微生物檢驗怎麼包裹試管

『壹』 微生物檢驗標本的正確採集及注意事項

微生物檢驗標本的正確採集及注意事項

正確採集臨床微生物標本，直接影響到微生物培養鑒定結果。可靠的檢驗結果可以指導臨床診斷治療，為臨床科學用葯和成功的感染控制提供依據，是正確、合理使用抗菌葯物，延緩細菌耐葯，減少抗菌葯物濫用和監測醫院感染的第一步，也是最重要的一步。下面是我為大家帶來的微生物檢驗標本的正確採集及注意事項的知識，歡迎閱讀。

一、 血液標本的採集

1、 採集方法

（1）75%酒精清潔局部皮膚。

（2）待皮膚干後，再用2%—2。5%碘酒從穿刺點中心部位開始消毒，范圍不應小於5cm（直徑），且不能用手指觸摸消毒後的皮膚。

（3）皮膚碘酒干後（約1min），穿刺採集血液，采血量成人5—10ml，嬰幼兒1—5ml。

（4）采血後立即在床旁接種培養瓶，並迅速輕搖，充分混勻防止凝固，但又不可劇震以防溶血。

2、注意事項

（1）懷疑菌血症應盡早采血，體溫上升（38。5℃）采血可提高陽性率，但也要防止因等待而延誤時機。

（2）對已經使用抗菌葯物，而又不能停葯者，也應在下次用葯前采血。切忌不要在靜滴抗菌葯物的靜脈處採取血標本，也不能從靜脈導管及動脈插管中取血。

（3）培養基與血液之比以10：1為宜，以稀釋血液中的抗生素，抗體等殺菌物質;有人主張對接受抗菌葯物治療的病人，培養基與采血量之比可為20：1或大於這個比例。

（4）近年研究表明，將血液注入血培養基前，更換針頭反而易導致污染。

（5）每例至少採血兩次，間隔0。5—1h，以利於提高陽性率和區分感染菌與污染菌。

（6）疑為細菌性心內膜炎及布魯氏病的病人，以肘動脈或股動脈采血為宜，除在發熱期采血外，並要多次采血（24h 3—4次）和增加采血量（可增加10ml）。

（7）采血後立即送檢，如不能立即送檢可置室溫，而不能放置冰箱。

（8）如臨床表現很似敗血症，而血培養多次陰性者，提示考慮厭氧菌和真菌感染的可能。

二、骨髓的採集

1、採集方法

在病灶部位或髂前（後）上脊處嚴格消毒後抽取骨髓1ml，注入血培養瓶內。

2、注意事項

（1）骨髓內含有大量的單核巨噬細胞系統的細胞，因而骨髓培養對傷寒病人的.診斷較血培養優越。

（2）用於懷疑細菌性骨髓炎病人。

三、靜脈導管標本的採集

1、採集方法

（1）常規導管部位皮膚消毒。

（2）無菌方法從病人體內拔出靜脈導管，剪下導管尖端5cm，放入無菌瓶中。

（3）立即（15min內）送檢，避免標本乾燥。

2、注意事項

（1）剪下的導管立即接種血平皿，可提高陽性率。

（2）肉湯反復沖洗導管腔內，沖洗液做定量培養。

（3）有人將剪下的導管置肉湯增菌液或培養瓶中，此法不能區分導管感染菌與少量定植菌。

（4）衛生部在《醫學感染診斷標准》（試行）（2001年1月3日施行）中規定：導管管尖培養其接種方法應取導管尖端5cm，在血平板表面往返滾動一次。細菌≥15cfu/平板，即為陽性。

四、呼吸道

1、痰標本

（1）採集方法

①清晨起床後用涼開水漱口多次，以除去口腔內大量雜菌，用力咳出肺深部的膿痰，置於清潔乾燥容器中送檢。

②痰量極少者可用45℃ 3%—10%的氯化鈉溶液約25ml霧化。對於咯痰量少的幼兒，可輕輕壓迫胸骨上部的氣管，當其咯痰後用無菌棉棒採集標本。

③咳嗽無力或昏迷病人，可用吸痰管經鼻腔或口腔經氣管腔內吸引痰液送檢。

④氣管切開者可以深入透氣孔中取痰。

⑤可用支氣管鏡直接在病灶部位採集高濃度的病原菌。

⑥用無菌導管經鼻腔插入氣管鏡內，緩慢注入無菌蒸餾水5ml，取出導管。留取患者在3h內咳出的痰液，放入無菌容器中送檢。

⑦胃內采痰法。無自覺症狀的結核病人。有時可把痰誤咽入胃內，因而可採用胃內溶物做結核菌培養，其陽性結果比咯痰高10%左右，該方法於晨起空腹時，把滅菌的胃管，從鼻腔送入胃內，用20ml注射器抽取胃液。

