微生物實驗方法有哪些

① 做微生物實驗的步驟

1、准備工作，培養基的配製及滅菌（121-126度滅30分鍾高壓蒸汽式滅菌），玻璃器皿的滅菌（170度滅2小時乾熱滅菌，也可用濕熱滅菌）若量大可加長滅菌時間。

② 微生物的傳統檢測方法有哪些

傳統檢測有三種方法

1、直接顯微鏡觀察，正常情況，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度以及培養時間），同種微生物表現出穩定的菌落特徵。可以通過顯微鏡觀察菌落特徵對微生物種類進行判斷。

2、選擇培養基培養微生物或人為提供有利於目的菌株生長的條件，選擇培養基，其作用是允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他微生物生長。選擇培養一般是通過觀察微生物的同化作用類型或某一特徵進行間接判斷，得到的微生物往往並不只有一種，但是能夠大致確定這些微生物存在的共有特徵從而對其分類。

3、鑒別培養基，根據微生物的代謝特點，在培養基中加入某種指示劑或化學葯品。與選擇培養相比，鑒別培養基的鑒別所得結果的范圍比較小，一般可直接測定某微生物的種類。

③ 食品衛生微生物學檢驗中常用的生物化學試驗有哪些

食品衛生微生物學檢驗中常用的生物化學試驗有哪些
微生物生化反應是指用化學反應來測定微生物的代謝產物，生化反應常用來鑒別一些在形態和其它方面不易區別的微生物。因此微生物生化反應是微生物分類鑒定中的重要依據之一,微生物檢驗中常用的生化反應介紹如下：

一、糖酵解試驗

不同微生物分解利用糖類的能力有很大差異，或能利用或不能利用，能利用者，或產氣或不產氣。可用指示劑及發酵管檢驗。

試驗方法：以無菌操作，用接種針或環移取純培養物少許，接種於發酵液體培養基管中，若為半固體培養基，則用接種針作穿刺接種。接種後，置36±1.0°C培養，每天觀察結果，檢視培養基顏色有無改變（產酸），小倒管中有無氣泡，微小氣泡亦為產氣陽性，若為半固體培養基，則檢視沿穿刺線和管壁及管底有無微小氣泡，有時還可看出接種菌有無動力，若有動力，培養物可呈彌散生長。本試驗主要是檢查細菌對各種糖、醇和糖苷等的發酵能力，從而進行各種細菌的鑒別，因而每次試驗，常需同時接種多管。一般常用的指示劑為酚紅、溴甲酚紫，溴百里藍和An-drade指示劑。

二、澱粉水解試驗

某些細菌可以產生分解澱粉的酶，把澱粉水解為麥芽糖或葡萄糖。澱粉水解後，遇碘不再變藍色。

試驗方法：以18~24h的純培養物，塗布接種於澱粉瓊脂斜面或平板（一個平板可分區接種，試驗數種培養物）或直接移種於澱粉肉湯中，於36±1°C培養24~48h，或於20℃培養5天。然後將碘試劑直接滴浸於培養表面，若為液體培養物，則加數滴碘試劑於試管中。立即檢視結果，陽性反應（澱粉被分解）為瓊脂培養基呈深藍色、菌落或培養物周圍出現無色透明環、或肉湯顏色無變化。陰性反應則無透明環或肉湯呈深藍色。

澱粉水解系逐步進行的過程，因而試驗結果與菌種產生澱粉酶的能力、培養時間，培養基含有澱粉量和pH等均有一定關系。培養基pH必須為中性或微酸性，以pH7.2最適。澱粉瓊脂平板不宜保存於冰箱，因而以臨用時制備為妥。

三：V-P試驗

某些細菌在葡萄糖蛋白腖水培養基中能分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙醯甲基甲醇，後者在強鹼環境下，被空氣中的氧氧化為二乙醯，二乙醯與蛋白腖中的胍基生成紅色化合物，稱V－P（+）反應。

試驗方法：

1）O』Meara氏法：將試驗菌接種於通用培養基，於36±1°C培養48h，培養液1ml加O』Meara試劑（加有0.3%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氫氧化鈉水溶液）1ml，搖動試管1~2min，靜置於室溫或36±1°C恆溫箱，若4h內不呈現伊紅，即判定為陰性。亦有主張在48~50°C水浴放置2h後判定結果者。

