㈠ 生物安全櫃的適用范圍
1、生物安全櫃保護對象
樣品、操作人員、環境
2、生物安全櫃應用領域
A2/B2：組織培養、細胞培養、血液元素分析、QA/QC、遺傳基因工程、抗腫瘤葯物制劑；
B2：揮發性有毒有害化學物質、微量的放射性物質、有毒粉塵和懸浮物質。
3、主要結構與配置
1、結構：電源開關、送排風速感測器、送排風高效過濾器、風機、紫外燈、保險絲座、不銹鋼工作腔、下支架、電氣箱、照明、水氣埠、污口閥、箱體、操作面板、前窗、集液槽、負壓通道、可調地腳、萬向腳輪。
2、配置：直流電機、節能模式、顯示屏、插座（含備用）、水氣閥門、紫外燈預約開啟、前窗、全部開啟及任意定位升降（上下限報警系統）、側窗、支架、人機對話功能。
4、生物安全櫃工作原理
主要是將櫃內空氣向外抽吸，使櫃內保持負壓狀態，通過垂直氣流來保護工作人員；外界空氣經高效空氣過濾器( high-efficiency particulate air filter, HEPA過濾器)過濾後進入安全櫃內，以避免處理樣品被污染；櫃內的空氣也需經過HEPA過濾器過濾後再排放到大氣中，以保護環境。SICOLAB總結八個字「吸入、下降、循環、外排」。
五、生物安全櫃的選用
1、一級生物安全櫃
一級生物安全櫃可保護工作人員和環境而不保護樣品。
其氣流原理和實驗室通風櫥基本相同，不同之處在於排氣口安裝有HEPA過濾器，將外排氣流過濾進而防止微生物氣溶膠擴散造成污染。
一級生物安全櫃本身無風機，依賴外接通風管中的風機帶動氣流，由於不能保護櫃內產品，目前較少使用。
2、二級生物安全櫃
二級生物安全櫃是目前應用最為廣泛的櫃型。
按照《中華人民共和國醫葯行業標准YY0569-2005生物安全櫃》中的規定，二級生物安全櫃依照入口氣流風速、排氣方式和循環方式可分為4個級別：A1型，A2型，B1型和B2型。
所有的二級生物安全櫃都可提供工作人員、環境和產品的保護。
A1型：
前窗氣流速度最小量或測量平均值應至少為0.38m/s。70%氣體通過HEPA過濾器再循環至工作區，30%的氣體通過排氣口過濾排出。
A2型：
前窗氣流速度最小量或測量平均值應至少為0.5m/s。70%氣體通過HEPA過濾器再循環至工作區，30%的氣體通過排氣口過濾排出。
二級B型生物安全櫃均為連接排氣系統的安全櫃。連接安全櫃排氣導管的風機連接緊急 供應電源，目的在斷電下仍可保持安全櫃負壓，以免危險氣體泄漏出實驗室。其前窗氣流速度最小量或測量平均值應至少為0.5m/s(100fpm)。
B1型：
70%氣體通過排氣口HEPA過濾器排除，30%的氣體通過供氣口HEPA過濾器再循環至工作區。
B2型：
100%全排型安全櫃，無內部循環氣流，可同時提供生物性和化學性的安全控制，可以操作揮發性化學品和揮發性核放射物作為添加劑的微生物實驗。
3、三級生物安全櫃
三級生物安全櫃是為生物安全防護等級為4級實驗室而設計的，櫃體完全氣密，工作人員通過連接在櫃體的手套進行操作，俗稱手套箱(Golvebox)，試驗品通過雙門的傳遞箱進出安全櫃以確保不受污染，適用於高風險的生物試驗，如進行SARS、埃博拉病毒相關實驗等。
㈡ 實驗室生物安全分區及如何避免交叉污染
防止交叉污染，操作區應與外界分開。
不曉得你的實驗室主要研究什麼，我現在以微生物實驗室分區為例，劃分以下三個區域：
一、清潔區
包括辦公室、休息室、培養基配製室與試劑儲藏室。此區域禁止帶人細菌檢驗標本。
二、操作區
（1）整潔：微生物操作區是各種病原菌相對集中的地方，為了減少粉塵流動，防止交叉污染，操作區應與外界分開。實驗室工作人員進入操作區應換鞋，送標本人員不進入操作區，操作區地面用專用拖把每天拖1 次，每周用消毒劑擦洗1 次。每天早上工作前，用紫外線照射30 min ，或每天工作後，用紫外線照射60 min ，對整個操作區進行消毒；下午工作結束後用消毒液消毒工作檯面，以保證工作環境的安全清潔。
