如何對實驗動物進行微生物學控制

1. 腸道微生物對實驗動物標准化的影響，以及如何避免和利用腸道微生物進行實驗動物實驗

環境質量標准化控制主要是通過環境設施來控制，實驗動物設施通過嚴格控制人流、物流和氣流，使得動物所在的環境保持溫度、濕度、氣流、空氣顆粒數、噪音等保持恆定。所以說一個好的實驗動物設施對實驗動物微生物標準的控制起到至關重要的作用。
遺傳質量的控制首要是要保證你有質量合格的種子，然後是要通過人為日常操作時要做好動物的繁殖記錄，不要造成遺產污染。

2. 醫學實驗動物學的生物安全涉及哪些主要方面

實驗動物學是以實驗動物為主要研究對象,並將培育的試驗動物應用於生命科學等研究的一門綜合性學科。簡而言之，它是研究實驗動物和動物實驗的一門綜合性學科。

1、實驗動物遺傳育種學運用遺傳調控原理，控制動物的遺傳特性，培育新的實驗動物品種、品系和各種動物模型，從而達到實驗動物科學的目的。

2、實驗動物微生物學和寄生蟲學是研究實驗動物的分類、生物學特性及其與人和動物關系的科學。

3、主要研究物理化學因素（溫度、濕度、空氣流量、風速、氣壓、氨氣、有害氣體等）、營養因素（飼料、水等）、生活環境（房屋、籠子、床上用品、飲水用具等）、生物因素（個體間關系、飼養密度等）的影響，實驗動物身上的微生物、寄生蟲、其他動物和人類等。

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研究方法：動物門類繁多，作為學科也極其復雜，但綜合起來，其研究方法不外：

1、描述法：通過觀察，用文字和數字記錄動物的外形、內部結構、生活習性、經濟和學術意義。

2、比較法：通過動物間的系統比較，推斷出動物之間的異同，了解它們之間的內在聯系，進而得出規律。

3、實驗法：在人為條件下，採用物理、化學、生物等方法觀察動物的生命和生命活動現象，揭示動物生命和生命活動的本質，實驗法和比較法往往同時進行。

3. 1）什麼是標准實驗動物我們現在通常使用什麼標准實驗動物，使用標准實驗動物有什麼現實意義

標准化實驗動物是指遺傳背景明確或來源清楚的。
現在常用的醫學實驗動物

1. 小鼠：醫學實驗中常用的小鼠，屬於哺乳綱，嚙齒目，鼠科，鼠屬，小家鼠種動物。其體型小易捉，操作方便，而且其生長期短、成熟早、繁殖力強。性情溫馴，膽小怕驚，對環境反應敏感。小鼠作為成熟的實驗動物，具有很多的品系，是醫學實驗中用途最廣泛和最常用的動物。適合作葯物和腫瘤學研究。
2. 大鼠：我國醫學實驗中常用的大鼠為大白鼠，屬於脊椎動物門，哺乳綱，嚙齒目，鼠科，大鼠屬動物。其性情較溫順。
受驚時表現兇狠，易咬人。大白鼠的嗅覺靈敏，對噪音敏感，而且對營養缺乏也非常的敏感。由於大白鼠繁殖力強，易飼養，體型大小合適，給葯容易，采樣量合適方便，故在醫學實驗中的用量僅次於小鼠。適合作葯物和腫瘤學研究。

3. 豚鼠：豚鼠又名海豬、天竺鼠、荷蘭豬。屬哺乳綱，嚙齒目，豪豬形亞目，豚鼠科，豚鼠鼠動物。其性情溫馴，膽小怕驚。很少咬人或抓手。由於豚鼠的遲發性超敏反應與人類相似，所以豚鼠是過敏性休克和變態反應研究的首選動物。而且豚鼠對許多病原微生物和抗生素都十分敏感，也是病理學和葯理學研究的首選。
4. 家兔：家兔屬於哺乳綱，兔形目，兔科，穴兔屬，為草食哺乳動物。家兔品種多，但在實驗室中經常用的有四種：
（1）大耳白兔：特點是耳朵大，膚色白，血管透明清晰，但是抵抗力差。
（2）中國本兔（白家兔）：體小力弱，但抵抗力比大耳白兔稍強。
（3）青紫藍兔：容易飼養，生長期短，體質強壯，抵抗力強。
（4）紐西蘭白兔：是近年來引進的優良品種，成熟兔體重在4～5.5kg。
家兔性情溫順、膽小、怯懦、驚疑，易飼養、抗病力強、繁殖率高，是常用的實驗動物。家兔最大用處是生產抗體，制備高效價和特異性強的免疫血清。也可用於炎症、發熱、休克、急性心血管試驗等許多實驗。

