塗布法如何製作微生物標本

① 塗布法是微生物檢測中經常使用到的,適合哪種微生物的分離和檢測

塗布法適用於好氧微生物的培養，最好是單細胞微生物，或有孢子或芽孢，由於將含菌材料現加到還較燙的培養基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，而且採用稀釋倒平板法也會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長，因此在微生物學研究中更常用的純種分離方法是稀釋塗布平板法。

② 請寫出製作微生物玻片標本的具體步驟。

製作微生物玻片標本通常採用塗片法，微生物包括細菌和真菌（或包括病毒），細菌個體小，通常用塗片法製作玻片標本。塗片法是裝片法製作玻片標本的一種方法。製作方法是，細菌可以用細菌液直接塗布在載玻片上，蓋上蓋片直接觀察或乾燥後染色觀察，染色觀察通常需要洗去染色液後觀察。製作真菌標本可以採用塗片法、撕片法、貼片法和切片法，單細胞或孢子或菌絲採用塗片法，大型真菌有較大的組織塊，可以採用撕片法（如撕取一部分蘑菇絲）、貼片法（將蘑菇的菌褶貼到載片上）和切片法（切片的方式觀察蘑菇的結構）。
製作植物玻片標本方法很多，根據材料不同和觀察目的不同採用不同方法。塗片法（觀察果實營養組織，如西瓜瓤）、撕片法（觀察洋蔥表皮、觀察導管）、切片法（觀察組織、器官結構）、磨片法（堅硬的果核磨成薄片觀察）。
切片法分為徒手切片、冰凍切片和石蠟切片等方法。

③ 微生物平板塗布注意事項

微生物平板塗布注意事項：

1、樣品要准確稱取待測樣品l0g，放入裝有90ml無菌水並放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置搖床上振盪20min，使微生物細胞分散，靜置20-30s，即成10-1稀釋液。

2、用稀釋平板計數時，待測菌稀釋度的選擇應根據樣品確定。樣品中所含待測菌的數量多時，稀釋度應高，反之則低。

3、塗抹平板計數法與混合法基本相同，所不同的是先將培養基熔化後趁熱倒入無菌平板中，待凝固後編號，然後用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上。

(3)塗布法如何製作微生物標本擴展閱讀：

塗布平板法的特徵：

稀釋平板計數是根據微生物在固體培養基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養特徵設計的計數方法，即一個菌落代表一個單細胞。計數時，首先將待測樣品製成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在。

再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布於平板中的培養基內。經培養後，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統計菌落數目，即可計算出樣品中的含菌數。

此法所計算的菌數是培養基上長出來的菌落數，故又稱活菌計數。一般用於某些成品檢定（如殺蟲菌劑等）、生物製品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗。

參考資料來源：網路—塗布平板法

④ 簡述如何利用澆注平板法和塗布平板法分離微生物，這兩種方法的適用范圍分別是什麼

兩種辦法都是先要做好固體培養基的配製，之後滅菌後備用。
1、先將樣品按10稀釋法進行系列稀釋，用的是無菌水即可。根據樣品中微生物數目的多少確定用哪三個連續稀釋度，一般先10的負6次方到10的負8次方。
2、塗布法，將滅菌的培養基冷卻到攝氏50度左右時，倒入無菌的空平板，冷卻凝固後備用；將稀釋的樣品取1毫升放於凝固的固體培養基表面，之後用無菌的玻璃塗棒分布均勻。
3、澆平板法：將1毫升稀釋的樣品放於空白的無菌培養皿，之後將冷卻到45-50度之間的培養基倒入，輕搖混勻、凝固。
4、待完全凝固後倒置培養，即可獲得單一菌落。

適用范圍：
澆平板法適用於兼性微生物的培養，塗布法適用於好氧微生物的培養。最好是單細胞微生物，或有孢子或芽孢。

⑤ 簡述如何利用澆注平板法和塗布平板法分離微生物，這兩種方法的適用范圍分別是什麼

澆注平板法和塗布平板法的一開始可能是被塗布物品稀釋多少個稀釋倍數，然後進行澆注，看菌落，塗布法好像在稀釋度上可以進行一個塗布以後這個塗布棒上所帶菌體已經量少了，所以再塗布另一個，可能不用太稀釋也可以做到。但是很多菌體可能由於對培養基的親和性比較好，所以在高濃的時候已經脫離塗布棒，可能有些微生物分離不到。（只是個人的觀點）

⑥ 稀釋塗布法是怎麼樣的

稀釋塗布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然後將不同稀釋度的菌液分別塗布到瓊脂固體培養基表面，進行培養。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個菌落。

稀釋平板塗布大部分是用於統計細菌數目的，不知道哪個稀釋濃度最後長出來有適合統計的菌落數，所以必須每個稀釋度都塗板子。

倒平板的方法

如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨後挑取該單個菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。