（2）光線：細菌培養的細小菌落及血清試驗凝集顆粒的觀察， 都需要有充足的光線。操作區除設置常規照明燈外，還必須安裝操作台燈，以保證實驗結果的正確判斷。
（3）通風：由於各種病原菌集中，空氣污濁，實驗室要求保持排的生物安全櫃中進行。
（4）溫度和濕度：由於無菌操作的要求，實驗過程中經常使用酒精燈，因此，微生物學實驗室不能安裝吊扇。為了達到實驗所需的適宜溫度，尤其是滿足某些儀器對溫度濕度的要求，實驗室應安裝空調。
（5）電源：要求提供穩壓、恆頻的電源；根據儀器設備要求，必要時配備不間斷電源。
（6）水源：操作區內須設置水源。用於標本處理（如細菌染色） 的水槽與工作人員洗手用的水槽不能混用。
（7）污染物處理：操作區須備有消毒缸，以處理沾有活菌的玻片等污染物品。檢驗剩餘的標本及使用過的帶菌平板、試管均須集中地點安全放置，經消毒滅菌處理後再洗滌或丟棄。
三、無菌區
（1）無菌室應完全封閉，進出無菌室至少要經兩道門，中間隔有緩沖間，無菌室與外間設置一個可開閉的窗口，用於傳遞器具。
（2）無菌室必須保持整潔。工作人員進入無菌室應換專用鞋、專用衣。無菌室使用前須用紫外線消毒30 min ，操作結束後清潔檯面，再用紫外線消毒30 min 。定期用乳酸或甲醛熏蒸，徹底消毒。
（3）無菌室僅用於培養基分裝等無菌操作，不能進行有菌標本的操作。操作人員操作時應嚴格關門，並戴好專用的口罩、帽子。
（4）無菌室內應有空氣過濾裝置，並安裝空調。
㈢ 請述如何進行pcr實驗室的工作獨立分區，pcr實驗室分區有哪些要求
要求及功能分區PCR實驗室分為四個區域，進入各工作區域必須嚴格按照單一方向進行，不同的工作區域使用 不同的工作服（例如不同的顏色）。
工作人員離開各工作區域時，不得將工作服帶出，
四區域分別 1.試劑配製區n2.樣品處理區n 3.核酸擴增區n 4.產物分析區n 如使用全自動分析儀，區域可適當合並,三四區可合並為擴增產物分析。
各區的功能是：
1.1.1 試劑准備區：擴增試劑的配製、分裝和保存。
1.1.2 樣品處理區：樣品登記、分裝；核酸提取、保存和加樣。
1.1.3 擴增產物分析區：擴增產物的測定、結果分析、登記及報告。
1.2 擴增前區與擴增後區應嚴格分開，須使用不同的房間，兩區之間最好有一定的間隔。
1.3 使用商品化試劑盒可在樣品處理區進行少量試劑配製。
1.4 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區和試劑准備區可設在同一房間內： 1.4.1 在生物安全櫃內操作。
1.4.2 每個實驗人員、實驗組分別使用各自的試劑及耗材。
1.4.3 盛放污染材料的器皿密封並一次性使用。
1.4.4 用有效的方法對操作區域和共享器具在實驗前後進行清潔及消毒。
設計要求：
PCR實驗室可以是分散形式，也可以是組合形式,現要主要是以組合形式為主流。完成一組PCR 實驗，通常應經過試劑配製、樣品處理、核酸擴增及產物分析四個實驗過程，若實驗工藝需要，還 應增加樣品粉碎過程。
一、分散形式PCR實驗室所謂分散形式PCR實驗室，是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠，呈分散布置形式。
對於這種布置形式的PCR實驗室，由於各個實驗之間不易相互干擾，因此無需特殊條件要求。
二、組合形式
所謂組合形式PCR實驗室, 是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置，組成獨立實驗區域 的形式。對於組合形式PCR實驗室，由於各個實驗間集中布置，容易造成相互干擾，因此，對總體 布局以及屏障系統具有一定的要求。各室在入口處設緩沖間，以減少室內外空氣交換。 試劑配製室及樣品處理室宜呈微正壓，以防外界含核酸氣溶膠的空氣進入，造成污染,可以通 過控制進風風量大於排風風量達到正壓效果。