5． 貓：貓屬於哺乳綱，真獸亞目，食肉目，貓科動物。貓用於醫學研究已有幾百年的歷史，因為它的適應性很強，而且其生理學特性及對疾病的反應上與人類相似，所以它在醫學上有不可取代的作用，廣泛的應用於神經、生理、毒理學、葯理學、心血管功能急性實驗、血液病等的研究。
6． 狗：狗屬於脊椎動物門，哺乳綱，食肉目，犬科，犬屬動物。狗的嗅覺很靈敏，對外環境的適應力強，而且喜歡接近人易於馴養。由於狗的神經系統和血液循環系統很發達，廣泛用於病理學、生理學、外科學、免疫學、葯理學、毒理學、生物化學、營養學等研究。故常用於失血性休克、彌漫性血管凝血、急性心肌梗死、急性肺動脈高血壓、條件反射等實驗。

7． 獼猴：獼猴屬於哺乳綱，靈長目，猴科，獼猴屬動物。獼猴作為靈長類動物，在組織結構、生理、代謝機能等方面同人類極為相似，是人類的近屬動物，故它是一種極為珍貴的實驗動物。用此類動物進行實驗，最易解決人類的病害，研究出其發病機制。一般應用於寄生蟲病、生殖生理、葯理學、毒理學、口腔醫學、細菌性疾病、營養代謝、內分泌學等的研究。

8． 小型豬：小型豬和豬都屬於哺乳綱，偶蹄目，不反芻亞目，野豬科，豬屬動物。由於普通家豬軀體大，不便於用作實驗，所以很早就開始著手研究家豬小型化了。豬的心血管、免疫系統、消化器官、眼球、腎臟、皮膚等在組織生理和營養代謝方面與人類有極為相似的地方，所以豬也被列為重要的實驗動物。一般應用於腫瘤學、心血管、免疫學、糖尿病、畸形學、遺傳學等研究。

9． 蟾蜍：蟾蜍和青蛙都屬於兩棲綱，無尾目。蟾蜍和青蛙是教學實驗中常用的小動物。其心臟在離體情況下仍可有節奏地搏動很久，可用於心功能不全的實驗。蛙舌與腸系膜是觀察炎症和微循環變化的良好標本

實驗動物的標准化是指實驗動物從微生物質量和遺傳學質量進行控制，按微生物學控制標准，即根據微生物的凈化程度及攜帶的寄生蟲狀況，將實驗動物分為四級：一級=普通動物；二級=清潔動物；三級=無特定病原體動物；四級=五菌動物。按遺傳學控制標准即基因的純和度，實驗動物分為近交系和遠交系。由於實驗動物在不同種類，不同品系之間遺傳特性存在差異，其實驗反應也存在差異，這些差異必然對實驗結果產生影響。同時，還要對實驗動物的環境，營養進行控制。達到實驗動物的標准化，研究者可根據課題研究的目的和要求選擇適當等級的動物，在相應等級的實驗條件下完成的實驗研究，才能證明實驗結果是可信的，科學的

