥基，因此叫做還原糖；蔗糖分子內沒有，為非還原糖。實驗中所用的斐林試劑，只能鑒定生物組織中可溶性還原糖，而不能鑒定可溶性非還原糖。可溶性還原糖（如葡萄糖、果糖、麥芽糖）與斐林試劑發生作用，可生成磚紅色的Cu 2O沉澱。如：
葡萄糖 + 2Cu2+ + 4OH— 加熱 葡萄糖酸 + Cu 2O↓（磚紅色）+ H 2O
即Cu 2+被還原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。
用斐林試劑鑒定還原糖時，溶液變化過程為：淺藍色→棕色→磚紅色沉澱
澱粉遇碘變藍色（直鏈）或紫（紅）色（支鏈）。
2、脂肪和類脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）統稱為脂類。它是構成人體組織的正常成分，不溶於水而易溶於酒精、乙醚、氯仿等脂溶劑中。在化學組成上，脂類屬於脂肪酸的酯或與這些酯有關的物質。脂類的主要功能是氧化供能。
脂肪主要存積於脂肪組織中，並以油滴狀的微粒存在脂肪細胞漿內。
在病理檢驗中，脂類染色法最常用以證明脂肪變性，脂肪栓子以及腫瘤的鑒別。脂類染色使用最廣泛的染料是蘇丹染料，最常用的有蘇丹Ⅲ，蘇丹Ⅳ，蘇丹黑及油紅O等。脂肪被染色，實際上是蘇丹染料被脂肪溶解吸附而呈現染料的顏色。經研究認為組織中脂質在液態或半液態時，對蘇丹染料著色效果最好。根據這一原理，適當提高溫度（37℃-60℃）對組織切片染色效果是有好處的。
脂類染色，用冰凍或石蠟切片，以水溶性封固劑封固，如甘油、明膠和阿拉伯糖膠等。
脂肪可以被蘇丹Ⅲ染液染成橘黃色或橙紅色（或被蘇丹Ⅳ染液染成紅色），膽脂素呈淡紅色，脂肪酸不著色，細胞核呈藍色。
3、蛋白質與雙縮脲試劑發生作用，產生紫色反應。（蛋白質分子中含有很多肽鍵，在鹼性NaOH溶液中能與雙縮脲試劑中的Cu2+作用，產生紫色反應。）
三、實驗材料：
1、做可溶性還原性糖鑒定實驗，應選含糖高，顏色為白色的植物組織，如蘋果、梨。（因為組織的顏色較淺，易於觀察。）經試驗比較，顏色反應的明顯程度依次為蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿卜。
2、做脂肪的鑒定實驗。應選富含脂肪的種子，以花生種子為最好，實驗前一般要浸泡3~4小時（也可用蓖麻種子）。
3、做蛋白質的鑒定實驗，可用富含蛋白質的黃豆或雞蛋清。
4、澱粉的鑒定：馬鈴薯勻漿。
四、實驗用具：雙面刀片、試管（最好用刻度試管）、試管夾、試管架、大小燒杯、小量筒、滴管、酒精燈、三腳架、石棉網、火柴、載玻片、蓋玻片、毛筆、吸水紙、顯微鏡
五、實驗試劑：
1．斐林試劑（包括甲液：質量濃度為0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：質量濃度為0.05g/ mL CuSO4溶液）
2．蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液
3．雙縮脲試劑（包括A液：質量濃度為0.1g/ mL NaOH溶液和B液：質量濃度為0.01g/ mL CuSO4溶液）
4．體積分數為50%的酒精溶液
5．碘液
6．蒸餾水
六、方法步驟：
一、可溶性糖的鑒定
操 作 方 法
注 意 問 題
解 釋
1. 制備組織樣液。
（去皮、切塊、研磨、過濾）
蘋果或梨組織液必須臨時制備。
因蘋果多酚氧化酶含量高，組織液很易被氧化成褐色，將產生的顏色掩蓋。
2. 取1支試管，向試管內注入2mL組織樣液。
3. 向試管內注入1mL新制的斐林試劑，振盪。