2）Barritt氏法：將試驗菌接種於通用培養基，於36±1°C培養4天、培養液2.5ml先加入a萘酚（2-na-phthol）純酒精溶液0.6ml,再加40%氫氧化鉀水溶液0.2ml，搖動2~5min，陽性菌常立即呈現紅色，若無紅色出現，靜置於室溫或36±1°C恆溫箱，如2h內仍不顯現紅色、可判定為陰性。

3）快速法：將0.5%肌酸溶液2滴放於小試管中、挑取產酸反應的三糖鐵瓊脂斜面培養物一接種環，乳化接種於其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氫氧化鈉水溶液2滴，振動後放置5min，判定結果。不產酸的培養物不能使用。

本試驗一般用於腸桿菌科各菌屬的鑒別。在用於芽胞桿菌和葡萄球菌等其它細菌時，通用培養基中的磷酸鹽可阻礙乙醯甲基醇的產生，故應省去或以氯化鈉代替。

④ 微生物學實驗室常用的滅菌方法有哪些

物理方法

1、溫度

利用溫度進行滅菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方法。高溫可使微生物細胞內的蛋白質和酶類發生變性而失活，從而起滅菌作用，低溫通常起抑菌作用。

1 乾熱滅菌法：

a.灼燒滅菌法：利用火焰直接把微生物燒死。此法徹底可靠，滅菌迅速，但易焚毀物品，所以使用范圍有限，只適合於接種針、環、試管口及不能用的污染物品或實驗動物的屍體等的滅菌。

b.乾熱空氣滅菌法：這是實驗室中常用的一種方法，即把待滅菌的物品均勻地放入烘箱中，升溫至160℃，恆溫1小時即可。此法適用於玻璃皿、金屬用具等的滅菌。

2 濕熱滅菌法：

在同樣的溫度下，濕熱滅菌的效果比乾熱滅菌好，這是因為一方面細胞內蛋白質含水量高，容易變性。另一方面高溫水蒸汽對蛋白質有高度的穿透力，從而加速蛋白質變性而迅速死亡。

a.巴氏消毒法：有些食物會因高溫破壞營養成分或影響質量，如牛奶、醬油、啤酒等，所以只能用較低的溫度來殺死其中的病原微生物，這樣既保持食物的營養和風味，又進行了消毒，保證了食品衛生。該法一般在62℃，30分鍾即可達到消毒目的。此法為法國微生物學家巴斯德首創，故名為巴氏消毒法。

b.煮沸消毒法：直接將要消毒的物品放入清水中，煮沸15分鍾，即可殺死細菌的全部營養和部分芽孢。若在清水中加入1%碳酸鈉或2%的石炭酸，則效果更好。此法適用於注射器、毛巾及解剖用具的消毒。

c.間歇滅菌法：上述兩種方法在常壓下，只能起到消毒作用，而很難做到完全無菌。若採用間歇滅菌的方法，就能殺滅物品中所有的微生物。具體做法是：將待滅菌的物品加熱至100℃，15~30分鍾，殺死其中的營養體。然後冷卻，放入37℃恆溫箱中過夜，讓殘留的芽孢萌發成營養體。第2天再重復上述步驟，三次左右，就可達到滅菌的目的。此法不需加壓滅菌鍋，適於推廣，但操作麻煩，所需時間長。

d. 加壓蒸汽滅菌法：這是發酵工業、醫療保健、食品檢測和微生物學實驗室中最常用的一種滅菌方法。它適用於各種耐熱、體積大的培養基的滅菌，也適用於玻璃器皿、工作服等物品的滅菌。

加壓蒸汽滅菌是把待滅菌的物品放在一個可密閉的加壓蒸汽滅菌鍋中進行的，以大量蒸汽使其中壓力升高。由於蒸汽壓的上升，水的沸點也隨之提高。在蒸汽壓達到1.055公斤/厘米2時，加壓蒸汽滅菌鍋內的溫度可達到121℃。在這種情況下，微生物（包括芽孢）在15~20分鍾便會被殺死，而達到滅菌目的。如滅菌的對象是砂土、石蠟油等面積大、含菌多、傳熱差的物品，則應適當延長滅菌時間。