實驗動物科學發展的較終目的，就是要通過對動物本身生命現象的研究，進而推用到人類，探索人類的生命奧秘，控制人類的疾病和衰老，延長人類的壽命。隨著醫學生物科學的突飛猛進發展，認識到公害問題不僅已成為糧食、人口、老年人等的重大社會問題，而且還涉及到地球上生活著的動物生存問題，例如產業公害、食品公害、葯品毒性等，均直接影響人體健康，對這些問題的研究，較終必然要通過動物實驗（包括動物疾病模型的開發等）來闡明解決。因此，實驗動物科學，特別是實驗動物的重要性愈來愈被人們所認識，它已被認為是人類追求幸福生活的支柱，故實驗動物科學亦被稱之為生命科學；為此，先進國家對實驗動物科學的發展，均給給予高度的重視，其投入的經濟物資和技術力量，幾乎可同發展原子能科學相提並論，其重要意義可想而知。實驗動物科學，現在已經成為現代科學技術不可分割的一個組成部分，已形成一門獨立的綜合性基礎科學門類。這門科學的重要性在於，一方面它作為科學研究的重要手段，直接影響著許多領域研究課題成果的確立和水平的高低；另一方面，作為一門科學，它的提高和發展，又會把許多領域課題的研究引入新的境地。因此，實驗動物科學技術的重要性可概括為下面三句話：它是現代科學技術的重要組成部分，是生命科學的基礎和條件，是衡量一個國家或一個科研單位科學研究水平的重要標志。實驗動物科學是伴隨著生物醫學科學，通過漫長的動物實驗過程形成的。但是，實驗動物科學的迅速發展，使得實驗動物的研究價值已經不僅限於生物科學方面，而且廣泛地與許多領域科學實驗研究緊緊地聯系在一起，成為確保現代科學實驗研究的一個必不可少的條件。在很多領域的科學研究中，實驗動物充當著非常重要的安全試驗，成效試驗、標准試驗的角色。當前我們正處於世界范圍內新技術革命的非常時期，生物工程、微電子技術，新材料和新能源正在突飛猛進地發展，廿十一世紀人類將步入生命科學的新時代，作為生命科學研究的基礎和條件――實驗動物科學，已受到世界各國的普遍重視，投入了巨大的人力物力，這是因為在生物科學領域內，不能用人去做實驗，我們必須藉助實驗動物去探索生物的起源，揭開遺傳的奧秘，攻克癌症的堡壘，研究各種疾病與衰老的機理，監測公害、污染，保護人類生存的環境，生產更多更好的農畜產品為人類生活造福，在葯品、生物製品、農葯、食品、添加劑、化工產品、化妝品、航天、放射性和軍工產品的研究，試驗與生產中，在進出口商品檢驗中，實驗動物是不可缺少的材料，並且總是作為人類的替身，去承擔安全評價和成效試驗，在生命科學領域內一切研究課題的確立，成果水平的高低，都決定於實驗動物的質量，沒有它，我們的科學實驗就不能在時間、空間和研究者之間進行比較，我們的科研成果、論文就不能在國際上進行交流，得不到國際的公認，將被國際同行們看為科學水平不高甚至是一堆廢紙。我們的生命科學怎能走向世界？因此，迅速發展中國實驗動物科學事業，是加快祖國「四化」建設，把中國建設成為社會主義現代化強國的需要。在生命科學研究領域內，進行實驗研究所需要的基本條件可以總括為：實驗動物（Animal）、設備（Equipment）、信息（Information）和試劑（Reagent）。我們可以把它們看作是生命科學實驗研究中的基本要素，可簡稱為AEIR要素。這四個基本要素，在整個生命科學研究實驗中，具有同等重要的地位，不能忽略或偏廢。由於科學技術的發展，獲得高、精、尖的儀器設備、化學試劑和必要的情報信息已不是困難的事情了。但是，我們在實際工作中，往往把設備、信息和試劑這三要素看得比較重，也比較重視，捨得花錢，而對實驗動物這一要素一般不太重視，所造成的沉痛教訓是不少的。如在獸醫生物葯品製造上，由於豬瘟疫苗生產和檢定上沒有適當合格的動物，近年來的內蒙、陝西、四川、河南、河北、湖北、廣東等地，不斷發生因接種疫苗後豬大量死亡及疫病擴散的事故，造成很大的損失和不良的政治影響。生物製品工作中，由於沒有SPF（無特定病原體）雞，雞胚污染白血病毒，所生產的麻疹疫苗等人用疫苗和雞馬立克氏病弱毒疫苗等禽獸用疫苗，出口受到影響。某醫大某教授1980年去日本交流經驗時，宣讀了「克山病的研究論文」引起了日本醫學界的重視，但當對方了解到他所使用的動物是來源歷史不清的一般動物時，則認為其「實驗結果的科學性不強」。這類例子並不少見。因此，急待把實驗動物科學搞上去，為各學科研究提供各種標准化的實驗動物。但由於實驗動物品種品系復雜，保持質量標准困難，規格要求嚴格，可使用的時間短促，無法控制的繁殖規律，對於生活環境依賴性高等特點，決定了它比其它工業產品更難生產，常可造成在生產和流通程中的特殊困難。在中國普遍採用國際上公認的標准實驗動物，進行實驗研究，還需要經過難苦努力才能辦到。
實驗動物科學發展的最終目的，就是要通過對動物本身生命現象的研究，進而推用到人類，探索人類的生命奧秘，控制人類的疾病和衰老，處長人類的壽命。隨著醫學生物科學的突飛猛進發展，認識到公害問題不僅已成為糧食、人口、老年人等的重大社會問題，而且還涉及到地球上生活著的動物生存問題，例如產業公害、食品公害、葯品毒性等，均直接影響人體健康，對這些問題的研究，最終必然要通過動物實驗（包括動物疾病模型的開發等）來闡明解決。因此，實驗動物科學，特別是實驗動物的重要性愈來愈被人們所認識，它已被認為是人類追求幸福生活的支柱，故實驗動物科學亦被稱之為生命科學。為此，先進國家對實驗動物科學的發展，均給給予高度的重視，其投入的經濟物資和技術力量，幾乎可同發展原子能科學相提並論，其重要意義可想而知。