應將組成斐林試劑的甲液、乙液分別配製、儲存，使用前才將甲、乙液等量混勻成斐林試劑；
切勿將甲液、乙液分別加入蘋果組織樣液中進行檢測。
斐林試劑很不穩定，甲、乙液混合保存時，生成的Cu ( OH ) 2在70~ 900C下分解成黑色CuO和水；
甲、乙液分別加入時可能會與組織樣液發生反應，無Cu OH生成。
4. 試管放在盛有50-650C溫水的大燒杯中，加熱約2分鍾，觀察到溶液顏色：淺藍色 →棕色 → 磚紅色（沉澱）
最好用試管夾夾住試管上部，使試管底部不觸及燒杯底部，試管口不朝向實驗者。
也可用酒精燈對試管直接加熱。
防止試管內的溶液沖出試管，造成燙傷；
縮短實驗時間。
二、脂肪的鑒定
操 作 方 法
注 意 問 題
解 釋
花生種子浸泡、去皮、切下一些子葉薄片，將薄片放在載玻片的水滴中，用吸水紙吸去裝片中的水。
干種子要浸泡3~4小時，新花生的浸泡時間可縮短。
因為浸泡時間短，不易切片；浸泡時間過長，組織較軟，切片不易成形。切片要盡可能薄些，便於觀察。
在子葉薄片上滴2~3滴蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液，染色1分鍾。
染色時間不宜過長。
用吸水紙吸去薄片周圍染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。
酒精用於洗去浮色，不洗去浮色，會影響對橘黃色脂肪滴的觀察。同時，酒精是脂溶性溶劑，可將花生細胞中的脂肪顆粒溶解成油滴。
用吸水紙吸去薄片周圍酒精，滴上1~2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片。
滴上清水可防止蓋蓋玻片時產生氣泡。
低倍鏡下找到花生子葉薄片的最薄處，可看到細胞中有染成橘黃色或紅色圓形小顆粒。
裝片不宜久放。
時間一長，油滴會溶解在乙醇中。
三、蛋白質的鑒定
操 作 方 法
注 意 問 題
解 釋
制備組織樣液。
（浸泡、去皮研磨、過濾。）
黃豆浸泡1至2天，容易研磨成漿，也可購新鮮豆漿以節約實驗時間。
鑒定。加樣液約2ml於試管中，加入雙縮脲試劑A，搖勻；再加入雙縮脲試劑B液3~4滴，搖勻，溶液變紫色。
A液和B液也要分開配製，儲存。鑒定時先加A液後加B液。
CuSO4溶液不能多加。
先加NaOH溶液，為Cu2+與蛋白質反應提供一個鹼性的環境。A、B液混裝或同時加入，會導致Cu2+變成Cu ( OH ) 2沉澱，而失效。
否則CuSO4的藍色會遮蓋反應的真實顏色。
可用蛋清代替豆漿。
蛋清要先稀釋。
如果稀釋不夠，在實驗中蛋清粘在試管壁，與雙縮脲試劑反應後會粘固在試管內壁上，使反應不容易徹底，並且試管也不易洗干凈。
附：澱粉的檢測和觀察
用試管取2ml待測組織樣液，向試管內滴加2滴碘液，觀察顏色變化。
碘液不要滴太多
以免影響顏色觀察
七、考點提示：
1、常見還原性糖與非還原性糖有哪些？ 答：葡萄糖、果糖、麥芽糖都是還原性糖；澱粉、蔗糖、纖維素都是非還原性糖。 2、還原性糖植物組織取材條件？ 答：含糖量較高、顏色為白色或近於白色，如：蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿卜等。 3、研磨中為何要加石英砂？不加石英砂對實驗有何影響？ 答：加石英砂是為了使研磨更充分。不加石英砂會使組織樣液中還原性糖減少，使鑒定時溶液顏色變化不明顯。 4、斐林試劑甲、乙兩液的使用方法？混合的目的？為何要現混現用？ 答：混合後使用；產生氫氧化銅；氫氧化銅不穩定。 5、還原性糖中加入斐林試劑後，溶液顏色變化的順序為？ 答：淺藍色棕色 磚紅色。6、花生種子切片為何要薄？ 答：只有很薄的切片，才能透光，而用於顯微鏡的觀察。 7、轉動細准焦螺旋時，若花生切片的細胞總有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什麼？ 答：切片的厚薄不均勻。 8、脂肪鑒定中乙醇作用？ 答：洗去浮色。 9、雙縮脲試劑A、B兩液是否混合後用？先加A液的目的怎樣通過對比看顏色變化？ 答：不能混合；先加A液的目的是使溶液呈鹼性；先留出一些大豆組織樣液做對比。