（2）注意事項

①痰標本的採集以晨痰為准，此時患者痰量較多且含菌量也多。

②標本採集後立即送檢，若不能及時送檢者，可暫存2—8℃冰箱。若晚1—2h接種，會失去苛氧菌，並使得革蘭陰性菌過分生長。

③可接受的標本：痰;支氣管灌洗液，支氣管刷，支氣管活檢;肺吸出物和肺活檢。不能接受的標本：唾液;24h留的痰（結核桿菌培養除外）;拭子。

④ 痰標本的質量評價：（用顯微鏡篩選）在低倍鏡下，檢查鱗狀上皮細胞，至少10個視野，集中在有白細胞處，合格標本為白細胞與鱗狀上皮細胞比例大於2：1。

2、鼻拭子

（1）用濕的拭子（生理鹽水）;

（2）需插兩個鼻孔;

（3）深入3。3cm左右，轉動4—5次;

（4）以上用於診斷金黃色葡萄球菌暴發時的鼻帶菌者。

3、咽拭子、口腔拭子

（1）採集方法（到細菌室取專用拭子）

①患者清水漱口後，由檢查者將其舌外拉，用棉拭子將咽後壁或懸雍垂的後側反復擦拭數次;

②化膿性扁桃體炎、口腔念珠菌病時，直接用棉拭子在病灶部位擦拭;

③插入運送培養基中立即送檢，防止乾燥。

（2）注意事項

①棉拭子應避免觸及舌、口腔黏膜和唾液;

②採集標本前數小時不可用消毒葯物漱口或接觸病灶局部。

五、胃腸道

1、糞便

（1）採集方法

選取膿血、黏液糞便2—3g，液體糞便取絮狀物1—2ml。盛於滅菌瓶中或蠟紙盒中及時送檢。

（2）注意事項

①標本要採集新鮮的，陳舊標本影響陽性檢出率;

②切忌糞尿混合;

③若要分離阿米巴，標本要立即送檢並注意保溫;

④運送培養基可提高陽性率;

⑤分離難辨梭菌時需選不成形或水樣便;

⑥霍亂弧菌、大腸桿菌Ο157感染的腹瀉便則為水樣便或血性便;

⑦標本在病理早期或治療前採集;

⑧一般認為用抗菌葯三天後，標本培養病原菌陰性。

2、肛拭子

在無法獲得糞便的情況下，可用經無菌甘油水或無菌生理鹽水濕潤的肛拭子插入肛門4—5cm（幼兒2—3cm）處，輕輕旋轉擦取直腸表面黏液後取出，置運送培養基中送檢。

六、泌尿道

根據衛生部《醫學感染診斷標准》（試行）通知，泌尿系統臨床診斷為：患者出現尿頻、尿急、尿痛等尿路刺激症狀，或有下腹觸痛、腎區叩痛、伴或不伴發熱，並具有下列情況之一：

（1）尿檢白細胞男性≥5個/高倍視野，女性≥10個/高倍視野，插導尿管患者應結合尿培養;

（2）臨床已診斷為泌尿道感染，或抗菌治療有效而認定的泌尿道感染。

1、中段尿

（1）採集方法

①女性 采樣前用肥皂水或0。1%的高錳酸鉀溶液沖洗外陰，用手指陰x分開排尿，棄其前段尿，不終止排尿，留取中段尿10ml於滅菌容器內。

②男性 用肥皂水清洗尿道口，或0。1%的碘伏溶液消毒尿道口，滅菌紗布擦乾，上翻包皮，棄其前段尿，不終止排尿，留取中段尿10ml於滅菌容器內。

（2）注意事項

①導尿雖然可以減少污染，但是多次重復導尿可以造成逆行性感染，因此近年來大多採用中段尿。

②女性病人最好採取膀胱截石位由護士採取標本，減少污染。

③採集標本以晨起第一次尿液為佳。

④採集標本後，若不能在1h內送檢，暫放4℃冰箱，但不能超過8h。若尿液標本在室溫下放置超過2h，即使接種培養結果細菌數≥104 cfu/ml獲103cfu/ml，也不能作為診斷依據，應重新留取標本送檢。