4. 動物學實驗的實驗動物常見的處理方法

一、編號
實驗動物常需要標記以示區別。編號的方法很多，根據動物的種類數量和觀察時間長短等因素來選擇合適的標記方法。
(一)掛牌法：將號碼烙壓在圓形或方形金屬牌上(最好用鋁或不銹鋼的,它可長期使用不生銹),或將號碼按實驗分組編號烙在栓動物頸部的皮帶上，將此頸圈固定在動物頸部。該法適用於狗等大型動物。
(二)打號法：用刺數鉗(又稱耳號鉗)將號碼打在動物耳朵上。打號前用蘸有酒精的棉球擦凈耳朵，用耳號鉗刺上號碼，然後在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。該法適用於耳朵比較大的兔、狗等動物。
(三)針刺法：用七號或八號針頭蘸取少量碳素墨水，在耳部、前後肢以及尾部等處刺入皮下，在受刺部位留有一黑色標記。該法適用於大小鼠、豚鼠等。在實驗動物數量少的情況下，也可用於兔、狗等動物。
(四)化學葯品塗染動物被毛法：經常應用的塗染化學葯品有
塗染紅色：0.5%中性紅或品紅溶液
塗染黃色：3-5%苦味酸溶液
塗染黑色：煤焦油的酒精溶液
根據實驗分組編號的需要，可用一種化學葯品塗染實驗動物動物背部被毛就可以。如果實驗動物數量較多，則可以選擇兩種染料。該方法對於實驗周期短的實驗動物較合適，時間長了染料易退掉；對於哺乳期的子畜也不適合，因母畜容易咬死子畜或把染料舔掉。
(五)剪毛法：該法適用於大、中型動物，如狗、兔等。方法是用剪毛刀在動物一側或背部剪出號碼，此法編號清楚可靠，但只適於短期觀察。
(六)打孔或剪缺口法：可用打孔機在兔耳一定位置打一小孔來表示一定的號碼。如用剪子剪缺口,應在剪後用滑石粉捻一下,以免癒合後看不出來。該法可以編至1～ 9999號，此種方法常在飼養大量動物時作為終身號採用。
二、分組
(一)分組的原則：進行動物實驗時，經常需要將選擇好的實驗動物按研究的需要分成若干組。動物分組應按隨機分配的原則，使每隻動物都有同等機會被分配到各個實驗組與對照組中去，以避免各組之間的差別,影響實驗結果，特別是進行准確的統計檢驗,必須在隨機分組的基礎上進行。
每組動物數量應按實驗周期長短、實驗類型及統計學要求而定。如果是慢性實驗或需要定期處死動物進行檢驗的實驗，就要求選較多的動物，以補足動物自然死亡和認為處死所喪失的數量，確保實驗結束時有合乎統計學要求的動物數量存在。
(二)建立對照組：分組時應建立對照組。1.自身對照組：是指實驗數據而言。實驗動物本身在實驗處理前、後兩個階段的各項相關數據就分別是對照組和實驗組的實驗結果，此法可排除生物間的個體差異。2.平行對照組：有正對照組和負對照組兩種。給實驗組動物某種處理，而給正對照組用同樣方法進行處理，但並不採用實驗所要求的葯物或手段，負對照組則不給任何處理。3.具體分組時，應避免人為因素, 隨機把所有的動物進行編號，然後令其雙數為A組(實驗組),單數為B組(對照組)即可或反之。如果要分若干個組時，應該用隨機數字表示進行完全隨機分組。 一、實驗動物的除毛
在動物實驗中，被毛有時會影響實驗操作與觀察，因此必須除去。除去被毛的方法有剪毛、拔毛、剃毛和脫毛等。
(一)剪毛法：剪毛法是將動物固定後，先用蘸有水的紗布把被毛浸濕，再用剪毛剪刀緊貼皮膚剪去被毛。不可用手提起被毛，以免剪破皮膚。剪下的毛應集中放在一容器內，防止到處飛揚。給狗、羊等動物采血或新生乳牛放血制備血清常用此法。
(二)拔毛法：拔毛法是用拇指和食指拔去被毛的方法。在兔耳緣靜脈注射或尾靜脈注射時常用此法。
(三)剃毛法：剃毛法是用剃毛刀剃去動物被毛的方法。如動物被毛較長，先要用剪刀將其剪短，再用刷子蘸溫肥皂水將剃毛部位浸透，然後再用剃毛刀除毛。本法適用於暴露外科手術區。
(四)脫毛法：脫毛法是用化學葯品脫去動物被毛的方法。首先將被毛剪短，然後用棉球蘸取脫毛劑，在所需部位塗一薄層，2～3分鍾後用溫水洗去脫落的被毛，用紗布擦乾，再塗一層油脂即可。