實驗三：觀察DNA和RNA在細胞中的分布
一、實驗原理：
1、真核細胞的DNA主要分布在細胞核內，RNA主要分布在細胞質中。
2、甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對DNA和RNA的親和力不同，甲基綠對DNA親和力強，使DNA顯現出綠色，而吡羅紅對RNA的親和力強，使RNA呈現出紅色。用甲基綠、吡羅紅的混合染色劑將細胞染色，可同時顯示DNA和RNA在細胞中的分布。
3、鹽酸的作用
① 鹽酸能改變細胞膜的通透性，加速染色劑的跨膜運輸；
② 鹽酸使染色體中的DNA與蛋白質分離，便於DNA與染色劑的結合
二、實驗材料：人的口腔上皮細胞、洋蔥鱗片葉表皮細胞
三、實驗用具：大小燒杯、溫度計、滴管、消毒牙簽、載玻片、蓋玻片、鐵架台、
石棉網、火柴、酒精燈、吸水紙、顯微鏡
四、方法步驟：
1、取材
① 滴：在潔凈的載玻片上滴一滴質量分數為0.9%的NaCl溶液；
② 刮：用消毒牙簽在口腔內側壁上輕輕地刮幾下；
③ 塗：將牙簽上的碎屑塗抹在載玻片的生理鹽水中；
④ 烘：將塗有口腔上皮細胞的載玻片在酒精燈的火焰上烘乾。
2、水解
① 解：將烘乾的載玻片放入裝有30ml質量分數為8%的鹽酸的小燒杯中，進行材料的水解；
② 保：將小燒杯放入裝有30℃溫水的大燒杯中保溫5分鍾。
3、沖洗塗片
① 沖：用緩緩的蒸餾水沖洗載玻片10秒鍾；
② 吸：用吸水紙吸去載玻片上的水分。
4、染色
① 染：用2滴吡羅紅甲基綠混合染色劑滴在載玻片上，染色5分鍾；
② 吸：吸去多餘染色劑；
③ 蓋：蓋上蓋玻片。
5、觀察
① 低：在低倍物鏡下，尋找染色均勻，色澤淺的區域，移至視野中央，將物像調節清晰；
② 高：轉到高倍物鏡，調節細准焦螺旋，觀察細胞核和細胞質的染色情況。
五、考點提示：
1、取口腔上皮細胞之前，應先漱口，以避免裝片中出現太多的雜質；
2、取洋蔥表皮細胞時，盡量避免材料上帶有葉肉組織細胞；
3、沖洗載玻片時水的流速要盡量慢，切忌直接用水龍頭沖洗；
4、用酒精燈烘烤載玻片時，不要只集中於材料處，而應將載玻片在火焰上來回移動，使載玻片均勻受熱，以免破裂；
5、烘烤後的載玻片不要馬上放入盛有稀鹽酸的燒杯中，最好先自然冷卻1分鍾。
實驗四：體驗制備細胞膜的方法
一、實驗原理：細胞膜的流動性和半透性
二、實驗材料：豬（或牛、羊、人）的新鮮的紅細胞稀釋液（血液加適量的生理鹽水）
三、實驗用具：蒸餾水、試管、吸水紙、載玻片、蓋玻片、顯微鏡
四、方法步驟：
1、用試管吸取少量紅細胞稀釋液，滴一小滴在載玻片上，蓋上蓋玻片，製成臨時裝片
2、在高倍鏡下觀察，待觀察清晰時，在蓋玻片的一側滴一滴蒸餾水，同時在另一側用吸水紙小心吸引，注意不要把細胞吸跑。上述操作均在載物台上進行，並持續觀察細胞的變化。可以看到近水的部分紅細胞發生變化；凹陷消失，細胞體積增大，很快細胞破裂，內容物流出。
五、考點提示：
1、選擇動物細胞進行實驗的原因：動物細胞無細胞壁。
2、選擇哺乳動物成熟紅細胞進行實驗的原因：人和其他哺乳動物成熟紅細胞無細胞核和眾多的細胞器（膜），可以得到較純凈的細胞膜。