在加壓蒸汽滅菌中，要引起注意的一個問題是，在恆壓之前，一定要排盡滅菌鍋中的冷空氣，否則表上的蒸汽壓與蒸汽溫度之間不具對應關系，這樣會大大降低滅菌效果。

3 影響滅菌的因素：

a.不同的微生物或同種微生物的不同菌齡對高溫的敏感性不同。多數微生物的營養體和病毒在50~65℃，10分鍾就會被殺死；但各種孢子、特別是芽孢最能抗熱，其中抗熱性最強的是嗜熱脂肪芽孢桿菌，要在121℃，12分鍾才被殺死。對同種微生物來講，幼齡菌比老齡菌對熱更敏感。

b.微生物的數量多少顯然會影響滅菌的效果，數量越多，熱死時間越長。

c.培養基的成分與組成也會影響滅菌效果。一般地講，蛋白質、糖或脂肪存在，則提高抗熱性，pH在7附近，抗熱性最強，偏向兩極，則抗熱能力下降，而不同的鹽類可能對滅菌產生不同的影響；固體培養基要比液體培養基滅菌時間長。

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滅菌對培養基成分的影響：

a.pH值普遍下降。

b.產生混濁或沉澱，這主要是由於一些離子發生化學反應而產生混濁或沉澱。例如Ca+2與PO4-3化合，就會產生磷酸鈣沉澱。

c.不少培養基顏色加深。

d.體積和濃度有所變化。

e.營養成分有時受到破壞。

2、輻射

利用輻射進行滅菌消毒，可以避免高溫滅菌或化學葯劑消毒的缺點，所以應用越來越廣，目前主要應用在以下幾個方面：

1）接種室、手術室、食品、葯物包裝室常應用紫外線殺菌。

2）應用β射線作食品表面殺菌，γ射線用於食品內部殺菌。經輻射後的食品，因大量微生物被殺滅，再用冷凍保藏，可使保存期延長。

3、過濾

採用機械方法，設計一種濾孔比細菌還小的篩子，做成各種過濾器。通過過濾，只讓液體培養基從篩子中流下，而把各種微生物菌體留在篩子上面，從而達到除菌的目的。這種滅菌方法適用於一些對熱不穩定的體積小的液體培養基的滅菌以及氣體的滅菌。它的最大優點是不破壞培養基中各種物質的化學成分。但是比細菌還小的病毒仍然能留在液體培養基內，有時會給實驗帶來一定的麻煩。

二 化學方法

一般化學葯劑無法殺死所有的微生物，而只能殺死其中的病原微生物，所以是起消毒劑的作用，而不是滅菌劑。

能迅速殺滅病原微生物的葯物，稱為消毒劑。能抑制或阻止微生物生長繁殖的葯物，稱為防腐劑。但是一種化學葯物是殺菌還是抑菌，常不易嚴格區分。消毒劑在低濃度時也能殺菌（如1：1000硫柳汞）。由於消毒防腐劑沒有選擇性，因此對一切活細胞都有毒性，不僅能殺死或抑制病原微生物，而且對人體組織細胞也有損傷作用，所以只能用於體表、器械、排泄物和周圍環境的消毒。