適用於狗等大動物的脫毛劑配方為：硫化鈉10g，生石灰15g，溶於100ml水中。
適用於兔、鼠等動物的脫毛劑的配方為：1. 硫化鈉3g,肥皂粉1g,澱粉7g,加適量水調成糊狀；2. 硫化鈉8g,澱粉7g，糖4g，甘油5g，硼砂1g,加水75ml；3. 硫化鈉8g溶於100ml水中。
二、實驗動物的給葯
在動物實驗中，為了觀察葯物對機體功能、代謝及形態引起的變化，常需要將葯物注入動物體內。給葯的途徑和方法多種多樣，可根據實驗目的、實驗動物種類和葯物劑型、劑量等情況確定。
(一)注射給葯法
1. 皮下注射注射時用左手拇指及食指輕輕捏起皮膚，右手持注射器將針頭刺入,固定後即可進行注射。一般小鼠在背部或前肢腋下，大鼠在背部或側下腹部；豚鼠在後大腿內側、背部等脂肪少的部位；兔在背部或耳根部注射；蛙可在脊背部淋巴囊注射；狗多在大腿外側注射，拔針時，輕按針孔片刻，防葯液逸出。
2. 皮內注射此法用於觀察皮膚血管的通透性變化或觀察皮內反應。 如將一定量的放射性同位素溶液、顏料或致炎物質、葯物等注入皮內，觀察其消失速度和局部血液循環變化，作為皮膚血管通透性觀察指標之一。方法是：將動物注射部位的毛剪去，消毒後，用皮試針頭緊貼皮膚皮層刺入皮內，然後使針頭向上挑起並再稍刺入，即可注射葯液。注射後可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。
3. 肌肉注射當給動物注射不溶於水而混懸於油或其他溶劑中的葯物時,常採用肌肉注射。肌肉注射一般選用肌肉發達、無大血管經過的部位，多選臀部。注射時針頭要垂直快速刺入肌肉，如無回血現象即可注射。給大、小鼠作肌肉注射時，選大腿外側肌肉進行注射。
4. 腹腔注射先將動物固定,腹部用酒精棉球擦試消毒，然後在左或右側腹部將針頭刺入皮下，沿皮下向前推進約0.5厘米，再使針頭與皮膚呈45 度角方向穿過腹肌刺入腹腔，此時有落空感，回抽無腸液、尿液後，緩緩推入葯液。此法大小鼠用的較多。
5. 靜脈注射是將葯液直接注射於靜脈管內，使其隨著血液分布全身,迅速奏效。但排泄較快，作用時間較短。
6. 淋巴囊注射蛙類常採用此法,其皮下有數個淋巴囊，注入葯物甚易吸收。腹部淋巴囊和頭部淋巴囊常作為蛙類給葯途徑。一般多選用腹部淋巴囊給葯。注射時將針頭從蛙大腿上端刺入，經大腿肌層入腹壁肌層，再進入腹壁皮下，即進入淋巴囊，然後注入葯液。
(二)經口給葯法
1. 口服法：把葯物放入飼料或溶於飲水中讓動物自動攝取。此法優點在於簡單方便，缺點是不能保證劑量准確。一般適用於對動物疾病的防治或某些葯物的毒性實驗，製造某些與食物有關的人類疾病動物模型。
2. 灌胃法：在急性實驗中,多採用灌胃法。此法劑量准確。灌胃法是用灌胃器將所應投給動物的葯灌到動物胃內。灌胃器由注射器和特殊的灌胃針構成。小鼠的灌胃針長約4～5cm，直徑為1mm，大鼠的灌胃針長約6～8cm，直徑約1.2mm。灌胃針的尖端焊有一小圓金屬球，金屬球為中空的。焊金屬球的目的是防止針頭刺入氣管或損傷消化道。針頭金屬球端彎曲成20°左右的角度，以適應口腔、食道的生理彎曲度走向。
(三)其它途徑給葯方法
1. 呼吸道給葯：呈粉塵、氣體及蒸氣或霧等狀態的葯物或毒氣,均需要通過動物呼吸道給葯。如實驗時給動物乙醚作吸入麻醉、用鋸末煙霧製作慢性氣管炎動物模型等，特別在毒理學實驗中應用更為廣泛。
2. 皮膚給葯：為了鑒定葯物或毒物經皮膚的吸收作用、局部作用、 致敏作用和光感作用等，均需採用經皮膚給葯方法。如兔和豚鼠常採用背部一定面積的皮膚脫毛後，將一定的葯液塗在皮膚上，葯液經皮膚吸收。
3. 脊髓腔內給葯：此法主要用於錐管麻醉或抽取腦脊液。
4. 腦內給葯：此法常用於微生物學動物實驗,將病原體等接種於被檢動物腦內，然後觀察接種後的各種變化。
5. 直腸內給葯：此種方法常用於動物麻醉。兔直腸內給葯時,常採用灌腸的膠皮管或用14號導尿管代替。
6. 關節腔內給葯：此法常用於關節炎的動物模型復制。