3、細胞破裂後，用什麼方法獲得較純的細胞膜：將漲破的細胞溶液，經過離心分離得到細胞膜。
4、如何獲得植物細胞膜：先用纖維素酶和果膠酶將植物細胞壁水解得到原生質體；再將原生質體放入清水中，水自由擴散進入，原生質體漲破；最後經過離心分離得到植物細胞膜。
5、稀釋及稀釋的時候用生理鹽水的原因：稀釋後，可以減少血液中的血漿蛋白等雜物。用生理鹽水是為了保持滲透壓，防止在稀釋的時候就發生細胞破裂。
實驗五：用高倍顯微鏡觀察葉綠體和線粒體
一、實驗原理：
1、葉肉細胞中的葉綠體，呈綠色、扁平的橢球形或球形，散布於細胞質中，可以在高倍顯微鏡下觀察它的形態。
2、線粒體普遍存在於動物細胞和植物細胞中，健那綠染液能使活細胞中的線粒體呈現藍綠色。通過染色，可以在高倍顯微鏡下觀察到處於生活狀態的線粒體的形態有短棒狀、圓球狀、線形、啞鈴形等。
二、實驗材料：新鮮的蘚類的葉、人的口腔上皮細胞、新配製的質量分數為1%的健那綠染液（將0.5g健那綠溶解於50mL生理鹽水中,加溫到30-40攝氏度,使其充分溶解）
三、實驗用具：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、消毒牙簽
四、方法步驟：
1、觀察葉綠體
低倍鏡下找到葉片細胞→低倍鏡下找到葉片細胞→高倍鏡下觀察。
2、觀察線粒體
染色→製片→低倍鏡下找到口腔上皮細胞→高倍鏡下觀察。
五、考點提示：
1、觀察葉綠體時選擇蘚類葉的原因：蘚類屬於低等植物，葉片是綠色的單層細胞，不需加工即可進行觀察。
2、臨時裝片中的材料要隨時保持有水狀態的原因：保證細胞器的正常形態並能懸浮在細胞質基質中，否則，細胞失水收縮，將影響細胞器形態的觀察。
實驗六：植物細胞的吸水和失水
一、實驗目的：
1、學會使用顯微鏡觀察植物細胞質壁分離和復原。（與前面的知識：顯微鏡的使用聯系）
2、觀察不同濃度的溶液對細胞吸水失水的影響，掌握此種方法的具體應用。
3、通過觀察植物細胞的吸水和失水，明確滲透系統的組成以及具體應用。
二、實驗原理：
1、成熟的植物細胞放到一定濃度的溶液中構成一個滲透系統。當細胞大量失水時原生質層與細胞壁的伸縮程度不同，導致原生質層和細胞壁分離。
2、當外界溶液濃度大於細胞液濃度時，根據擴散作用原理，水分會由細胞液中滲出到外界溶液中，通過滲透作用失水；由於細胞壁和原生質層的伸縮性不同，細胞壁伸縮性較小，而原生質層性較大，從而使二者分開；反之，外界溶液濃度大於細胞液濃度，則細胞通過滲透作用吸水，分離後的質和壁又復原。
三、實驗材料：紫色特別深的洋蔥外表皮、質量濃度為0.3g/ml的蔗糖溶液、清水
四、實驗用具：顯微鏡、鑷子、刀片、載玻片、蓋玻片、滴管、吸水紙
五、方法步驟：
1、用刀片在洋蔥鱗片葉的外表面劃一個小方塊，用鑷子撕取這一小塊洋蔥表皮，在洋蔥的外表皮上，用刀片劃一些方塊，用鑷子輕輕撕取一小塊（撕取的僅僅是外表皮，不要撕得太厚，仍然作為一個問題留給學生）。在取標本時，可以將洋蔥的內表皮朝外，外表皮朝里進行對折，不要太用力，然後取其外表皮作為材料，將它平展地放在載玻片中央的清水滴中，並蓋上蓋玻片。
2、用低倍鏡觀察洋蔥表皮細胞中紫色的中央液泡大小，以及原生質層的位置。
3、從蓋玻片的一側滴入0.3g/ml的蔗糖溶液，在蓋玻片的另一側用吸水紙吸引。這樣重復幾次，洋蔥表皮細胞就侵潤在蔗糖溶液中。注意重復3-4次。
4、再用低倍鏡觀察洋蔥表皮細胞中紫色的中央液泡大小，以及原生質層的位置。
5、從蓋玻片的一側滴入清水，在蓋玻片的另一側用吸水紙吸引，這樣重復幾次，洋蔥表皮細胞就侵潤在清水中。
6、還用低倍鏡觀察洋蔥表皮細胞中紫色的中央液泡大小，以及原生質層的位置。
六、實驗結論：