平板培養基的冷凝方法有兩種，一種是將平板一個個攤開在桌面上冷凝，另一方法是將幾個平板疊在一起冷凝。前者冷凝速度較快，在室溫較高時採用；而後者冷凝速度較慢，可在室溫較低時採用，其優點是形成冷凝水少，尤其適用於平板劃線等的需要。

以上內容參考：網路-稀釋倒平板法

⑦ 高中生物，塗布分離法是指什麼，什麼情況下使用

學生問題：選修1《微生物的應用》教學中，什麼時候用平板劃線分離法？什麼時候用稀釋塗布法？
1．平板劃線分離法
把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環在平板培養基，通過分區劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經培養後生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當作待分離微生物的純種。

優點：可以觀察菌落特徵，對混合菌進行分離。
缺點：不能計數，一般用於從菌種的分離純化。
例如：篩選大腸桿菌菌種。
2．稀釋塗布平板法
將菌液進行一系列的梯度稀釋，然後將不同稀釋度的菌液分別塗布到瓊脂固體培養基的表面，進行培養。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落。
優點：可以計數，可以觀察菌落特徵。
缺點：吸收量較少，較麻煩，平板不幹燥效果不好，容易蔓延。一般用於平板培養基的回收率計數。
例如：測定純凈水中大腸桿菌的含量。

⑧ 跪求 土壤微生物的測定：塗布平板法 測定細菌、真菌和放線菌的實驗步驟（詳細）

塗布平板法實驗器材 牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基配製 牛肉膏 0.3g
蛋白腖 1g
氯化鈉 0.5g
瓊脂 2g
自來水 100mL
pH 7.0～7.2 滅菌 1.05kg/cm2，22min
配製具體步驟
1．稱量
按培養基配方比例依次准確地稱取牛肉膏、蛋白腖、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化後倒入燒杯。也可放在稱量紙上，稱量後直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然後立即取出紙片。蛋白腖很易吸潮，在稱取時動作要迅速。另外，稱葯品時嚴防葯品混雜，一把牛角匙用於一種葯品，或稱取一種葯品後，洗凈、擦乾，再稱取另一葯品，瓶蓋也不要蓋錯。
2．溶化
在上述燒杯中可先加入少於所需要的水量，用玻棒攪勻，然後，在石棉網上加熱使其溶解。待葯品完全溶解後，補充水分到所需的總體積。如果配製固體培養基，將稱好的瓊脂放入已溶化的葯品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最後補足所失的水分。
3．調pH
在未調pH前，先用精密pH試紙測量培養基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培養基中逐滴加入1mol/L NaOH，邊加邊攪拌，並隨時用pH試紙測其pH值，直至pH達7．6。反之，則用1mol/L HCl進行調節。注意pH值不要調過頭，以避免回調，否則，將會影響培養基內各離子的濃度。
對於有些要求pH值較精確的微生物，其pH的調節可用酸度計進行（使用方法，可參考有關說明書）。
4．過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利結果的觀察。一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去（本實驗無需過濾）。很多都是不需要過濾的。
5．分裝
按實驗要求，可將配製的培養基分裝入試管內或三角燒瓶內。分裝裝置見圖Ⅴ-1。
分裝過程中注意不要使培養基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。
(2)固體分裝分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌後製成斜面，如圖Ⅴ-2。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。
(3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜，滅菌後垂直待凝。
6．加塞
培養基分裝完畢後，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養基內而造成污染，並保證有良好的通氣性能（棉塞製作方法附本實驗後面）。
7．包紮
加塞後，將全部試管用麻繩捆紮好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩紮好。用記號筆註明培養基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞後，外包牛皮紙，用麻繩以活結形式紮好，使用時容易解開，同樣用記號筆註明培養基名稱、組別、日期。
8．滅菌
將上述培養基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃， 20分鍾高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌，則應放入冰箱內暫存。
9．擱置斜面
將滅菌的試管培養基冷至50℃左右，將試管棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。
10．無菌檢查
將滅菌的培養基放入37℃的溫室中培養24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。

