生物實驗室如何滅菌

㈠ 做微生物實驗時，實驗器具都如何滅菌，消毒啊

1、培養基和待用的玻璃器皿：高溫高壓濕熱滅菌
2、用過的玻璃吸管、塗布棒等：先消毒液浸泡24小時，清洗後高溫高壓濕熱滅菌
3、抗生素、維生素、激素等溶液：針筒濾頭過濾
4、接種環等：酒精燈灼燒
5、手部等的皮膚消毒：消毒液如新潔爾滅等

㈡ 實驗室滅菌消毒怎麼做更徹底

一、消毒和滅菌的區別

1、消毒（disinfection in hospital）：殺滅或消除醫院環境中媒介物上污染的病原微生物的過程.

2、滅菌(sterilization)：殺滅或去除外環境中媒介物攜帶的一切微生物的過程.包括致病微生物和非致病微生物,也包括細菌芽胞和真菌孢子.滅菌是個絕對的概念,滅菌後物品必須是完全無菌的.即滅菌保證水平為106.

二、高溫滅菌法

高溫滅菌法是利用高溫使微生物的蛋白質及酶發生凝固或變性而死亡，是應用最廣泛且有效的滅菌方法。主要用於器械、容器、試劑等滅菌。

（一）高壓蒸氣滅菌法

圖為加熱接種環。（圖片來源： 《接種、分離純化和培養技術》）

注意事項：

1、酒精燈的燈芯要平整.

2、添加酒精時,不超過酒精燈容積的2/3；酒精不少於1/4.

3、絕對禁止向燃著的酒精燈里添加酒精,以免失火.

4、絕對禁止用酒精燈引燃另一隻酒精燈.

5、用完酒精燈,必須用燈帽蓋滅,不可用嘴去吹.

6、不要碰倒酒精燈,萬一灑出的酒精在桌上燃燒起來,應立即用濕布撲蓋.

㈢ 實驗室消毒滅菌方法

實驗室常用的消毒滅菌方法
一、消毒技術（一）明確消毒的主要對象 應具體分析引起感染的途徑、涉及的媒介物及病原微生物的種類，有針對性地使用消毒劑。（二）採取適當的消毒方法 根據消毒對象選擇簡便
一、消毒技術
（一）明確消毒的主要對象
應具體分析引起感染的途徑、涉及的媒介物及病原微生物的種類，有針對性地使用消毒劑。
（二）採取適當的消毒方法
根據消毒對象選擇簡便、有效、不損壞物品、來源豐富、價格適中的消毒方法。
醫院診療器械按污染後可造成的危害程度和在人體接觸部位不同分為三類：
1. 高度危險的器材
穿過皮膚、粘膜而進入無菌的組織或器官內部，或與破損的皮膚粘膜密切接觸的器材，如手術器械、注射器、心臟起搏器等。必須選用高效消毒法（滅菌）。
2. 中度危險的器材
僅與皮膚、粘膜密切接觸，而不進入無菌組織內，如內窺鏡、體溫計、氧氣管、呼吸機及所屬器械、麻醉器械等。應選用中效消毒法，殺滅除芽胞以外的各種微生物。
3. 低度危險器材和物品
不進入人體組織，不接觸粘膜，僅直接或間接地與健康無損的皮膚接觸，如果沒有足夠數量的病原微生物污染，一般並無危害，如口罩、衣被、葯杯等，應選用低效消毒法或只作一般衛生處理。只要求去除一般細菌繁殖體和親脂病毒。
（三）控制影響消毒效果的因素許多因素會影響消毒劑的作用，而且各種消毒劑對這些因素的敏感性差異很大。
1. 微生物的種類
不同類型的病原微生物對消毒劑抵抗力不同，因此，進行消毒時必須區別對待。
1）細菌繁殖體
易被消毒劑消滅，一般革藍氏陽性細菌對消毒劑較敏感，革藍氏陰性桿菌則常有較強的抵抗力。繁殖體對熱敏感，消毒方法以熱力消毒為主。
（2）細菌芽胞
芽胞對消毒因子耐力最強，殺滅細菌芽胞最可靠的方法是熱力滅菌，電離輻射和環氧乙烷熏蒸法。在化學消毒劑中，戊二醛、過氧乙酸能殺滅芽胞，但可靠性不如熱力滅菌法。
（3）病毒
對消毒因子的耐力因種類不同而有很大差異，親水病毒的耐力較親脂病毒強。
（4）真菌
對乾燥、日光、紫外線以及多數化學葯物耐力較強，但不耐熱（60℃1小時殺滅）。
2. 微生物的數量
污染的微生物數量越多需要消毒的時間就越長，劑量越大。
3. 有機物的存在
①有機物在微生物的表面形成保護層妨礙消毒劑與微生物的接觸或延遲消毒劑的作用，以致於微生物逐漸產生對葯物的適應性。②有機物和消毒劑作用，形成溶解度比原來更低或殺菌作用比原來更弱的化合物。③一部分消毒劑與有機物發生了作用，則對微生物的作用濃度降低。④有機物可中和一部分消毒劑。消毒劑中重金屬類、表面活化劑等受有機物影響較大，對戊二醛影響較小。
4. 溫度
隨著溫度的升高，殺菌作用增強，但溫度的變化對各種消毒劑影響不同。如甲醛、戊二醛、環氧乙烷的濕度升高1倍時，殺菌效果可增加10倍。而酚類和酒精受溫度影響小。
5. PH值
從兩方面影響殺菌作用。①對消毒劑的作用：改變其溶解度和分子結構。②pH過高或過低對微生物的生長均有影響。在酸性條件下，細菌表面負電荷減少，陰離子型消毒劑殺菌效果好。在鹼性條件下，細菌表面負電荷增多，有利於陽離子型消毒劑發揮作用。
6. 處理劑量與監測
保證消毒、滅菌處理的劑量，加強效果監測，防止再污染。