常用的化學消毒劑有：石碳酸、來蘇水（甲醛溶液）、氯化汞、碘酒、酒精等。答案來自

⑤ 微生物計數方法有哪些我想知道詳細的操作步驟

微生物的顯微直接計數法

一、實驗目的
了解血球計數板的構造、計數原理和計數方法，掌握顯微鏡下直接計數的技能。
二、實驗原理
測定微生物細胞數量的方法很多，通常採用的有顯微直接計數法和平板計數法。
顯微計數法適用於各種含單細胞菌體的純培養懸浮液，如有雜菌或雜質，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或黴菌孢子可採用血球計數板，一般細菌則採用彼得羅夫·霍澤（Petrof Hausser）細菌計數板。兩種計數板的原理和部件相同，只是細菌計數板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數板較厚，不能使用油鏡，計數板下部的細菌不易看清。
血球計數板是一塊特製的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構成3個平台。中間的平台較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個計數區（圖21-1），計數區的刻度有兩種：一種是計數區分為16個大方格（大方格用三線隔開），而每個大方格又分成25個小方格；另一種是一個計數區分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數區是哪一種構造，它們都有一個共同特點，即計數區都由400個小方格組成。
計數區邊長為1mm，則計數區的面積為l mm2，每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片後，計數區的高度為0.1mm，所以每個計數區的體積為0.1mm3，每個小方格的體積為1/4000mm3。
使用血球計數板計數時，先要測定每個小方格中微生物的數量，再換算成每毫升菌液（或每克樣品）中微生物細胞的數量。
已知：1mm3體積=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3
所以：1mm3體積應含有小方格數為1000mm3/1/4000mm3=4×106個小方格，即系數K=4×106 。
因此：每ml菌懸液中含有細胞數= 每個小格中細胞平均數（N）×系數（K）×菌液稀釋倍數（d）
三、實驗器材
1．活材料：釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培養液。
2．器材：顯微鏡、血球計數板、蓋玻片（22mm×22mm）、吸水紙、計數器、滴管、擦鏡紙。
四、實驗方法
1．視待測菌懸液濃度，加無菌水適當稀釋（斜面一般稀釋到10-2），以每小格的菌數可數為度。
2．取潔凈的血球計數板一塊，在計數區上蓋上一塊蓋玻片。
3．將酵母菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數板中間平台兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區，勿使氣泡產生，並用吸水紙吸去溝槽中流出的多餘菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上，不要使計數區兩邊平台沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片後，造成計數區深度的升高。然後加蓋蓋玻片（勿使產生氣泡）。4．靜置片刻，將血球計數板置載物台上夾穩，先在低倍鏡下找到計數區後，再轉換高倍鏡觀察並計數。由於生活細胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應減弱光照的強度。
5．計數時若計數區是由16個大方格組成，按對角線方位，數左上、左下、右上、右下的4個大方格（即100小格）的菌數。如果是25個大方格組成的計數區，除數上述四個大方格外，還需數中央l個大方格的菌數（即80個小格）。如菌體位於大方格的雙線上，計數時則數上線不數下線，數左線不數右線，以減少誤差。
6．對於出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2—3次（每次數值不應相差過大，否則應重新操作），求出每一個小格中細胞平均數（N），按公式計算出每ml（g）菌懸液所含酵母菌細胞數量。
7．測數完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網格刻度。洗凈後自行晾乾或用吹風機吹乾，放入盒內保存。
五、實驗作業：
將實驗結果填入下表中：
計數次數 每個大方格菌數 稀 釋
倍 數 試管斜面中的總菌數 平均值
1 2 3 4 5
第一次
第二次

⑥ 病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些

1、快速測試片技術法

快速測試片是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體，將特定的培養基和顯色物質附著在上面，通過微生物在上面的生長、顯色來測定食品中微生物的方法。

細菌總數檢測紙片的研製始於 20 世紀 80 年代，其主要優點是簡便、實用、經濟、操作性強。近年來以濾紙和美國某公司的 Petrifilm 為載體的測試片已開始被廣泛應用。

2、生物電化學方法

生物電化學方法是指通過電極測定微生物產生或消耗的電荷，從而提供分析信號的方法。微生物在滋生代謝過程中，培養基的電化學性質如電流、電位、電阻和電導等會發生變化，所以可以通過檢測分析這些電化學參量的變化來實現對微生物的快速測定。

常見的有：阻抗分析法、電位分析法、電流分析法等。生物電化學方法具有測量快速、直觀、操作簡單、測量設備成本低和信號的可控性等特點。

3、微菌落技術

微菌落是指細菌生長繁殖早期在固相載體上所形成的只能藉助於顯微鏡觀察的微小菌落。微菌落技術具有快速、經濟、實用的特點，其研究始於 20 世紀50年代，定量測定技術從 20 世紀 70 年代開始，國外已有報道將該法應用於水、食品中細菌總數的快速檢測。

4、氣相色譜法

氣相色譜應用到微生物的檢測中，主要是依據不同微生物的化學組成或其產生的代謝產物各異，利用上述色譜檢測可直接分析各種體液中的細菌代謝產物、細胞中的脂肪酸、蛋白質、氨基酸、多肽、多糖等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。

5、高效液相色譜法

利用高效液相色譜檢測可分析各種體液中的細菌代謝產物、病原微生物等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。