核酸擴增室及產物分析室應呈微負壓，以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品，可以通 過控制排風風量大於進風風量達到負壓效果。
在理想情況下，PCR實驗室緩沖間內，可設置正壓，使室內空氣不流向室外，室外空氣不流向 室內。
PCR實驗室進風由原有中央空調控制，要求將中央空調風口安裝到指定定點，且高度為地面鋪 裝好後2600mm處。 如果使用熒光PCR儀，擴增室和產物分析室可以合並。
若房間進深允許，可設PCR內部專用走廊。需要指出的是在減少室內外空氣交換方面，緩沖間 比專用走廊更有意義。 各個區域之間應具備單向的實驗工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護屏障，避免 實驗之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產生假性結果。 實驗室的牆體，包括頂棚，應結構牢固、氣密性好；
所有陰角宜採用圓弧形線條過渡；牆體內 壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。
主要設備 試劑准備區 儀器設備主要有冰箱、超凈台、加樣器、混勻器、天平和離心機等，加樣器、天 平除了要專用外，還應有定期校準。 試劑分裝應在超凈台中進行 擴增反應混合液應使用分子 生物學級的，試劑制備好後應有質檢：一是否有污染、二是檢測試劑的擴增效果。 標本制備區 儀器設備主要有生物安全櫃、加樣器、離心機、溫育儀、混勻器等 擴增區 擴增區的主要儀器是核酸擴增儀、超凈台、微量加樣器、離心機、可移動紫外燈。擴 增儀需進行校準。並配備UPS電源，以防止由於電壓的波動，停電對擴增效果的影響。 分析區 本區所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等 潔凈實驗區的緩沖間部分面積不能超過主實驗室的八分之一,這是有規定的.
主體結構：主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽角均採用鋁合金50內圓角鋁，從而解決容易污 染、積塵、不易清掃等問題。
結構牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。 標準的四區分隔和氣壓調節：將PCR過程分成試劑准備、標本制備和PCR擴增，產物分析四個獨立的實驗區。整個區域有一個 整體緩沖走廊。
每個獨立實驗區設置有緩沖區，同時各區通過氣壓調節，使整個PCR實驗過程中試 劑和標本免受氣溶膠的污染並降低擴增產物對人員和環境的污染。
可打開緩沖區，緩沖區和 PCR 擴增區的排風扇往外排氣，在實驗區的外牆上和各扇門上 都安裝有風量可調的回風口，空氣通過回風口向室內換氣。
消毒：在三個實驗區和三個緩沖區頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈，供消毒用。
在試劑准備區和標本制備區 還設置移動紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒。 不銹鋼傳遞窗：試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標本在 傳遞過程中不受污染（人物分流）。
