❶ 如何設計sybrgreen法熒光定量pcr引物
引物 熒光定量PCR 是利用熒光定量PCR 儀(如ABI 7500、stepone、ROChe LightCycler、Bio-Rad CFX96 等)通過實時追蹤 PCR 每一步循環的熒光信號 值來達到對起始模板量的定量分析。一次成功的熒光定量 PCR 反應除了需要穩 定的儀器、優質的 Taq 酶、比較好的模板質量,更需要高質量的引物對。想要 得要高質量的引物對的前提是引物的設計必須要精益求精。下面我們以人IL6 因為例(以人IL6基因mRNA 序列作為模板設計引物),給大家講解如何進行高 質量的引物設計。 (1)利用 NCBI 資料庫,查詢基因的序列。登錄 NCBI 官方主頁: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/。在欄目項中選擇「Gene」,關鍵詞輸入「IL6 homo」,具體如下所示,點擊「Search」。(2)結果如下,一般第一條基因即為所要查詢的基因,這里需要注意「Aliases」 一欄,因為很多基因有很多別名,在查詢時需要注意。明確基因後,直接點擊 ,進入人IL6 基因的主頁。 上海捷瑞生物工程有限公司(3)進入人 IL6 基因的主頁後,往下拉動網頁,看到如下界面。由於我們設計 引物的模板是mRNA,所以我們要找到該基因的轉錄本信息。點擊「reference sequence details」。 (4)得到如下界面,我們看到,人IL6 基因在NCBI 里的記錄是2 個轉錄本, 我們在設計引物時,除非需要檢測某個特定的轉錄本,一般的做法是將該基因所 有的轉錄本序列進行比對分析,找到他們共有的序列區域,選擇該共有區域作為 模板設計引物,這樣設計的引物就能盡可能的擴增出該基因的所有mRNA 信息。 針對IL6 基因,我們分別點擊「NM_000600.4」和「NM_001318095.1」打 開這兩個轉錄本信息。 上海捷瑞生物工程有限公司(5)我們看到,人IL6 基因的兩個轉錄本序列大小不一樣,分別為1197bp 1006bp。我們將這兩條mRNA序列復制到比對軟體(如BIOEDIT 用軟體對這兩條序列進行比對分析。(6)比對結果如下,從比對結果看出,這兩條序列前後均一致,只有轉錄本2 在141-331bp 處發生了缺失,我們選擇共有區域331bp-1197bp 的序列作為 上海捷瑞生物工程有限公司模板設計引物。 (7)將這段共有序列復制到引物設計軟體中,引物設計的軟體很多,比如 Primer premier6.0、Oligo7.37、在線Primer3、Beacon Designer、在線NCBI Primer-BLAST 等。不同的引物設計軟體的工作原理大同小異,基本都具備引物 設計的基本原則(後面列出),但是對引物Tm值的計算結果不同的軟體可能有 差異,這主要跟計算方法有關。捷瑞生物提供免費的引物設計服務,所使用的設 計軟體是自主開發,並自主運行ePCR(電子PCR),具備引物BLAST 功能,盡 量選擇最優化的引物對。下面以在線NCBI Primer-BLAST 為例,說明引物的設 計過程。 (8)打開在線NCBI Primer-BLAST 。將序列復制到制定的位置,如下圖。在「PCR proct size」選擇 Min「80」;Max「250」(熒光定量PCR 產物的大小盡量不要很大,保證PCR 擴增的效率)。在「Database」一欄選擇mRNA 資料庫(一般默認為Refseq mRNA)。在「Organism」一欄選擇物種是人(一般默認為Homo sapiens)。 一切設置好後,點擊「Get Primers」即可。 上海捷瑞生物工程有限公司(9)打開後會出現以下選擇項,需要觀察這段序列是否屬於所要設計的基因序 列,這里直接點擊「Submit」即可。 (10)得到如下結果,圖中給出所設計的引物的上下游引物位置;具體的某一 對引物的參數;該對引物的ePCR 結果等。考察一對引物質量是否理論上優異, 需要看如下幾個方面:引物Tm值一致,盡量在60左右;引物盡量無發卡結 構二聚體等;ePCR 產物盡量單一,盡量無非特異性產物等。 