㈣ 微生物實驗室滅菌

我這學期親自參與過微生物實驗室滅菌全過程。
我們使用的是高壓蒸汽滅菌鍋。首先將分裝好的試管或者需要滅菌的三角瓶用報紙通過棉線捆紮牢固，一可以避免試管混亂，二是可以防止三角瓶等容器棉塞不夠緊，而後期進入空氣污染溶液。
這一步完了就可以放入高壓蒸汽滅菌鍋，當然這之前要往滅菌鍋中加入水，然後放入容器，蓋上鍋蓋，打開電源，調制溫度和時間，在溫度上升的過程需要有人守在鍋旁，盯著壓力表防止裡面壓力過大使得液體沖開瓶塞，是之前所做成為無用功。調控壓力可以通過放氣和防水完成。
最後進入滅菌階段，當達到指定溫度並穩定後，就不用人在守著，只要等著30分鍾或其他倒計時時間一到，壓力恢復正常，就可以打開鍋蓋，拿出滅菌的容器即可。
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㈤ 實驗室常用的消毒和滅菌方法

高壓蒸汽滅菌法：用高溫加高壓滅菌,不僅可殺死一般的細菌,對細菌芽胞也有殺滅效果,是最可靠、應用最普遍的物理滅菌法.主要用於能耐高溫的物品,如金屬器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡膠及一些葯物的滅菌.

㈥ 實驗室常用的滅菌方法有哪些

（1）加熱滅菌法

利用高溫來殺死微生物（超過最高生長溫度）的方法。加熱滅菌的原理：當高溫作用於微生物時，首先引起細胞內生理生化反應速率加快，機體內對溫度敏感的物質如蛋白質、核酸等，隨著溫度的增高而遭受不可逆的破壞，盡而導致細胞內原生質體的變化、酶結構的破壞，從而使細胞失去了生活機能上的協調，停止了生長發育。隨著高溫的繼續作用，細胞內原生質便發生凝固，酶結構完全破壞，活動消失，生化反應停止，滲透交換等新陳代謝活動消失，細胞死亡。加熱滅菌可分乾熱滅菌和濕熱滅菌兩大類。