⑤疑為尿道炎時可將最初3—4ml尿液收集在滅菌容器內。該尿中即使有少數細菌，如反復檢查為同一細菌，也應考慮為病原菌。

⑥兒童在多數情況下，僅沖洗外陰是不夠的，故採集標本較為困難。如果尿內細菌明顯增多，可以高度懷疑為尿路感染，無菌則可否定。

⑦若細菌培養結果為兩種或兩種以上細菌，需考慮污染可能，建議重新留取標本送檢。

⑧尿液中不得加入防腐劑，消毒劑否則影響陽性檢出率。

2、膀胱穿刺採集法

避免污染是很困難的，培養結果與病情不符時，或尿厭氧菌培養，或嬰幼兒中段尿採集困難時，可以用恥骨上穿刺膀胱內采尿。

3、留置導尿者採集法

拔去閉式引流的集尿袋，棄去導尿管前段尿液，留無污染的膀胱內尿液10ml送檢。不可從集尿袋下端留取標本。

七、腦脊液

1、採集方法

由臨床醫師以無菌方法收集腦脊液3—5ml（細菌1ml，真菌2ml抗酸桿菌2ml，病毒1ml）盛於無菌試管或小瓶中立即送檢。

2、注意事項

（1）採集標本後立即送檢，因腦膜炎奈瑟菌離體後迅速自溶，肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌也易死亡;

（2）疑為上述細菌感染時，應注意保溫，不可置冰箱或低溫保存。

八、膽汁

1、十二指腸引流法

在無菌操作下，將十二指腸導管吞咽至十二指腸乳頭部（距齒65—70cm）時，收集A液（來自總膽管，為橙黃或金黃色），隨之注入25%硫酸鎂溶液40ml，經1—2min後再採取B液（來自膽囊，為棕黃綠色），隨後收取C液（來自肝膽管，為檸檬色），一般認為B液做細菌培養意義較大。

2、膽囊穿刺法

膽囊造影術時，可同時採取膽汁。

3手術採取法

由總膽管、膽囊直接穿刺採取膽汁。

以上採集之標本應立即送檢，否則置於4℃冰箱內，採集時需小心，避免被唾液、十二指腸液細菌污染。

九、穿刺液標本

穿刺液包括胸水、腹水、心包液、關節液、鞘膜液。

1、採集方法

由臨床醫師行穿刺術抽取。胸腹水可收集5—10ml，心包液、關節液收集2—5ml，置於無菌含抗凝劑的試管或小瓶中，充分混勻後，立即送檢。抗凝劑10%EDTA二鈉鹽，標本與抗凝劑之比10：1。

2、注意事項

⑴標本採集應在患者用葯之前或停止用葯1—2天後進行;

⑵不能立即送檢可置4℃冰箱保存;

⑶疑為淋病性關節炎患者的關節液，採集後立即送檢，或床旁培養為佳;

⑷不能用棉拭子浸蘸標本送檢。

十、膿汁及病灶分泌物

1、傷口

⑴表面傷口拭子採集方法及注意事項

① 僅限於皮膚與皮下組織，包括手術切口、褥瘡潰瘍、新生兒臍炎、嬰兒膿瘡病。

②用無菌生理鹽水或75%的酒精擦去病灶表面滲液;

③用無菌棉拭子抹去及較深部的膿汁分泌物或組織送檢;

④採集褥瘡潰瘍標本時應採集褥瘡邊緣的膿性分泌物，拭子放在運送培養基中立即送檢，不要採集創口表面的滲液。

⑵傷口、膿腫、竇道、壞疽組織採集方法及注意事項

①閉鎖性膿腫用碘酒和酒精消毒皮膚後，用滅菌注射器穿刺抽取全部膿液送檢，疑為厭氧菌感染時，排去針管內空氣將針頭插入滅菌橡膠塞內送檢;

②傷口處若有膿及滲出物要用無菌棉簽深入各種竇道中擦拭，用小刀刮取，穿刺抽吸或手術切除獲得深處傷口標本;