地面地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面，整體性好。便於進行清掃，耐腐蝕。 照明燈具要選用凈化燈具，能達到便於清洗、不積塵的特點。 在建設的過程中應注意： 規范的安裝流程和全面的服務流程。
㈣ 如何安全使用生物安全櫃
在實驗室中使用生物安全櫃
1. 位置 空氣通過前面開口進入生物安全櫃的速度大約為0.45m/s。這樣速度的定向氣 流是極易受到干擾的，包括人員走近生物安全櫃所形成的氣流，打開窗戶，送 風系統調整以及開關門等都可能造成影響。
因此，最為理想的是，生物安全櫃應位於人員活動，物品流動以及可能會擾亂 氣流的地方。在安全櫃的後方以及每一個側面要盡可能留有30cm的空間，以利 用對安全櫃的維護。在安全櫃的上面應留有30-35cm的空間，以便准確測量空 氣通過排風過濾器的速度，並便於排風過濾器的更換。
2. 操作人員 生物安全櫃如果使用不當，其防護作用就可能大大地受到影響。操作人員在移 動雙臂進出安全櫃時，需要小心維持前面開口處氣流的完整性，雙臂應該垂直 地緩慢進出前面的開口。
手和雙臂伸入到生物安全櫃中等待大約一分鍾，以便安全櫃調整完畢並且讓里 面的空氣「掃過」手和雙臂的表面以後，才可以開始對物品進行處理。要在開 始實驗之前將所有必須的物品置於安全櫃內，以盡可能減少雙臂進出前面開口 的次數。
BSC
BSC Biological Safety Cabinet
Return Air Grille
Personnel Traffic
Barrier Airflow
BSC BSC
Air Inlet
BSC
BSC
Fig 8. 典型II級生物安全櫃的安裝
A typical Class II Cabinet Installation
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生物安全和生物安全櫃指南
3.物品放置 二級生物安全櫃前面的進氣格柵不能被紙，儀器設備或其他物品阻擋。放入安 全櫃內的物品應採用70%酒精來消除表面污染。可以在消毒劑浸濕的毛巾上進 行實驗，以吸收可能濺出的液滴。
所有物品應盡可能地放在工作台後部靠近工作台邊緣的位置，並使其在操作中 不會阻擋候補格柵。可產生氣溶膠的設備(例如混勻器，離心機等)應靠近安全 櫃的後部放置。像有生物危害性的廢棄物袋，盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶 等體積較大的物品，應該放在安全櫃內的某一側。在工作檯面上的實驗操作應 該按照從清潔區到污染區的方向進行。
耐高壓滅菌的生物危害性廢棄物袋以及吸管盛放盤不應放在安全櫃的外面，否 則在使用這些物品時雙臂就必須頻繁進出安全櫃，這樣會干擾安全櫃空氣屏障 的完整性，從而影響對人員和物品的防護。
4.操作和維護 大多數生物安全櫃的設計允許全天24小時工作。研究人員還發現，連續工作有 助於控制實驗室中灰塵和顆粒的水平。向房間中排風或通過套管介面與專門的 排風管相連接的一級A1和A2型生物安全櫃，在不使用時是可以關閉的。其他如 二級B1和二級B2型生物安全櫃，是通過硬管安裝的，就必須始終保持空氣流動 以維持房間空氣的平衡。
在開始工作以前以及完成工作以後，應至少讓安全櫃工作5分鍾來完成「凈 化」的過程，應即應留在將污染的空氣派出安全櫃的時間。
生物安全櫃的所有維修工作應該由有資質的專業人員來進行。在生物安全櫃操 作中出現的任何故障都應該報告，並應在再次使用之前進行維修。
5.紫外燈 生物安全櫃中不需要紫外燈。如果使用紫外燈的話，應該每周進行清潔，以除 去可能影響其殺菌效果的灰塵和污垢。在安全櫃重新認證時，要檢查紫外線的 強度，以確保有適當的光發射量。房間中有人時一定要關閉紫外燈，以保護眼 睛和皮膚，避免因不慎暴露而造成傷害。