1）乾熱滅菌 利用灼燒或乾熱空氣滅菌而沒有飽和水蒸氣參加的滅菌法稱為乾熱滅菌法。由於乾熱滅菌使用方便，方法簡單，故在生產上廣泛應用。如火焰滅菌法：直接利用火焰把微生物燒死，故又稱焚燒滅菌法。採用此法滅菌既徹底又迅速，但只適用於金屬制的接種工具、試管口及污染物品等的處理。熱空氣滅菌法：即在電熱恆溫乾燥箱中利用乾熱空氣來滅菌。

2）濕熱滅菌 即利用蒸汽進行滅菌的方法。濕熱滅菌又分為高壓、常壓、間歇滅菌和巴氏滅菌4種。

①高壓蒸汽滅菌 由於高壓蒸汽具有較強的穿透力和較常壓高的溫度，能大大縮短滅菌時間，提高工作效率，加之蛋白質在濕熱條件下容易變性，在熱蒸汽條件下，細菌的芽孢在120℃，經20～30分鍾可全部被殺死。如滅菌材料體積較大，不易被穿透時，可將壓力增加到0.152兆帕，延長至1～2小時。在高壓蒸汽滅菌中，滅菌溫度隨蒸汽壓力的增加而升高（圖2-6）。

圖2-7 簡易常壓滅菌法

③常壓間歇蒸汽滅菌法 這是利用常壓蒸汽反復幾次滅菌的方法。具體做法是將待滅菌物品放在鍋內，100℃處理1小時左右，殺死微生物的營養細胞，讓其冷卻至30℃左右，此時芽胞會萌發，再以同樣方法加熱處理，反復3次，可達到滅菌目的。該方法可用於不耐高溫的葯品、營養物、特殊培養基的滅菌。

④低溫巴氏滅菌法 即在60～70℃下，經一定時間，殺死有害微生物的方法。適應於不耐高溫的物品消毒。有些培養基，在高溫下遭到破壞，用此法既可殺死致病微生物的營養體，又能使培養基的成分不致受到嚴重破壞。食用菌生產中培養料堆積發酵工藝，就是利用這個原理殺死其中的病蟲、雜菌。

（2）過濾除菌法

又分液體過濾和空氣過濾兩種，就是採用機械的方法，設計一種濾孔比細菌還小的篩子，做成各種過濾器，通過機械過濾，只讓液體培養基或空氣從篩孔流出，各種微生物菌體則留在篩子上，從而達到除菌的目的。這種方法適用於對熱不穩定的體積小的液體培養基（如動物血清、蛋白質、酶、維生素等）及氣體的滅菌。超凈工作台的工作原理就是將帶菌空氣通過過濾滅菌形成無菌空氣，從風洞中吹出，來造成工作台范圍的無菌狀態。過濾滅菌的最大優點是不破壞培養基中各種物質的化學成分。常用的過濾器有用硅藻土製的、石棉製的、陶瓷土製的，也有用火棉膠、硝化纖維素濾膜製成的。

（3）輻射滅菌法

利用輻射產生的能量進行殺菌的方法稱輻射滅菌。輻射可分電離輻射和非電離輻射兩種，α-射線、β-射線、γ-射線、X-射線、中子和質子、微波等屬電離輻射，紫外線、臭氧、日光為非電離輻射。

1）紫外線滅菌 紫外線殺菌的原理是利用紫外線的輻射作用。用燈管直接照射細菌使其發生光化學反應，將細菌細胞質誘導形成胸腺嘧啶雙聚體，從而抑制DNA的復制而發生變性、致死。另一方面，空氣在紫外線照射下產生的臭氧（O₃），也具有一定的殺菌作用。紫外線的有效作用距離為1.2～2.0米。紫外燈一般懸吊在接種室或培養室的上方，個數依房間大小而定，容1～2個人操作的接種室，安裝一個30瓦的紫外燈就可以了。在每次接種前，應將所需的器具一起放入接種室（箱）內，然後打開紫外燈照射。如果接種室體積較大，開燈照射2小時才能達到滅菌效果；如果較小，只需開燈半小時左右既可達到滅菌效果。由於紫外線穿透力弱，即使是普通玻璃也不能濾過，因此，只適於空氣或物體表面的滅菌。紫外線對人體皮膚，尤其是眼睛有殺傷作用，應避免直視，工作時應將紫外燈關閉。紫外線消毒時工作場所如果處在稍暗無光的情況下，能提高殺菌效果。細菌接受致死量紫外線照射後，隨即給予可見光照射，部分細菌有復活的可能。幹細胞比濕細胞對紫外線的抗性強，孢子比其營養細胞對紫外線更具抗性。

