生物樣品分析如何選擇內標

1. 選用內標法有何優點,內標法的選擇是根據哪些原則

標法是結合了峰面積歸一法和外標法的優點的一種方法，它在加入內標物後，按峰面積歸一法的分析方法進行分析，這就避免了由於進樣的一致性及樣品歧視效應導致的偶然誤差。因而，它的分析精密度也是比較高的，是一種比較理想的定量分析方法。它的弱點是前處理比較復雜，所花費的時間也比較長，同時必須要有合適的標樣及內標物才能進行內標法定量分析。

內標法的優缺點
內標法的優點：
對進樣量不嚴格要求，測定的結果也較為准確，由於通過測量內標物及被測組分的峰面積的相對值來進行計算的，因而在一定程度上消除了進樣量、儀器不穩定等變化所引起的誤差，只對欲分析的組分峰做校正。
內標法的缺點
是必須加一個組分進到樣品，易增加面積測量誤差。操作程序較為麻煩，每次分析時內標物和試樣都要准確稱量，有時尋找合適的內標物也有困難。
內標物的選擇原則
採用內標法定量時，內標物的選擇是一項十分重要的工作。理想地說，內標物應當是一個能得到純樣的已知化合物，這樣它能以准確、已知的量加到樣品中去，

2. 在用氣相色譜分析時如何選取內標物

內標物首先是樣品中不應有這種物質，其次，它必須和樣品互溶，它的峰形應對稱、峰位應獨立，並且與待測組分的峰位接近。內標物的加入量一般與待測組分的質量相近。

3. 生物樣品分析方法一般從那幾個方面進行考察

那要看是哪一類的生物樣品，主要風險控制在於的方向。

一般要根據樣品的種類，所要測定的成份，來確定使用什麼葯品什麼測定方法。

對於植物主要是重金屬和農殘，鉛砷鉻鎘銅和DDt，666等。

對於動物主要是抗生素、寄生蟲葯等獸葯殘留和激素等。

一個生物分析方法的主要特徵包括：選擇性、定量下限、響應函數和校正范圍（標准曲線性能）、准確度、精密度、基質效應、分析物在生物基質以及溶液中儲存和處理全過程中的穩定性。

有時可能需要測定多個分析物。這可能涉及兩種不同的葯物，也可能涉及一個母體葯物及其代謝物，或一個葯物的對映體或異構體。在這些情況下，驗證和分析的原則適用於所有涉及的分析物。

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在生物樣品的測定中，根據測定項目的不同，首先要經過消解 （或灰化），或提取和分離等處理工作，然後才能進行待檢組分含量的測定。處理生物樣品的方法有消解法 （又稱濕法氧化或消化法，主要有硝酸-硫酸消解法、硝酸-高氯酸消解法、硫酸-過氧化氫消解法）、灰化法 （又稱燃燒法或高溫分解法）、提取法（包括振盪提取、組織搗碎、索氏提取器提取）、分離法和濃縮法。

動物一般多用耳緣靜脈取血，先去毛，要去凈毛，不傷皮膚，用體積分數為75%的酒精擦動物耳朵，例如兔耳朵，用燈泡照射加熱使其血管充血，用大頭針刺破靜脈放血 (先從遠心端刺)，將血液放人抗凝杯中，邊收集邊搖勻，以防凝固。

4. 如何選擇內標物質以及內標物的加入量

內標物的選擇是重要的： a.它應該是試樣中不存在的純物質； b.加入的量應接近於被測組分； c.要求內標物的色譜峰位於被測組分色譜峰附近，或幾個被測組分色譜峰的中間，並與這些組分完全分離； d.應注意內標物與欲測組分的物理及物理化學性質（如揮發度，化學結構，極性以及溶解度等）相近.內標物的加入量也應接近試樣中待測組分的含量。 內標法是結合了峰面積歸一法和外標法的優點的一種方法，它在加入內標後，按峰面積歸一法的分析方法進行分析，這就避免了由於進樣的一致性及樣品歧視效應導致的偶然誤差，因而，它的分析精密度也是比較高的，是氣相色譜的一種比較理想的定量分析方法。它的弱點是前處理比較復雜，所花費的時間也比較長，同時必須要有合適的標樣及內標物才能進行內標法定量分析。對於內標法定量分析來說，內標物的選擇是及其重要的。它必須滿足如下的條件：
⑵ .內標物與被分析物質的物理化學性質要相似（如：沸點、極性、化學結構等）；
⑵.內標物應能完全溶解於被測樣品（或溶劑）中，且不與被測樣品起化學反應；
⑶.內標物的出峰位置應該與被分析物質的出峰位置相近，且又不共溢出，目的是為了避免GC的不穩定性所造成的靈敏度的差異；
⑶ .選擇合適的內標物加入量，使得內標物和被分析物質二者峰面積的匹配性大於75%，以免由於它們處在不同響應值區域而導致的靈敏度偏差
什麼叫內標法怎樣選擇內標物
內標法是將一定重量的純物質作為內標物加到一定量的被分析樣品混合物中，然後對含有內標物的樣品進行色譜分析，分別測定內標物和待測組分的峰面積及相對校正因子，按公式求出被測組分在樣品中的百分含量。
內標物的選擇要求：
1、原樣品中不含組分。
2、與待測物保留時間應接近，但不重疊。
3、為高純度標准物質，或含量已知物質。
4、在給定色譜條件下應具有一定化學穩定性。