當外界溶液濃度大於細胞液濃度時，水分會由細胞液中滲出到外界溶液中，通過滲透作用失水；由於細胞壁和原生質層的伸縮性不同，細胞壁伸縮性較小，而原生質層性較大，從而使二者分開；反之，當外界溶液濃度低於細胞液濃度時，則細胞通過滲透作用吸水，分離後的質和細胞壁又復原。
實驗七：比較過氧化氫在不同條件下的分解
一、實驗目的：
通過比較過氧化氫在不同條件下分解的快慢，了解過氧化氫酶的作用和意義
二、實驗原理：
新鮮的肝臟中含有過氧化氫酶，根據酶的專一性，可知其可以催化過氧化氫分解成水和氧。
三、實驗材料：
質量分數為20%的豬肝研磨液，新配製的體積分數為3%的過氧化氫溶液，質量分數為3.5%的FeCl3溶液
四、實驗用具：
量筒，試管，滴管，試管夾，試管架，衛生香，火柴，酒精燈，大燒杯，石棉網，溫度計
五、方法步驟：
1、取4支潔凈試管，分別編號1，2，3，4，向試管內分別加入2ml過氧化氫溶液。
2、將2號試管放在90℃左右的水浴中加熱，觀察氣泡情況，並與1號試管作比較。
3、向3號試管內滴入2滴FeCl3溶液，向4號試管內滴入2滴肝臟研磨液，觀察哪支試管產生的氣泡多。
4、2至3min後，將點燃的衛生香分別放在3、4號試管內液面的上方，觀察哪支試管中的衛生香燃燒更猛烈。
六、實驗結論：
1、加熱能促進H2O2的分解,提高反應速率；
2、酶有催化作用，與無機催化劑相比，酶具有高效性。
實驗八：影響酶活性的條件
一、實驗目的：
1、初步學會探索影響酶活性條件的方法。
2、探索過氧化氫酶在不同溫度和PH下催化過氧化氫水解的情況。
二、實驗原理：
澱粉遇碘後，形成紫藍色的復合物。麥芽糖和葡萄糖遇碘後，不形成紫藍色的復合物，但能
與斐林試劑發生氧化還原反應，生成磚紅色的氧化亞銅沉澱。
三、實驗材料：
質量分數為2%的新配置的澱粉酶溶液，新鮮的質量分數為20%的豬肝研磨液，
質量分數為3%的可溶性澱粉溶液，新配製的體積分數為3%的過氧化氫溶液，
質量分數為5%的鹽酸，質量分數為5%的氫氧化鈉溶液，蒸餾水，冰水，熱水，
碘液，斐林試劑
四、實驗用具：量筒，試管，滴管，試管夾，三腳架，火柴，酒精燈，小燒杯，大燒杯，石棉網，溫度計，
五、方法步驟：
一、溫度對酶活性的影響
1、取三支潔凈的試管，編上號1，2，3，並分別注入2ml可溶性澱粉液。
2、分別向1，2，3號三支試管中各注入1ml新鮮的澱粉酶溶液，搖勻，依次放入沸水，37℃左右的熱水，冰水中，維持各自的溫度5分鍾。
3、分別向1，2，3號三支試管中各滴入一滴碘液，然後搖勻。觀察並記錄這三隻試管中，溶液顏色的變化情況。
二、pH對酶活性的影響
1、取三支潔凈的試管，編上號1，2，3，並分別注入1ml的新鮮的澱粉酶溶液。
2、依次向1號，2號，3號試管中注入蒸餾水，氫氧化鈉溶液，稀鹽酸各1ml並搖勻。
3、分別向1號，2號，3號試管中各注入2ml可溶性澱粉溶液，震盪搖勻。
4、將三支試管的下半部浸到37℃左右的溫水中，保溫5分鍾。
5、向三支試管中各加入2ml斐林試劑，震盪搖勻。
六、實驗現象：
一、溫度對酶活性的影響
1號試管中的液體未變藍，2號和3號試管中的液體變藍，且2號試管藍色比3號試管深。
二、pH對酶活性的影響
2號和3號試管中的液體未變藍，1號試管中的液體變藍。
七、實驗結論：
1、在最適宜的溫度和最適宜的ph條件下，酶的活性最高。
2、溫度和ph偏高或偏低，酶的活性明顯下降。
實驗九：葉綠體中色素的提取和分離
一、實驗目的：
1、初步掌握提取和分離葉綠體中色素的方法。
2、探索葉綠體中有幾種色素。
二、實驗原理：