③當創傷出血時，敷有葯物在2h以內及燒傷在12h內均不應採集標本，此時獲得陽性結果機會甚少。

④採集標本注意觀察膿汁及分泌物性狀、色澤、氣味等。可為培養鑒定提供依據。

⑶燒傷創面

①燒傷創面需要膿性分泌物，焦痂迅速分離變棕黑、黑或紫羅蘭色，燒傷邊緣水腫。患者發燒>38℃或低體溫<36℃，合並低血壓。

②用無菌生理鹽水沖洗傷口創面。

③由於創面部位不同，細菌種類也不盡相同，要用滅菌棉拭子採集多個部位的炎症區送檢。

④採集痂下變黑或變性的不健康區邊緣或引流液等做定量培養及組織活檢。

2、厭氧傷口拭子

⑴厭氧專用棉棒或玻璃棒觸及深部膿汁;

⑵可用注射器抽吸，排去針管內空氣將針頭插入滅菌橡膠塞內送檢;

⑶立即送檢，送檢過程中必須保持在無氧條件;

⑷不宜做厭氧菌培養的有痰、喉拭子、鼻咽拭子、齒齦拭子、直腸、陰道和宮頸拭子以及回腸、結腸造瘺術的流出物，胃、小腸及大腸內容物等。

3、尿道口分泌物拭子

⑴男性用無菌紗布擦拭和清洗尿道口，然後採取從尿道口溢出的膿性分泌物;

⑵採集前列腺液時，先將尿道、膀胱沖洗，然後從肛門用手指按摩前列腺，促使前列腺液溢出;

⑶女性病人先用滅菌紗布或棉拭子仔細擦拭或清洗尿道口，然後從陰道內診壓迫尿道，使分泌物溢出;

⑷取子宮頸分泌物，先用內窺鏡擴張陰道，然後從宮頸口用滅菌棉拭子採取分泌物，盡量避免被陰道宮頸附近正常菌群的污染。

4、蜂窩織炎

⑴用無菌生理鹽水或酒精消毒皮膚;

⑵用細針在炎症最顯著處穿刺吸引;

⑶抽少量滅菌生理鹽水在針管內;

⑷注入無菌試管內送檢。

5、組織標本

⑴活體組織採取的微量標本，可直接接種在培養基內;

⑵表淺組織可直接用棉拭子擦拭、小刀颳去;

⑶較大組織塊的表面可採用燒灼或浸入沸水中5—10s，然後用滅菌剪刀切開，取其中的膿汁;

⑷深部組織標本可經皮膚穿刺或手術切取送檢;

⑸組織標本不可用福爾馬x固定;

⑹有時也可將沾有膿汁的最內層敷料放入無菌平皿內送檢。

十一、眼標本採集

⑴一般細菌，以無菌棉拭子採集眼分泌物，尤其膿性分泌物;

⑵沙眼衣原體，首先擦去眼結膜上面的分泌物，然後用無菌小刀刮取穹窿部及眼結膜上皮細胞，用鏈黴素處理後備用;

⑶對於剛治療或葯物沖洗過的患者最好12—24h後採集標本;

⑷對於淚囊炎患者可稍加擠壓後以無菌棉拭子採集標本。

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『貳』 微生物檢驗細菌的接種方法

微生物檢驗細菌的接種方法

常用的細菌接種方法有平板劃線分離法、斜面接種法、穿刺接種法、液體和半固體接種法、塗布接種法等。下面是我為大家帶來的關於微生物檢驗細菌的接種方法的知識，歡迎閱讀。

一、平板劃線分離法

平板劃線分離法:是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環在平板培養基表面，通過分區劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經培養後生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當作待分離微生物的純種。有時這種單菌落並非都由單個細胞繁殖而來的，故必須反復分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養基表面多次作“由點到線”稀釋而達到分離目的的。

為方便劃線，一般培養基不宜太薄，每皿約傾倒20ml培養基，培養基應厚薄均勻，平板表面光滑。劃線分離主要有分區劃線法和連續劃線法兩種(如圖1， A、B)。

分區劃線法是將平板分四區，故又稱四分區劃線法。劃線時每次將平板轉動60~70°劃線，每換一次角度，應將接種環上的菌燒死後，再通過上次劃線處劃線;

另一種連續劃線法是從平板邊緣一點開始，連續作波浪式劃線直到平板的另一端為止，當中不需灼燒接種環上的菌。

1)連續劃線法

將瓊脂平皿半開蓋倒置於培養箱內至無冷凝水，接種環於酒精燈外焰燒至紅透，接種棒也要充分灼燒，最後再集中燒接種環至紅。

輕輕搖勻待接種試管，左手手心托待接種試管底側部，右手執接種環，右手小指拔下試管塞，於酒精燈附近將接種環伸進試管，稍候，再插入待接接種液中，蘸一下，取滿一環，抽出、燒塞、蓋蓋、放回試管架。或將接種環通過稍打開皿蓋的縫隙伸入平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環冷卻，然後以無菌操作接種環直接取平板上待分離純化的菌落。