6.明火 在生物安全櫃內所形成的幾乎沒有微生物的環境中，應避免使用明火。使用明 火會對氣流產生影響，並且在處理揮發性物品和易燃物品時，也易造成危險。 在對接種環進行滅菌時，可以使用微型燃燒器或電爐，而不應使用明火。
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生物安全和生物安全櫃指南
7. 溢出 實驗室中要張貼如何處理溢出物的實驗室操作規則，每一位使用實驗室的成員 都要閱讀並理解這些規程。一旦在生物安全櫃中發生由生物學危害的物品溢 出時，應在安全櫃出於工作狀態下立即進行清理。要使用有效的消毒劑，並在 處理過程中盡可能減少氣溶膠的生成。所有接觸溢出物品的材料都要進行消 毒/或高壓滅菌。
8. 認證 在安裝是一季每隔一定時間以後，應由有資質的專業人員按照生產商的說明對 每一台生物安全櫃的運行性能以及完整性進行認證，以檢查其是否符合國家及 國際的性能標准。安全櫃防護效果的評估應該包括對安全櫃的完整性，HEPA過 濾器的泄漏，向下氣流的速度，正面氣流的速度，負壓/換氣次數，氣流的煙 霧模式以及警報和互鎖系統進行測試。
還可以選擇進行漏電，光照度，紫外線強度，雜訊水平以及震動性的測試。在 進行這些測試時，檢測人員要經過專門的培訓，採用專門的技術和儀器設備。 強烈建議由有資質的專業人員來進行測試。
9. 清潔和消毒 由於剩餘的培養基可能會使微生物生長繁殖，因此在實驗結束時，包括儀器設 備在內的生物安全櫃里的所有物品都應清楚表面污染，並移出安全櫃。
在每次使用前後，要清除生物安全櫃內表面的污染。工作檯面和內壁要用消毒 劑進行擦拭，所用的消毒劑要能夠殺死安全櫃里可能發現的任何微生物。在每 天試驗結束時，應擦拭生物安全櫃的工作檯面，四周以及玻璃的內外側等部位 來清除表面的污染。在對目標生物體有效時，可以採用漂白劑溶液或70%酒精 來消毒。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑後，還必須用無菌水再次進行擦拭。
推薦將安全櫃一直維持運行狀態。如果要關閉的話，則應在關機前運行5分鍾 以凈化內部的氣體。
10. 清除污染 生物安全櫃在移動以及更換過濾器之前，必須清除污染。最常用的方法是採用 甲醛蒸汽熏蒸。應該由有資質的專業人員來清除生物安全櫃的污染。
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生物安全和生物安全櫃指南
11.個體防護裝備 在使用生物安全櫃時應穿著個體防護服。在進行一級和二級生物安全水平的操 作時，可穿著普通試驗服。前面加固處理的反背式試驗隔離衣具有更好的防護 效果，應在進行三級和四級生物安全水平（防護服型實驗室除外）的操作時使 用。手套應套在隔離衣的外面，可以戴加有松緊帶的套袖來保護研究人員的手 腕。有些操作可能還需要戴口罩和安全眼鏡。
12.警報器 可以在兩種警報器中選擇一種來裝備生物安全櫃。窗式警報器只能裝在帶有滑 動窗的安全櫃上。發出警報時表明操作者將滑動窗移到了不當的位置。處理這 種警報時，只要將滑動窗移到適宜的位置就可以了。氣流警報器報警時，表明 安全櫃的正常氣流模式受到了干擾，操作者或物品當即處於危險狀態。當氣流 警報響起時，應立刻停止工作，並通知實驗室主管。生產商的說明手冊中將提 供更詳細的資料，在生物安全櫃的使用培訓中也應包括這一方面的內容。
13.補充資料 選擇正確類型的生物安全櫃，進行安裝並正確使用，同時每年進行認證，這是 一個復雜的程序。強烈推薦在經過良好培訓並具有豐富生物安全操作經驗的專 家監督下來進行上述工作。該專家應非常熟悉「參考文獻」部分中所列出的相 關文獻，並且經過了有關生物安全櫃各方面的培訓。操作者應接受生物安全櫃 操作和使用的正規培訓。