1、葉綠體中的色素能溶解在丙酮（有機溶劑，酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取葉綠體中色素。
2、色素在層析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子隨層析液在濾紙條上的擴散得快，溶解度低的色素分子隨層析液在濾紙條上的擴散得慢，因而可用層析液將不同的色素分離。
三、實驗材料：
新鮮的綠葉（如菠菜的綠葉），無水乙醇，層析液（由20份在60~90℃下分餾出來的石油醚、2份乙醇和1份苯混合而成。93號汽油也可代用），二氧化硅和碳酸鈣。
四、實驗用具：
乾燥的定性濾紙，試管，棉塞，試管架，研缽，玻璃漏斗，尼龍布，毛細吸管，剪刀，葯勺，量筒（10ml），天平。
五、方法步驟：
（1）稱取5g綠色葉片並剪碎
提取色素 研缽→研磨→漏斗過濾→
（2）加入少量SiO2、CaCO3和5ml丙酮 收集到試管內並塞緊管口
（1）將乾燥的濾紙剪成150px長，25px寬的紙條，剪去一端兩角（使層析液同時到達濾液細線）
制濾紙條
（2）在距剪角一端25px處用鉛筆畫線
（1）用毛細管吸少量的濾液沿鉛筆線處小心均勻地劃一條濾液細線
濾液劃線
（2）乾燥後重復劃2-3次
（1）向燒杯中倒入3ml層析液（以層析液不沒及濾液細線為准）
紙上層析 （2）將濾紙條尖端朝下略微斜靠燒杯內壁，輕輕插入層析液中
（3）用培養皿蓋蓋上燒杯
觀察結果：濾紙條上出現四條寬度、顏色不同的綵帶（如下圖）
最寬：葉綠素a；
最窄：葉綠素b；
相鄰色素帶最近：葉綠素a和葉綠素b；
相鄰色素帶最遠：胡蘿卜素和葉黃素。
六、考點提示：
1、二氧化硅：為了使研磨充分；碳酸鈣：保護色素免受破壞；丙酮：色素的溶劑。
2、擴散最快的是胡蘿卜素（橙黃色），擴散最慢的是葉綠素b（黃綠色）。
3、濾紙上有四條色素帶說明了綠葉中的色素有四種，它們在層析液中的溶解度不同，隨層析液在濾紙上擴散的快慢也不一樣。
4、裁取定性濾紙時，注意雙手盡量不要接觸紙面，以免手上的油脂或其他臟物污染濾紙。
5、制備濾紙條時，要將濾紙條的一端剪去兩角,這樣可以使色素在濾紙條上擴散均勻,便於觀察實驗結果。
6、根據燒杯的高度制備濾紙條，讓濾紙條長度高出燒杯25px ，高出的部分做直角彎折。
7、濾紙上的濾液細線如果觸到層析液，細線上的色素就會溶解到層析液中，就不會在濾紙上擴散開來，實驗就會失敗。
8、畫濾液細線時，用力要均勻，速度要適中
9、研磨要迅速、充分。a.因為丙酮容易揮發; b.為了使葉綠體完全破裂.從而能提取較多的色素;c.葉綠素極不穩定，能被活細胞中的葉綠素酶水解而被破壞。
⑵ 高中生物都有哪些探究性實驗
1.還原糖，脂肪，蛋白質的鑒定，2.探究酶的活性。3.洋蔥細胞的質壁分離與復原。4.葉綠素的提取和分離。3.探究酵母菌的呼吸方式。6.洋蔥根尖分生區細胞有絲分裂的觀察。7.人類遺傳病的調查。8.，dna的提取和堅定。9.製作生態瓶。10.探究土壤中小動物的豐富度。11.研究酵母菌，大小草履蟲種群密度的變化。12.研究生長素促進植物扦插生根的最適濃度。
⑶ 高中生物的實驗方法具體到一些著名實驗
常規實驗方法：
（1）顯微觀察法，如觀察植物細胞有絲分裂、觀察葉綠體和細胞質流動、觀察植物細胞質壁分離和復原實驗等。
（2）觀色法，如觀察動物毛色和植物花色的遺傳等。
（3）放射性同位素標記法（示蹤法），如噬菌體浸染細菌的實驗，用18O2和14CO2追蹤光合作用中氧原子和碳原子轉移途徑的實驗等。
（4）等組實驗法，如小麥澱粉酶催化澱粉水解的實驗，發現生長素的燕麥胚芽鞘實驗等。
（5）加法創意法，如用飼喂法研究甲狀腺激素，用注射法研究動物胰島素和生長激素，用移植法研究性激素等。