2）微波滅菌 由於微生物的細胞中都含有70%～90%的水分，水分子在微波電場中被極化，並隨著電場方向的改變而轉動，在轉動過程中分子之間高速度摩擦產生熱能，這種熱能不同於外部加熱，可在短時間里使細胞爆破而物體本身的溫度卻只有極微增加，從而達到滅菌效果。用YM7601型微波爐只需60秒鍾就能殺死食品中192萬個大腸桿菌。

3）臭氧發生器消毒 臭氧（O₃）具有強烈的氧化作用，能破壞微生物的細胞膜與核酸。O₃也是一種暫態物質，常溫下能自然分解，還原成氧。其滅菌原理實際上和紫外線消毒極相似。

㈦ 實驗室常用的消毒和滅菌方法

常用的消毒滅菌方法多採用物理方法和化學方法兩大類。
1.乾熱滅菌法是利用恆溫乾燥箱內120℃-150℃的高熱，並保持90-120分鍾，殺死細菌和芽孢，達到滅菌目的的一種方法。
主要適用於不便在壓力蒸汽滅菌器中進行滅菌，且不易被高溫損壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能和蒸汽接觸的物品的滅菌。用此方法滅菌的物品乾燥，易於貯存。酒精燈火焰燒灼滅菌法也是屬於乾熱滅菌的方法之一，在進行動物細胞體外培養工作時，常須利用工作檯面上的酒精燈火焰對金屬器具及玻璃器皿口緣進行補充滅菌。
2. 濕熱滅菌法壓力蒸汽濕熱滅菌法是目前最常用的一種滅菌方法。
它利用高壓蒸汽以及在蒸汽環境中存在的潛熱作用和良好的穿透力，使菌體蛋白質凝固變性而使微生物死亡。適合於布類工作衣、各種器皿、金屬器械、膠塞、蒸餾水、棉塞、紙和某些培養液的滅菌。
3. 射線滅菌法利用紫外線燈進行照射滅菌的方法。
紫外線是一種低能量的電磁輻射，可以殺滅多種微生物。紫外線的作用機制是通過對微生物的核酸及蛋白質等的破壞作用而使其滅活。適合於實驗室空氣、地面、操作檯面滅菌。
4. 過濾除菌法是將液體或氣體通過有微孔的濾膜過濾，使大於濾膜孔徑的細菌等微生物顆粒阻留，從而達到除菌的方法。過濾除菌法大多用於遇熱易發生分解、變性而失效的試劑、酶液、血清、培養液等。目前，常用微孔濾膜金屬濾器或塑料濾器正壓過濾除菌，或用玻璃細菌濾器、濾球負壓過濾除菌。
5.化學消毒劑消毒法用於那些不能利用物理方法進行滅菌的物品、空氣、工作面、操作者皮膚、某些實驗器皿等。在使用時應注意安全，特別是用在皮膚或實驗材料上的消毒劑，須選用合適的葯劑種類、濃度和處理時間，才能達到安全和滅菌的目的。
6. 抗生素抑菌法主要用於培養液，是培養過程中預防微生物污染的重要手段以及作為微生物污染不嚴重時的「急救」措施。常用的抗生素有青黴素、鏈黴素和新黴素等。

㈧ 實驗室一般採用什麼滅菌方法，不同培養基的滅菌條件

金屬器具先用酒精擦拭,之後乾熱滅菌,使用時需燒灼；塑料可用高溫滅菌；有機溶劑需用過濾滅菌；雙手及操作檯面可用酒精擦拭,檯面及操作室還需紫外滅菌；培養基需用濕熱高溫滅菌,至於對待不同的培養基滅菌條件都有所不同,如植物組培使用的培養基與微生物中使用的就不同,具體的應查閱相關文獻.