5. 定量分析中怎樣選擇內標法或外標法

選與欲測組分相近但能完全分離的組分做內標物（當然是樣品中沒有的組分），然後配製欲測組分和內標物的混合標准溶液，進樣得相對校正因子再將內標物加入欲測組分的樣品中，進樣後測得欲測組分和內標物的定量參。用內標法公式計算即可。 內標法是將一定量的純物質作內標物，加入到准確稱量的試樣中，根據被測試樣和內標物的質量比及其相應的色譜峰面積之比，來計算被測組分的含量。 選擇內標物有4要求：1.內標物應是該試樣中不存在的純物質；2.它必須完全溶於試樣中，並與試樣中各組分的色譜峰能完全分離；3.加入內標物的量應接近於被測組分；4.色譜峰的位置應與被測組分的色譜峰的位置相近，或在幾個被測組分色譜峰中間。 內標法的優點是測定的結果較准確，由於通過測量內標物及被測組分的峰面積的相對值來進行計算的，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差。內標法的缺點是操作程序較為麻煩，每次分析時內標物和試樣都要准確稱量，有時尋找合適的內標物也有困難。 外標法簡便，但進樣量要求十分准確，要嚴格控制在與標准物相同的操作條件下進行，否則造成分析誤差，得不到准確的測量結果。

6. 為什麼要進行生物樣品前處理選擇的一般原則

一般要在測定之前進行樣品的前處理，即進行分離、純化、濃集，必要時還需對待測組分進行化學衍生化，從而為測定創造良好的條件。
生物樣品進行前處理的目的在於：
1．葯物進入體內後，經吸收、分布代謝，然後排出體外。在體液、組織和排泄物中除了游離型（原型）葯物之外，還有葯物的代謝物、葯物與蛋白質形成的結合物、以及葯物或其代謝物與內源性物質，如葡萄糖醛酸、硫酸形成的葡萄糖醛酸甙（glucuronides）、硫酸酯（sulphates）綴合物等多種形式存在，需要分離後測定葯物及代謝物；
2．生物樣品的介質組成比較復雜。如在血清中既含有高分子的蛋白質和低分子的糖、脂肪、尿素等有機化合物，也含有Na＋、K＋、X-等無機化合物］。其中影響最大的是蛋白質，若用HPLC法測定葯物濃度時，蛋白質會沉積在色譜柱上發生堵塞，嚴重影響分離效果。因此，為了保護儀器，提高測定的靈敏度，必須進行除蛋白等前處理
在葯物分析中，考察一個分析方法的選擇性時，應著重考慮雜質、降解產物、相關化合物以及制劑輔料等其他組分是否對被測葯物的測定有干擾。一般，通過添加上述物質的樣品與未曾添加的樣品所得分析結果進行比較而確定

7. 在色譜或質譜分析時，為什麼選擇內標法優於外標法如何選擇要採用的內標物

內標物首先品應種物質其必須品互溶峰形應稱、峰位應獨立並且與待測組峰位接近內標物加入量般與待測組質量相近

8. 生物樣品內標法和外標法會有區別嗎

生物樣品內標法和外標法會有區別
外標法就是用標准品的峰面積或峰高與其對應的濃度做一條標准曲線,測出樣品的峰面積或峰高,在標准曲線上查出其對應的濃度,這是最常用的一種定量方法,內標法是對應外表法說的,外表法需要用樣品和標准品對比,但是有時我們很難保證樣品和標准品進的體積是一樣的,畢竟要有誤差,這時候就用內標法,就是在外標法的基礎上,在樣品和標准品里在加入一種物質,通過加入物質的峰面積或峰高的變化,就可以看出我們標准品和樣品進樣體積的差別,但同時會引進加入物質的秤量誤差.所以一般用外標法來定量,如果進樣體積很難掌握,就用內標法,可以消除進樣體積的誤差
歸一化法的前提是：被測主分都要出峰，還要知道他們個組分之間的相對較這個內因子，然後根據個組分所佔的面積比例求得個組分的含量。

9. 什麼叫內標法怎樣選擇內標物

一、內標法

內標法是一種間接或相對的校準方法。在分析測定樣品中某組分含量時，選一與欲測組分相近但能完全分離的組分做內標物（內標物是樣品中沒有的組分），然後配製欲測組分和內標物的混合標准溶液，進樣得相對校正因子。

再將內標物加入欲測組分的樣品中，進樣後測得欲測組分和內標物的定量參數。

二、選擇內標物

對於內標法定量分析來說，內標物的選擇是及其重要的。它必須滿足如下的條件：1.內標物與被分析物質的物理化學性質要相似（如：沸點、極性、化學結構等）；

2.內標物應是該試樣中不存在的純物質；

3.它必須完全溶於被測樣品（或溶劑）中，且不與被測樣品起化學反應；並與試樣中各組分的色譜峰能完全分離；

4.能加入內標物的量應接近於被測組分；

5.色譜峰的位置應與被測組分的色譜峰的位置相近，或在幾個被測組分色譜峰中間。且又不共溢出，目的是為了避免儀器的不穩定性所造成的靈敏度的差異；

6.選擇合適的內標物加入量，使得內標物和被分析物質二者峰面積的匹配性大於75%，以免由於它們處在不同響應值區域而導致的靈敏度偏差。

(9)生物樣品分析如何選擇內標擴展閱讀：

理想地說，內標物應當是一個能得到純樣的已知化合物，這樣它能以准確、已知的量加到樣品中去，它應當和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學性質(如化學結構、極性、揮發度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應特徵，最好是被分析物質的一個同系物。

當然，在色譜分析條件下，內標物必須能與樣品中各組分充分分離。需要指出的是，在少數情況下，分析人員可能比較關心化合物在一個復雜過程中所得到的回收率，此時，他可以使用一種在這種過程中很容易被完全回收的化合物作內標，來測定感興趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所說的選擇原則。