5. 5.列表比較實驗動物、在微生物學控制+上+和遺傳學控制方面

摘要 常用實驗動物：

6. 如何對實驗動物進行微生物學控制

按微生物學質量控制的程度或根據微生物凈化程度分類,可分為五類：
（1）普通動物（conventional animals）：亦稱一級動物,在微生物學控制上要求最低的動物,它要求不攜帶人畜共患病和動物烈性傳染病的病原.因價格低,故教學實驗中常用之.
（2）清潔動物（clean animals）：亦稱二級動物,除普通動物應排除的病原外,不攜帶對動物危害大和對科學研究干擾大的病原.
（3）無特殊病原體動物（specific pathogen free animals）：亦稱三級動物,是指動物體內無特定的微生物和寄生蟲存在,但帶有非特定的微生物和寄生蟲的動物.此類動物應排除一、二級動物所排除的病原外,不攜帶主要潛在感染或條件致病和對科研實驗干擾大的病原.
（4）無菌動物（germ free animals）：是指在動物體內外的任何部位都檢不出一切生命體的動物.這類動物系在無菌條件下剖宮產出,又飼養在無菌、恆溫、恆濕的條件下,食品飲料等全部無菌.
（5）悉生動物 （gnotobiotes animals）：是指機體內帶著已知微生物的動物.此種動物原是無菌動物,系人為將指定微生物叢投給其體內,例如使大腸桿菌定居在無菌小鼠體內,在進行微生物檢查時僅能檢出大腸桿菌.
依據GB14922-2001《實驗動物微生物學等級及監測》劃分的實驗動物等級,並與寄生蟲學等級對應,將實驗小鼠和大鼠的微生物等級分為清潔級、無特定病原體級（SPF）和無菌級三個級別,普通級的實驗小鼠和大鼠原則上不再使用；豚鼠、地鼠和兔分為普通級、清潔級、SPF級和無菌級四個級別.犬和猴分為普通級和SPF級二個級別.
…………更多內容參見on http://doc.bio1000.com/list-16.html 微生物學技術,病毒分離,病毒圖片,真菌培養,真菌繁殖,酵母培養,培養基配製方法

7. [急]舉例說明生產和加工中控制微生物的手段

在飼養動物的環境中及動物的體表、粘膜和消化道內容物中，均存在著大量種類繁多的微生物和寄生蟲，如何控制微生物是特別重要的。一個優良品系的「模型動物」的生產群或實驗群，往往由於感染了致病性微生物或寄生蟲而全部覆滅並使實驗失敗的例子是屢見不鮮的。目前,通過微生物學的監察手段,按對微生物控制的凈化程度,把實驗動物區分為無菌動物、悉生動物和特殊病原體動物和清潔動物四類。

1．無菌動物（Germ free animals）是指機體內外均無任何寄生物（微生物和寄生蟲）的動物。此種動物在自然界中並不存在，必須用人為的方法培育出來。其法：一般將臨產前的健康動物用麻醉葯品或頸椎臼法處死後，立即浸泡在37℃滅菌液中，送進無菌室（或無菌隔離器），按無菌手術進行剖腹，切除帶胎子宮（子宮內首先應無菌），將其浸入消毒液里並輸送到另一隔離器中，切開子宮取胎，經用滅菌紗布揩拭仔體並斷臍（電刀切斷）後，放隔離器內人工餵乳或用其它品系的無菌母鼠作保姆供養。象小鼠和大鼠等用人工餵乳非常麻煩，故採用保姆代養較為方便。而象豚鼠因在一定程度上能自力飲乳，故人工哺乳較容易。另外，象禽類、魚類、昆蟲類，因是在卵中無菌的前提下進行的，故用葯物將卵周圍滅菌後移入無菌隔離器內使其孵化即可，而且，這些動物一般在在出生後能自力採食，故較易育成。

2．悉生動物（Cnotobiotes animals）是指機體內帶著已知微生物（動物或植物）的動物。此種動物原是無菌動物，系人為的將指定微生物叢投給其體內，例如使大腸桿菌定居在無菌小鼠體內，在進行微生物檢查時，僅能檢出大腸桿菌。亦有人工投給二種以上的已知微生物。悉生動物一般分為單菌（Monoxenie）、雙菌（Dixenie）、三菌（Trixenie），或多菌（Polyxenie）動物。此種動物同無菌動物一樣是放在隔離器內飼育的，但因其帶有已知的微生物，故隔離器內有微生物及其代謝產物的污染。例如，人工投給的微生物，除可在飲水中增殖外，還能在隔離器內放出大量的氨氣。