㈨ 微生物學實驗室常用的滅菌方法有哪些

1 最常用的是高壓蒸汽滅菌，屬於濕熱滅菌；
2 火焰灼燒、高溫烘烤等，乾熱滅菌；
3 化學法滅菌，如福爾馬林、次氯酸鈉、酒精等；
4 過濾除菌，如細菌過濾器；

㈩ 生物實驗室用的高壓蒸汽滅菌鍋 各種物品的滅菌時間是多少（要詳細、要分類）

所謂高壓殺菌是指將食品放人液體介質中，加100MPa－1000MPa的壓力作用一段時間後，如同加熱一樣，殺滅食品中的微生物的過程。高壓滅菌通常認為蛋白質在高壓下立體結構（四級結構）崩潰而發生變性而使細菌失活，但也有人認為凡是以較弱的結合構成的生物體高分子物質如核酸、多糖類、脂肪等物質或細胞膜都會受到超高壓的影響，尤其通過剪切力而使生物體膜破裂，從而使生物體的生命活動受到影響甚至停止，這就可以達到滅菌、殺蟲和效果。高壓滅菌避免了熱處理而出現的影響食品品質的各種弊端，保持了食品的原有風味、色澤和營養價值。由於是液體介質的瞬間壓縮過程，滅菌均勻，無污染，操作安全，且較加熱法耗能低，減少環境污染。勵建榮等研究了經高壓處理後的果汁和蔬菜汁，試驗證實了高壓處理後能達到殺菌效果，而且Vc損失很少，殘存酶活只有4％，色香味等感官指標不變，其綜合效果優於熱力殺菌；動物食品也能達到殺菌效果。目前，國外已將其用於肉、蛋、大豆蛋白、水果、香料、牛奶、果汁、礦泉水、啤酒等物品的加工中。我國在該技術的開發應用方面僅僅處於實驗室研究階段，尚未有批量生產的報道。<br>
<span class="blue">3、高壓脈沖電場殺菌技術</span><br>
高壓脈沖技術用於食品滅酶滅菌，主要原理是基於細胞結構和液態食品體系間的電學特性差異。當把液態食品作為電介質置於電場中時，食品中微生物的細胞膜在強電場作用下被電擊穿，產生不可修復的穿孔或破裂，使細胞組織受損，導致微生物失活。證實在脈沖電場強度為 12－40 Kv／cm，脈沖時間為20μs－18μs的條件下，可有效地對食品進行滅菌，且以雙矩形波最為有效。鄧元修等利用脈沖高壓殺滅酵母和大腸桿菌，取得良好的實驗結果，且能耗低，對試液溫升小於2℃，因而可有效保存食品的營養成分和天然特徵。利用脈沖電場處理大豆，可實現滅酶脫腥，並有效的保留大豆的香氣。該技術是一種常溫下非加熱殺菌的新技術，運用該技術應綜合考慮場強的大小，殺菌時間、食品的pH值、對細菌的種類等因素，以確定最佳方案。目前該技術在國際上正處於實驗室研究和發展階段，進一步成熟後很有可能彌補傳統殺菌法的不足，給液態食品工藝帶來一場變革

高壓滅菌方法
1.將待滅菌器材、試劑放入高壓蒸鍋內，裝液體的瓶中液體不能超過2/3，蓋緊蓋子後松動一圈，或用鋁箔紙包緊；

2. 高壓滅菌開始時，先打開排氣口，待熱水蒸氣排出數分鍾後，關閉閥門滅菌，121度，20分鍾。待壓力降到0後放氣；

3.滅菌後，讓瓶子冷卻，並及時扭緊瓶蓋；

4.可以將高壓蒸鍋蓋留一條縫，在加熱至100度，冷卻後高壓蒸鍋內的器材也自動烘幹了。

5. 一般器材開15-20分鍾即可，液體30分鍾。

註：

1． 有時裝液體的瓶子可能破裂，可將瓶子放在鋼制托盤中，防止瓶子一旦破裂時，試劑流入高壓鍋內。

2． 高壓滅菌全過程中，應有專人看護。

3． 強酸、強鹼、揮發性液體、爆炸性物質不能開蒸鍋。