⑦ 微生物學實驗方案

沒有什麼時間，我簡單解釋一下，語言你可以自己組織，意思對了豐富一下以下內容就可以了哈：
1、取材。指材料選擇，微生物分離一般來源是自然界的土壤及其他生物體內。你最好選擇在常年高溫的環境中采樣。譬如火山口，熱泉口，常年高溫的戈壁沙漠土壤等。
2、分離。指分離野生菌株。在實驗室，分離微生物的傳統途徑是選擇合適的培養基選擇性分離土壤中的微生物，這個題目的要求說明實驗中需要在高溫條件培養，最好選用多種培養基，以便於分離到種類較多的各類微生物。相關實驗技術請自行查閱書籍。
3、純化。微生物分離過程中重要一步，目的是需要得到菌株的純培養，即多次純化過程中需挑取單菌落接種擴培，同時可以起到活化菌株生命力的作用。當然此過程中合適的培養基相當重要。否則菌株可能反而退化失活。
4、篩選。獲得適合高溫生長的菌株庫之後，依據要求篩選菌株。即指提供單因子培養條件篩選，譬如選擇能產高溫蛋白酶的，需要在培養基中單一添加高級蛋白（即未降解過的或未腖化過的）作為氮源，以葡萄糖或其他易利用糖類作單一碳源。又如選擇產高溫澱粉酶的，以澱粉作為單一碳源，補充其他無碳利用的氮源。能在選擇條件下生長的為目的菌株。
5、確證。得到目的菌株後即可通過相應的酶提取方法確證。提取總酶在高溫條件下進行體外蛋白消化或者澱粉消化實驗來確證。

⑧ 微生物檢測包括哪些啊

食品中微生物指標的常見檢驗項目如下：菌落總數、大腸菌群計數、大腸桿菌計數、腸道致病菌（沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌）、副溶血性弧菌、單核細胞增生李斯特氏菌、雙岐桿菌、空腸彎麴菌、黴菌計數和酵母計數。

一般食品中活菌數達到108cfu.g⁻¹時，則可認為食品處於初期腐敗階段。

(8)微生物實驗方法有哪些擴展閱讀

微生物檢驗方法包括顯微鏡檢、染色技術、培養基制備技術、接種、分離純化和培養技術等。

接種，將微生物接到適於它生長繁殖的人工培養基上或活的生物體內的過程。

分離純化，在進行菌種鑒定時，所用的微生物一般均要求為純的培養物。得到純培養的過程。

培養，根據培養時是否需要氧氣，可分為好氧培養和厭氧培養。根據培養基的物理狀態，可分為固體培養和液體培養兩大類。

⑨ 微生物學的檢查方法是有哪些

微生物學檢查法

標本

因鼠疫傳染性極強，採集標本時必須嚴格無菌操作。根據病型採取淋巴結穿刺液、腫脹部位組織液、膿汁，血液和痰等。人和動物屍體可取肝、脾、肺、病變淋巴結以及心血等。陳舊屍體取骨髓。將採集標本送至有嚴密防護措施的專門實驗室進行檢查，禁止在一般實驗室進行操作。

直接塗片鏡檢

除血液標本外，一般均需塗片或印片，乾燥後用甲醇固定，革蘭染色或呂氏美蘭染色，鏡檢。在不同材料中，菌體大小、形態有很大差異，除典型形態外，往往可見菌體呈多形態性，需加以注意。

分離培養與鑒定

血液標本需先置肉湯中進行增菌培養。分離培養一般選用血瓊脂平板，28攝氏度24小時後，可見較小的露滴狀菌落，繼續培養則菌落增大至1～2毫米，中央厚而緻密，周邊逐漸變薄。取可疑菌落進行塗片染色鏡檢，噬菌體裂解試驗，血清凝集試驗，特異熒光抗體染色等作出鑒訂。

血清學試驗

可用於檢查鼠疫耶爾森菌抗原或特異性抗體。敏感而特異的試驗方法有ELISA、固相放射免疫分析，SPA協同凝集試驗等。

檢測核酸

用DNA探針雜交方法或PCR技術檢測鼠疫耶爾森菌核酸，有助於鼠疫的診斷。PCR敏感性極高，蚤體內有10個鼠疫耶爾森菌感染即可用PCR技術檢出。

診斷檢查

診斷：取決於病人有接觸史及肺部受累表現，病因診斷取決於痰、血或淋巴結吸出物革蘭染色、培養，有條件的單位可作直接熒光素標記抗體染色，可提供快速的病因診斷。

⑩ 有哪些容易做的微生物實驗

做革蘭氏染色吧！比較簡單又有一定的技術含量。
一、實驗步驟
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：
1）塗片固定。
2）草酸銨結晶紫染1分鍾。
3）自來水沖洗。
4）加碘液覆蓋塗面染約1分鍾。
5）水洗，用吸水紙吸去水分。
6）加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，20秒後水洗，吸去水分。
7）蕃紅梁色液（稀）染2分鍾後，自來水沖洗。乾燥，鏡檢。

二、實驗原理：通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙，，因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差，在遇脫色劑後，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而鬆散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出，因此通過乙醇脫色後仍呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
三、染色結果
革蘭氏正反應菌體都呈紫色，負反應菌體都呈紅色。