3．無特定病原體動物（Specefic pathogen-free animals）是指機體內無特定的微生物和寄生蟲存在的動物，簡稱SPF動物。但非特定的微生物和寄生蟲是允許存在的，故其實際上就是指無傳染病的健康動物。由於用疫苗和葯物進行預防及治療，或用淘汰帶菌動物來作出SPF動物的方法並不實用（既浪費時間，又難保確實除去病原）。故一般大多先培育出無菌動物或悉生動物後，再把其轉移到有封閉系統（Barrier System）的設施中飼育繁殖。原則上SPF動物室內是不允許存在病原菌的，但在封閉系統環境中，難免有很多非病原性微生物會逐漸進入動物機體內，故亦有人把這個轉移過程稱之為通常動物化。SPF動物的祖先是無菌動物，按理來說，無菌動物的子宮內和卵中應該是無菌的，然而，有些病毒實際上是通過親代傳給胎兒的，因此，在作出無菌動物和SPF動物之前，必須充分考慮這個問題。

4．清潔普通動物（Clean conventional animal,CCV）（亦稱最低限度疾病動物MOA）或稱清潔動物（Clean animal,CL）

來自屏障系統的SPF動物，飼養在設有兩條走廊的，溫濕度恆定的普通設施中的動物。墊料、飼料、用具等均應經過高壓消毒。飲水pH為2.5～2.8，鼠盒上帶過濾帽，空氣亦應經過一定的過濾，工作人員穿干凈服裝操作，此類動物的微生物控制標准基本與SPF相同，不同之處為血清病毒抗體檢查（腦脊髓炎病毒、鼠肝炎病毒……）經常可檢出一定滴度的抗體，但不允許出現臨床症狀和臟器的病理變化和自然死亡。

普通動物（Conventioal animals）是未經積極的微生物學控制，普遍地飼養在開放衛生環境里的動物。墊料和食物不經高壓消毒，飲水為自來水，不喂青飼料。鼠應排除肺炎病毒，沙門氏菌和鏈球菌，地鼠不應有蟯蟲。普遍動物只能供教養和一般性實驗，不適用於研究實驗。

鮮切蔬菜褐變及微生物的控制
一、褐變的控制：
在鮮切蔬菜加工中，熱處理會對組織產生傷害，從而加速產品的敗壞。而採用亞硫酸鹽處理，又會造成二氧化硫的殘留，對人體產生一些不良的影響。因此，在鮮切蔬菜加工中，必須採用其他的方法來抑制酶褐變的發生。
1.化學方法。有望取代亞硫酸鹽抑制酶褐變的化學葯劑，主要有檸檬酸、抗壞血酸、半胱氨酸、4-已基間苯二酚等。如對去皮切片馬鈴薯，用0.5%半胱氨酸加2%檸檬酸浸泡3分鍾，可愛效控制褐變的發生。採用PH值為5.5的抗壞血酸鈉、半胱氨酸及乙二胺四乙酸（EDTA）混合液處理，可有效控制蘑菇的褐變。鮮切莖用萵苣圓片，用1%-5%醋酸溶液或用醋酸含量為6%的食醋處理，都可有效地抑制產品在冷藏和流通期間褐變的發生。
一般防褐變的化學處理，都要包裝前進行，並且以幾種葯劑混合浸漬處理的效果比較好。用防褐變葯劑結合可食性塗膜處理，則能取得更好的效果，如鮮蘑菇切片用含1%抗壞血酸和0.2%EDTA的可食膜處理，比單獨使用化學防褐變劑或可食性膜包裝，都能更有效控制酶褐變的發生。
2.物理方法。鮮切蔬菜採用低氧和高二氧化碳氣調包裝，可有效控制產品貯藏期間酶褐變的發生。一般適宜的氧氣濃度為2%-10%，二氧化碳濃度為10%-20%。如切片馬鈴薯用20%的二氧化碳加80%的氮氣進行氣調包裝，可有效地控制貯藏期間褐變的發生。
3.酶法。這種方法，是利用蛋白酶對多酚氧化酶的水解作用，從而抑制其活性和酶褐變的發生。目前已分別從無花果、番木瓜和菠蘿占提取得到三種蛋白酶，即ficin、papain和bromelain，它們都能有效控制酶褐變的發生。如用ficin抑制馬鈴薯的褐變，其作用與亞硫酸鹽相當。因為菠蘿中含有蛋白酶，故使用菠蘿汁處理鮮切蘋果片，也可有效抑制產品的褐變。
二、微生物生長的控制：
生產上控制微生物的生長的方法主要有以下幾種：
1.創造低溫條件。造成低溫環境，可有效抑制微生物的生長，從而達到保持品質，延長貨架期的目的。因此，在鮮切蔬菜的加工、貯存和流通過程中，應盡可能創造適宜的低溫條件，一般為0-5℃。
2.使用化學防腐劑。醋酸、苯甲酸、山梨酸及其鹽類，可有鏟地抑制微生物的生長繁殖。這對那些在低溫下仍能生長的腐敗菌和致病菌，是一個很有效的控制措施。
3.實行氣調包裝：採用適當的低氧和高二氧化碳氣調包裝，能抑制好氣性微生物的生長。但是，必須注意避免缺氧環境，防止厭氧微生物的生長和產品本身的無氧酵解而產生異鼓掌。
4.降低PH值。鮮切蔬菜組織的PH值一般為4.5-7.0，正適合於各種腐敗菌和致病菌的生長。在鮮切蔬菜中加入適當的醋酸、檸檬酸和乳酸等，可降低蔬菜組織的PH值，抑制微生物的生長繁殖。但一定要掌握好用量。否則，過多的酸會破壞新鮮蔬菜本身的風味。
5.應用生物防腐劑。生物防腐劑，是指來自植物、動物及微生物中的一類抗菌物質。由於鮮發蔬菜為即食產品，化學防腐劑的應用受到一定限制，因此來自生物的天然防腐劑的研究和應用，便日益受到重視。現已發現，乳酸菌的代謝物細菌素或類細菌素，能有效地抑制鮮切蔬菜中嗜水氣單胞菌和單核李氏桿菌等有害微生物的生長。