（6）減法創意法，如用閹割法、手術摘除法、注射法、器官移植法研究性激素、甲狀腺激素和生長激素的實驗，雌蕊受粉後除去正在發育著的種子等。
（7）雜交實驗法，如孟德爾發現遺傳定律的植物雜交、測交的實驗，小麥的雜交等。
（8）化學分析法，如番茄和水稻對Ca和Si選擇性吸收，葉綠體中色素的提取和分離實驗等。
（9）理論分析法，如大、小兩種草履蟲競爭的實驗，植物根向地生長、莖背地生長的實驗，植物向光性實驗等。
（10）模擬實驗法，如滲透作用的實驗裝置，分離定律的模擬實驗等。
⑷ 高中生物常用的實驗方法有哪些
1．實驗方法
實驗方法是整個實驗設計的精髓,是做好實驗設計的關鍵所在.現將與中學實驗有關的一些最常見的經典的實驗方法匯總如下：
(1)化學物質的檢測方法：
①澱粉——碘液
②還原糖——斐林試劑、班氏試劑
③CO2——Ca(OH)2溶液或酸鹼指示劑
④乳酸——pH試紙
⑤O2——余燼復燃
⑥無O2——火焰熄滅
⑦蛋白質——雙縮脲試劑
⑧染色體——龍膽紫、醋酸洋紅溶液
⑨DNA——二苯胺試劑
⑩脂肪——蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液
(2)實驗結果的顯示方法：
①光合速率——O2釋放量或CO2吸收量或澱粉產生量
②呼吸速率——O2吸收量或CO2釋放量或澱粉減少量
③原子途徑——放射性同位素示蹤法
④細胞液濃度大小——質壁分離
⑤細胞是否死亡——質壁分離
⑥甲狀腺激素作用——動物耗氧量,發育速度等
⑦生長激素作用——生長速度(體重變化,身高變化)
⑧胰島素作用——動物活動狀態
⑨菌量——菌落數或亞甲基藍溶液褪色程度
⑩大腸桿菌——伊紅—美藍瓊脂培養基
(3)實驗條件的控制方法：
①增加水中氧氣——泵入空氣或吹氣或放入綠色植物
②減少水中氧氣——容器密封或油膜覆蓋或用涼開水
③除去容器中CO2——NaOH溶液
④除去葉片中原有澱粉——置於黑暗環境
⑤除去葉片中葉綠素——酒精隔水加熱
⑥除去光合作用對呼吸作用的干擾——給植株遮光
⑦如何得到單色光——棱鏡色散或彩色薄膜濾光
⑧血液抗凝——加入檸檬酸鈉
⑨線粒體提取——細胞勻漿離心
⑩骨的脫鈣——鹽酸溶液
⑾滅菌方法——微生物培養的關鍵在於滅菌,對不同材料,滅菌方法不同：培養基用高壓蒸氣滅菌；接種環用火焰灼燒滅菌；雙手用肥皂洗凈,擦乾後用75％酒精消毒；整個接種過程都在實驗室無菌區進行.
(4)實驗中控制溫度的方法：
①還原糖鑒定：水浴煮沸加熱
②酶促反應：水浴保溫
③用酒精溶解葉中的葉綠素：酒精要隔水加熱
④DNA的鑒定：水浴煮沸加熱
⑤細胞和組織培養以及微生物培養：恆溫培養
2．斐林試劑、班氏試劑與尿糖試紙
這三種物質均可用來檢驗含醛基的有機物的存在,在醫學上用來檢驗糖尿病,其原理均是利用了Cu2+的氧化性把醛基氧化,但成分略有不同：
斐林試劑：即硫酸銅、氫氧化鈉和酒石酸鉀鈉組成的藍色混合溶液.分為斐林試劑A和斐林試劑B,A為CuSO4溶液,B為氫氧化鈉和酒石酸鉀鈉的混合溶液,使用時將A、B等體積混合即成斐林試劑.
班氏試劑：即硫酸銅、碳酸鈉和檸檬酸鈉組成的混合液,又叫本尼迪克特(Benedict)試劑,它與醛反應的結果是與斐林試劑一致的,只是比斐林試劑更穩定,所以在臨床化驗中更常使用.
尿糖試紙：又叫硫酸銅試紙,呈白色,帶藍色斑點,用於糖尿病患者的尿糖測試.每片含硫酸銅20毫克,枸櫞酸300毫克,碳酸鈉80毫克,氫氧化鈉235毫克.尿糖試紙法快速、方便,試紙的正確使用方法為：將試紙條放在尿液中浸濕,一秒鍾後取出,在一分鍾內觀察試紙的顏色,並與標准色板對照,根據不同的顏色來確定尿糖陽性的程度.