於靠近酒精燈處打開平皿蓋約30°，右手將環伸進平皿，將菌種點種在平板邊緣一處，輕輕塗布於瓊脂培養基邊緣(如圖2)，抽出接種環，蓋上平皿蓋，然後將接種環上多餘的培養液在火焰中灼燒，打開平皿蓋約30°伸入接種環，待接種環冷卻後，再與接種液處輕輕接觸，開始在平板表面輕巧滑動劃線，接種環不要嵌入培養基內劃破培養基，線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前後兩條線重疊，劃線完畢，關上皿蓋。灼燒接種環，待冷卻後放置接種架上。培養皿倒置於適溫的恆溫箱內培養(以免培養過程皿蓋冷凝水滴下，沖散已分離的菌落)。培養後在劃線平板上觀察沿劃線處長出的菌落形態，鏡檢後再接種斜面。

2)分區劃線法

取菌、接種、培養方法與“連續劃線法”相似。

分區劃線法分離時平板分四個區，故又稱四分區劃線法。其中第4區是單菌落的主要分布區，故其劃線面積應最大。為防止第4區內劃線與1、2、3區線條相接觸，應使4區線條與1區線條相平行，這樣區與區間線條夾角最好保持120°左右。

先將接種環沾取少量菌在平板1區劃3~5條平行線，取出接種環，左手關上皿蓋，將平板轉動60~70°，右手把接種環上多餘菌體燒死，將燒紅的接種環在平板邊緣冷卻，再按以上方法以1區劃線的菌體為菌源，由1區向2區作第2次平行劃線。第2次劃線完畢，同時再把平皿轉動約60~70°，同樣依次在3、4區劃線。劃線完畢，灼燒接種環，關上皿蓋，同上法培養，在劃線區觀察單菌落。

二、斜面接種法

該法主要用於單個菌落的純培養、保存菌種或觀察細菌的某些特性。

(1)左手平托兩支試管，拇指按住試管的底部。外側一支試管是斜面上長有菌苔的'菌種試管，內側一支是待接的空白斜面，兩支試管的斜面同時向上。用右手將試管塞旋松，以便在接種時容易拔出。

(2)右手拿接種環(如握毛筆一樣)，在火焰上先將環端燒紅滅菌，然後將有可能伸入試管的其餘部位也過火滅菌.

(3)將兩支試管的上端並齊，靠近火焰，用右手小指和掌心將兩支試管的試管塞一並夾住拔出，試管塞仍夾在手中，然後讓試管口緩緩過火焰。注意不得將試管塞隨意丟於桌上受到沾污，試管口切勿燒得過燙以免炸裂。

(4)將已灼燒的接種環伸入外側的菌種試管內。先把接種環的先端觸及無菌苔的培養基上使其冷卻(如果操作迅速，此時接種環尚未完全冷卻)。再根據需要用接種環沾取一定量的菌苔，注意勿刮破培養基。將沾有菌苔的接種環迅速抽出試管，注意勿使接種環碰到管壁或管口上。

(5)迅速將沾有菌種的接種環伸入另一支待接斜面試管的底部，輕輕向上劃線(直線或曲線，根據需要確定)，勿劃破培養基表面。

(6)接好種的斜面試管口再次過火焰，試管塞底部過火焰後立即塞入試管內。

(7)將沾有菌苔的接種環在火焰上燒紅滅菌。先在內焰中燒灼，使其乾燥後，再在外焰中燒紅，以免菌苔驟熱，會使菌體爆濺，造成污染。

(8)放下環後，再將試管塞旋緊，在試管外面上方距試管口2～3cm處貼上標簽。

(9)28℃～37℃恆溫培養。

斜面接種方法及無菌操作過程如下具體操作過程見圖3。

三、穿刺接種法

用接種針經火焰滅菌，沾取少量菌種，垂直地穿入試管固體培養基中心至底部，然後將挑起菌落的接種針平行於管壁插入瓊脂斜面底部、沿著原接種線將針拔出、燒試管塞和試管口、塞上試管塞，再將接種針上殘留的菌體在火焰上燒掉。要做到手穩、動作輕巧快速。見下圖4。(a:垂直接種法，b：水平接種法)