上海捷瑞生物工程有限公司(11)至此,引物設計的工作就結束了,接下來就是將設計的引物序列發送到 引物合成公司合成,在拿到引物成品後,按照儀器和相關試劑盒說明書做預實驗, 調試引物的質量。理論上,選擇再優的引物對,只有且只能通過真實的實驗驗證, 才能100%確定該對引物是否能用。在做熒光定量P CR 實驗時,對引物擴增效 率的測試非常的重要,這塊後續我們再具體探討。 (12)熒光定量PCR 引物設計的一般原則: PCR產物的長度在70-300bp 之間,避免產物太長導致PCR 擴增效率降低, 影響定量結果; 引物設計的區域盡量選擇在mRNA的3』段,盡量保證擴增的產物為該基因 所表達的全部mRNA 信息; 如果一個基因有很多轉錄本,盡量選擇他們的共有序列為模板來設計引物,保證擴增產物的穩定性; 引物盡量避免發卡結構、二聚體結構、非特異性擴增產物、引物Tm值不一致、引物序列中有連續4 個鹼基以上的Poly 結構等等; 總之,理論上再好的引物對,只有通過真實的實驗驗證才能判斷其是否能用、好用。
❷ 南京有沒有做的比較好的實驗外包的公司
南京英瀚斯生物不錯的,有實驗室,還能參與實驗,做的還比較全
❸ 蘇州康寧傑瑞生物科技有限公司怎麼樣
簡介:蘇州康寧傑瑞生物科技有限公司由特聘專家,徐霆博士2009年四月歸國創建。蘇州研發中心共6000餘平方米。已經匯聚百餘位高端人才,並成立博士後工作站;與東南大學成立校企共建技術中心,中科院上海葯物所形成生物大分子葯物戰略合作,與美國Thermo公司合作建立技術平台。研發團隊中博士18人,具有海外經歷的有10餘人,碩士60餘人。研發中心硬體方面前後共投入3億元人民幣,能夠完成從抗體/蛋白葯物早期篩選和工程化、細胞株構建和小試工藝、到中試放大和臨床試驗用葯的生產全部流程。公司的分析質控平台可以自主完成生物大分子葯物的全面深度表徵。早期工藝開發平台包括50L,130L,250L的哺乳動物細胞生產線和100L的原核生產線。中試車間符合CFDA、EMA和FDA的cGMP標准,由包括4條250L,2條1000L哺乳動物細胞生產線的原液車間和6000瓶/小時的無菌制劑灌裝車間組成。動物實驗中心可以完成創新大分子葯物葯效,葯理,葯代,葯動的早期評判。公司在2011年和施慧達葯業集團形成戰略合作。合作內容包括引入資金快速發展蘇州的研發中心;在吉林長春籌建康寧傑瑞(吉林)大分子葯物生產基地,建設符合CFDA,EMA和FDAcGMP標準的的廠房,一期擬投入10億元人民幣;逐步整合施惠達葯業遍布全國的銷售網路,為單抗與蛋白新葯上市做好准備,同時積極開拓國外市場,參與國際競爭。2011年,康寧傑瑞和腫瘤免疫領域的國際著名學者共同成立丁孚靶點生物技術公司,專注腫瘤免疫治療。
法定代表人:徐霆
成立時間:2008-11-06
注冊資本:15000萬人民幣
工商注冊號:320594000126820
企業類型:有限責任公司(自然人投資或控股)
公司地址:蘇州工業園區星湖街218號C23
❹ 上海捷銳科技有限公司怎麼樣
簡介:上海捷銳科技有限公司於2014年6月13日在松江市監局登記成立。法定代表人陳佩妤,公司經營范圍包括從事生物醫葯科技領域內的技術開發、技術轉讓等。
法定代表人:陳佩妤
成立時間:2014-06-13
注冊資本:5000萬人民幣
工商注冊號:310117003138160
企業類型:有限責任公司(外商投資企業法人獨資)
公司地址:上海市松江區小崑山鎮廣富林路4855弄107號202
❺ 請教基因克隆連接載體PTG-19T的精確大小
2880bp
❻ 上海捷瑞生物工程有限公司 待遇怎麼樣
公司人事會修改你的學歷,少交金,女同事懷孕期間,想進各種辦法趕你走,你問問裡面員工就知道是不是真的了。
❼ 生物工程專業可以去那些企業實習 具體的公司名字!!
摘要 你好,可以應聘上海維普生物科技有限公司、上海捷瑞生物工程有限公司,簡稱捷瑞生物上海市高新技術企業、上海生物製品研究所有限責任公司實習。還有上海天偉生物制葯有限公司(地址 : 上海市閔行區金都路4258號,電話 : 021-54427100)等公司。