3．斐林試劑和雙縮脲試劑的比較
相同點：①都由NaOH溶液和CuSO4溶液構成；
②斐林試劑甲液和雙縮脲試劑A都為0．1g/mLNaOH溶液.
不同點：①CuSO4溶液濃度不一樣：斐林試劑乙液為0．05g/mLCuSO4溶液,
雙縮脲試劑B為0．01g/mLCuSO4溶液.
②配製比例不一樣.
③使用方法不一樣：斐林試劑是甲、乙液一起混合後再使用,
雙縮脲試劑則是先向待鑒定材料加入A試劑搖勻後,再加入試劑B.
④鑒定的對象不一樣：斐林試劑鑒定的是還原糖,雙縮脲試劑鑒定的是蛋白質.
⑤反應本質及顏色反應不一樣.
4．蘇丹Ⅲ染液與蘇丹Ⅳ染液的比較
都是用來鑒定脂肪.蘇丹Ⅳ染液更易溶於脂肪,所以染色更深,同時要求染色時間更短.
生物學中常用的試劑：
1、斐林試劑： 成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.05g/ml CuSO4（乙液）.用法：將斐林試劑甲液和乙液等體積混合,再將混合後的斐林試劑倒入待測液,水浴加熱或直接加熱,如待測液中存在還原糖,則呈磚紅色.
2、班氏糖定性試劑：為藍色溶液.和葡萄糖混合後沸水浴會出現磚紅色沉澱.用於尿糖的測定.
3、雙縮脲試劑：成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.01g/ml CuSO4（乙液）.用法：向待測液中先加入2ml甲液,搖勻,再向其中加入3~4滴乙液,搖勻.如待測中存在蛋白質,則呈現紫色.
4、蘇丹Ⅲ：用法：取蘇丹Ⅲ顆粒溶於95%的酒精中,搖勻.用於檢測脂肪.可將脂肪染成橘黃色（被蘇丹Ⅳ染成紅色）.
5、二苯胺：用於鑒定DNA.DNA遇二苯胺（沸水浴）會被染成藍色.
6、甲基綠：用於鑒定DNA.DNA遇甲基綠（常溫）會被染成藍綠色.（甲基綠使DNA呈現綠色,吡羅紅使RNA呈現紅色.）
7、50%的酒精溶液：在脂肪鑒定中,用蘇丹Ⅲ染液染色,再用50%的酒精溶液洗去浮色.
8、75%的酒精溶液：用於殺菌消毒,75%的酒精能滲入細胞內,使蛋白質凝固變性.低於這個濃度,酒精的滲透脫水作用減弱,殺菌力不強；而高於這個濃度,則會使細菌表面蛋白質迅速脫水,凝固成膜,妨礙酒精透入,削弱殺菌能力.75％的酒精溶液常用於手術前、打針、換葯、針灸前皮膚脫碘消毒以及機械消毒等.
9、95%的酒精溶液：冷卻的體積分數為95%的酒精可用於凝集DNA.
10、15%的鹽酸：和95%的酒精溶液等體積混合可用於解離根尖.
11、龍膽紫溶液：(濃度為0.01g/ml或0.02g/ml)用於染色體著色,可將染色體染成紫色,通常染色3~5分鍾.（也可以用醋酸洋紅染色）
12、20%的肝臟、3%的過氧化氫、3.5%的氯化鐵：用於比較過氧化氫酶和Fe3+的催化效率.（新鮮的肝臟中含有過氧化氫酶）
13、3%的可溶性澱粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鮮澱粉酶溶液：用於探索澱粉酶對澱粉和蔗糖的作用實驗.
14、碘液：用於鑒定澱粉的存在.遇澱粉變藍.
15、丙酮：用於提取葉綠體中的色素.
16、層析液：（成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成,也可用93號汽油）可用於色素的層析,即將色素在濾紙上分離開.
17、二氧化硅：在色素的提取的分離實驗中研磨綠色葉片時加入,可使研磨充分.
18、碳酸鈣：研磨綠色葉片時加入,可中和有機酸,防止在研磨時葉綠體中的色素受破壞.
19、0.3g/mL的蔗糖溶液：相當於30%的蔗糖溶液,比植物細胞液的濃度大,可用於質壁分離實驗.
20、0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液：與雞血混合,防凝血.
21、氯化鈉溶液：①可用於溶解DNA.當氯化鈉濃度為2mol/L、 0.015mol/L時DNA的溶解度最高,在氯化鈉濃度為0.14 mol/L時,DNA溶解度最低.②濃度為0.9%時可作為生理鹽水.