四、液體和半固體接種法

1)液體接種法

包括從外面菌種接人培養液，或從液體菌種接入液體培養液，兩種情況都可以用接種環接種。但在培養量比較大的情況下，液體接種宜採用移液管接種，要求無菌操作。

左手持試管，右手將燒灼過的接種環伸入菌種管，待冷卻後，取菌液一環，立即移入培養基管中，在接近液面的管壁上輕輕研磨，然後將試管稍傾斜，並沾取少許液體調和，使菌液混合於培養基中

2)半固體培養基接種法

將燒灼過的接種針插入菌種管冷卻後，沾取菌液少許，立即垂直插入半固體培養基的中心至接近於管底處，但不可直刺至管底，然後循原路退出(圖5，B)。管口通過火焰，塞上棉塞，接種針燒灼滅菌後放下。

將上述已接種好的培養物， 37℃度恆溫箱內培養，24小時後取出觀察結果。

五、塗布接種法

將瓊脂平皿半開蓋倒置於培養箱內至無冷凝水，用無菌移液管吸取菌懸液0.1mL，滴加於培養基平板上，右手持無菌玻璃塗棒，左手拿培養皿，並用拇指將皿蓋打開一縫，在火焰旁右手持玻璃塗棒與培養皿平板表面將菌液自平板中央均勻向四周塗布擴散，切忌用力過猛將菌液直接推向平板邊緣或將培養基劃破。接種後，將平板倒置於恆溫箱中，培養觀察。

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『叄』 實驗室微生物檢驗需要注意哪些問題

微生物檢驗無菌操作的注意事項有很多細節，日常的微生物檢驗過程中要注意無菌操作，除了要在潔凈台和操作器皿上的消毒，還需要注意人員衛生和環境的衛生。

【操作技巧】

進行培養時，動作要准確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動，增加污染機會。不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。為拿取方便，工作檯面上的用品要有合理的布局，原則上應是右手使用的東西放置在右側，左手用品在左側，酒精燈置於中央。工作由始至終要保持一定順序性，組織或細胞在未做處理之前，勿過早暴露在空氣中。同樣，培養液在未用前，不要過早開瓶;用過之後如不再重復使用，應立即封閉瓶口直立可增加落菌機會。吸取營養液、PBS、細胞懸液及其它各種用液時，均應分別使用吸管，不能混用，以防擴大污染或導致細胞交叉污染。工作中不能面向操作野講話或咳嗽，以免唾沫把細菌或支原體帶入工作檯面發生污染。操作前用酒精擦拭超凈檯面及雙手。手或相對較臟的物品不能經過開放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液時如吸管尖碰到瓶口，則應將吸管丟掉。

【培養前准備】

在開始實驗前要制定好實驗計劃和操作程序。有關數據的計算要事先做好。根據實驗要求，准備各種所需器材和物品、清點無誤後將其放置操作場所(培養室、超凈台)內，然後開始消毒。這可以避免開始實驗後.囚物品不全往返拿取而增加污染機會。

【火焰消毒】

在無菌環境進行培養或做其它無菌工作時，首先要點燃酒精燈或煤氣燈。以後一切操作，如按裝吸管帽、打開或封閉瓶口等，都需在火焰近處並經過燒灼進行。但要注意：金屬器械不能在為焰中燒的時間過長，以防退火，燒過的金屬鑷要待冷卻後才能挾取組織，以免造成組織損傷。吸取過營養液後的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管頭中營養液能燒焦形成炭膜，再用時會把有害物帶入營養液中。開啟、關閉長有細胞的培養瓶時，火焰滅菌時間要短。防止因溫度過高燒死細胞。另外膠塞過火焰時也不能時間長，以免燒焦產生有毒氣體，危害培養細胞。

【洗手和著裝】

原則上和外科手術相同。平時僅做觀察不做培養操作時，可穿裝細胞培養室內紫外線照射30min的清潔工作服。在利用超凈台工作時，因整個前臂要伸入箱內，應著長袖的清潔工作服，並於開始操作前要用75%酒精消毒手。如果實驗過程中手觸及可能污染的物品和出入培養室都要重新用消毒液洗手。進入原代培養室需徹底洗手還要戴口罩、著消毒衣帽。