1．活材料：蘇雲金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis）菌劑。
2．培養基：牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基（附錄三、1）
3．器材：90ml無菌水、9ml無菌水、無菌平皿、lml無菌吸管、天平、稱樣瓶、記號筆、玻璃刮鏟等。
四、實驗方法
1．樣品稀釋液的制備 准確稱取待測樣品l0g，放入裝有90ml無菌水並放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置搖床上振盪20min，使微生物細胞分散，靜置20-30s，即成10-1稀釋液；再用1ml無菌吸管，吸取10-1稀釋液lml，移入裝有9ml無菌水的試管中，吹吸3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液；再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1ml，移入裝有9ml無菌水的試管中，也吹吸三次，即成l0-3稀釋液；以此類推，連續稀釋，製成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀釋菌液（圖22-1）。
圖22-1 平板計數法中樣品的稀釋和稀釋液的取樣培養
用稀釋平板計數時，待測菌稀釋度的選擇應根據樣品確定。樣品中所含待測菌的數量多時，稀釋度應高，反之則低。通常測定細菌菌劑含菌數時，採用10-7、10-8、10-9稀釋度，測定土壤細菌數量時，採用10-4、10-5、10-6稀釋度，測定放線菌數量時，採用l0-3、10-4、10-5稀釋度，測定真菌數量時，採用10-2、10-3、10-4稀釋度。
2．平板接種培養 平板接種培養有混合平板培養法和塗抹平板培養法兩種方法。
（1）混合平板培養法 將無菌平板編上10-7、10-8、10-9號碼，每一號碼設置三個重復，用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號10-9的3個平板中，同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號10-8的3個平板中，再吸取10-7稀釋液各lml放入編號10-7的3個平板中（由低濃度向高濃度時，吸管可不必更換）。然後在9個平板中分別倒入已融化並冷卻至45—50℃的細菌培養基(圖22-2)，輕輕轉動平板，使菌液與培養基混合均勻，冷疑後倒置，適溫培養。至長出菌落後即可計數。
（2）塗抹平板計數法 塗抹平板計數法與混合法基本相同，所不同的是先將培養基熔化後趁熱倒入無菌平板中，待凝固後編號，然後用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上（每個編號設三個重復）。再用無菌刮鏟將菌液在平板上塗抹均勻（圖22-3），每個稀釋度用一個滅菌刮鏟，更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃度向高濃度塗抹時，也可以不更換刮鏟。將塗抹好的平板平放於桌上20—30min，使菌液滲透入培養基內，然後將平板倒轉，保溫培養，至長出菌落後即可計數。

⑨ 微生物實驗平板製作方法

（1）培養基的營養構成：各種培養基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽。分為液體培養基和固體培養基。
制備牛肉膏蛋白腖固體培養基的方法：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。
（2）常用消毒方法：煮沸消毒法、紫外線照射、巴氏消毒法和化學葯劑消毒。
（3）常用滅菌方法：灼燒滅菌、乾熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法。
培養基、培養皿、接種環、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所採用的滅菌和消毒方法依次：高壓蒸汽滅菌、乾熱滅菌、灼燒滅菌、化學消毒、紫外線滅菌、巴氏消毒法。
（4）平板培養基的制備：計算、稱量、融化、滅菌、倒平板。
（5）接種方法：平板劃線法和稀釋塗布法。
倒平板的方法：右手持盛培養基的試管或三角瓶置火焰旁邊，用左手將試管塞或瓶塞輕輕地撥出，試管或瓶口保持對著火焰；然後用右手手掌邊緣或小指與無名指夾住管（瓶）塞（也可將試管塞或瓶塞放在左手邊緣或小指與無名指之間夾住。如果試管內或三角瓶內的培養基一次用完，管塞或瓶塞則不必夾在手中）。左手拿培養皿並將皿蓋在火焰附近打開一縫，迅速例入培養基約15mL，加蓋後輕輕搖動培養皿，使培養基均勻分布在培養皿底部，然後平置於桌面上，待凝後即為平板。
平板劃線操作：
①挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量菌種。
②劃A區：將平板倒置於煤氣（酒精）燈旁,左手拿出皿底並盡量使平板垂直於桌面，有培養基一面向著煤氣燈（這時皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁)，右手拿接種環先在A區劃3—4條連續的平行線(線條多少應依挑菌量的多少面定）。劃完A區後應立即燒掉環上的殘菌，以免因菌過多而影響後面各區的分離效果。在燒接種環時，左手持皿底並將其覆蓋在皿蓋上方(不要放入皿蓋內)，以防止雜菌的污染。

⑩ 混菌法和塗布法

兩個差不多，不過我推薦你使用塗布法。混菌法比較難，反正當時我們做微生物實驗時做過比較，結果用塗布法長出的菌落比混菌法好，污染少。不過，混菌法有利於混勻菌液。
混菌法：首先准備干凈滅菌的平板，然後吸取一定量的菌液於培養皿中，再倒入溫度已經降到60度以下（差不多也行）的培養基，蓋上蓋子，平置於桌上來回輕輕移動使之充分混勻。整個過程一定是無菌操作。
塗布法：首先配置系列濃度的菌液（你是化學專業的所以這個你應該會吧？不過，提醒下，配製時移液管要用滅過菌的，移液時不用洗耳球用嘴巴吸、吹，一般稀釋到10^(-6)就行，這個視你本來菌液的濃度而定），然後吸取你要的那個濃度的菌液（一定量）於准備好的培養基中，在用專門的玻璃塗棒（這個的名字我忘了）塗勻就行了。整個過程無菌操作。
至於培養的時間，溫度等得看你培養的是什麼菌，這個網上有的。