【操作台消毒】

體外培養細胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是決定培養成功或失敗的首要條件。即便使用設備完善的實驗室。若實驗者粗心大意，技術操作不規范,也會導致污染。因而.為在一切操作中為最大可能的保證無菌.每一項工作都必須做到有條不紊和完全靠。無菌培養室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面—次(拖布要專用).紫外線照射消毒30-50min，超凈工作台檯面每次實驗前要用75%酒精擦洗。然後紫外線淌毒30min。在工作檯面消毒時切勿將培養細胞和培養用液同時照射紫外線，消毒時工作檯面上用品不要過多或重疊放置.否則會遮擋射線降低消毒效果。—些操作用具如移液器、廢液缸、污物盒、試管架等用75%酒精擦洗後置於台內同時紫外線消毒。

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『肆』 微生物實驗，無菌操作，斜面接種操作中，小試管口在哪些時候、哪些情況下

首先，接種環是要完全灼燒滅菌的。我們一般做接種挑取菌落的操作，是在打開試管塞時，讓試管塞和試管口過過火焰，不像接種環燒得那麼仔細。然後，挑取時，把接種環靠在試管壁上冷卻之後，保持試管口在無菌區，挑取目的菌。挑取結束，再次將試管塞和試管口過火灼燒，之後蓋上試管塞。斜面接種時，沒有需要灼燒的儀器，但是，要保持接種過程在無菌區內。並且，操作時間越短，暴露在空氣中的時間越短，污染幾率越小。這里，考慮到要縮短暴露在空氣中的時間，所以，有的老師不會刻意去燒試管。所謂無菌區也只是相對而言的。。。

你說的兩種做法其實都可行，只要結果是不染菌的，就是沒錯的。但是如果是筆考答題，硬要有個對錯的話，還是灼燒試管的做法最妥當。

『伍』 微生物檢驗的標本採集和運送原則

微生物檢驗的標本採集和運送原則

正確的標本採集和及時送檢是保證細菌學檢驗質量的關鍵 !其目的是要捕捉到與感染相關的病原菌並保持其活性，同時盡可能的減少其它與感染無關細菌的干擾。下面是我為大家帶來的關於微生物檢驗的標本採集和運送原則的知識，歡迎閱讀。

采樣時機

抗生素使用前(停用抗生素3至5天或下次用葯前)采樣

采樣方法

採集無菌部位的標本應嚴格無菌操作，非無菌部位盡量減少正常菌群的污染，采樣量足。

采樣容器

專用的無菌，防滲漏，有蓋，無酸、鹼、防腐劑及消毒劑污染。

送檢

盡快送檢，一般不超過2小時。

若不能及時送檢可於4-8℃保存，但對可疑淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌等對外界環境敏感的苛養菌感染的患者標本應室溫保存。

當標本量小於1ml時應於15～30分鍾內送檢，防止揮發和乾燥。

微生物檢查的標本採集和運送原則

1.發現感染應及時採集微生物標本作病原學檢查。

2.盡量在抗菌葯物使用前，或停葯3至5天後採集標本，如不能停用抗菌葯物，應於下次抗菌葯物應用前採集。應在感染的急性期或傷口局部治療前採集標本。

3.選擇正確的解剖部位，並以適當的技術、方法與容器收集足量的標本。

4.采樣時應嚴格執行無菌操作，將污染可能降至最低。

5.收集真正感染的病灶處的`標本，且避免鄰近區域常居菌群的污染。

6.採用專用無菌容器收集標本。容器須滅菌處理，防止滲漏，但不得使用消毒劑。標本中不可添加防腐劑。

7.采樣後應立即送檢，最好在2h內。如不能及時送檢，應將標本置於適當的儲存環境待送，但不超過24小時。對可疑淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌等對外界環境敏感的苛養菌感染的患者標本應室溫保存。當標本量小於1ml時應於15～30分鍾內送檢，防止揮發和乾燥。

8.盡量不要以一般棉花拭子收集標本，應使用專用的纖維拭子。

9.每份標本都應貼上標簽並標明必要信息，在檢驗申請單上填寫足夠的有關臨床資料。(要標明病區、病人姓名、感染狀況、近期抗菌葯物使用情況、標本來源、檢驗目的、採集部位、採集及送檢時間等)

10.同一天同一檢測目的、相同標本(血液標本除外)一般只需送檢一次(份)。塗片檢查最好和細菌培養同時做!

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