在孵化生產過程中加強對病原微生物的控制
各種病原微生物遇到適宜的環境條件就會迅速而大量地繁殖， 孵化場適宜的孵化溫度和濕度為微生物的繁殖提供了良好的條件， 而病原微生物一旦感染了胚胎或雛雞，就會造成胚胎的早期死亡及雛雞產品質量的低劣， 輕者造成經濟效益的下降，重者威脅孵化場的生存。 可見加強孵化生產過程中的病原微生物控制，已成為孵化場管理工作中最重要的內容。
一、嚴格控制病原微生物的來源
1.種蛋種蛋要求來自無疫情的健康雞群所提供， 但在種蛋產出過程中仍有可能被病原微生物污染，除了要求種蛋在種雞場經過消毒外， 運至孵化場後必須以3倍量的甲醛、高錳酸鉀熏蒸消毒1次，經化驗總菌數小於20個， 其中主要致病菌，如大腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌含量為0，方可放入蛋庫貯存。種蛋入孵後，每周對種蛋進行1倍量的甲醛、高錳酸鉀熏蒸消毒，以控制細菌的生長。
2.人體人體是病原微生物的主要載體之一， 要求外來人員一律拒絕進入孵化場生產區，本場工人每天入車間要求消毒、淋浴，更換清洗消毒後的工作服、帽子、口罩、拖鞋，出車間也要求淋浴。車間的臟、凈區不能串崗， 特殊情況由臟區到潔凈區需要淋浴更衣。在接觸種蛋、雛雞前，要先洗手消毒才能操作，無論工作或休息時，嚴禁對種蛋、雛雞咳嗽、打噴嚏、吐痰， 以減免細菌的傳
播。
3.車輛嚴禁外來車輛進入場區，本場運蛋車入場要求噴灑消毒， 司機下車通過消毒通道方可進入場區，在卸種蛋過程中，司機不許下車。 運蛋車不準許運輸除種蛋之外的其他物品，車廂要求每周至少熏蒸消毒1次。
4.用具孵化場所有用具，如蛋筐、蛋盤、拖布、掃帚等物品， 一經外界進入場區都要消毒後方可使用，以控制由於用具不潔造成病原微生物的傳播。
5.包裝材料孵化場所用的主要包裝材料為雛雞盒，入場區後要先放入距生產區50米遠的庫房中先進行薰蒸消毒後才可使用， 嚴禁任何未經消毒的包裝物品進入生產區域。
6.空氣空氣攜帶病原微生物更有其隨意性， 所檢測的大部分病原微生物都是由空氣帶入的，由於蛋庫、孵化廳特定的環境要求有大量的空氣流通， 此環節的控制往往成為難點。在管理中，要求對進氣孔、過濾網每周不少於3次的衛生清理，尤其對孵化、出雛器的進、出風口要時常保持清潔， 以防細菌循環傳播。
二、控制病原微生物的繁殖
由於孵化場特定的溫室、濕度等條件， 為細菌繁殖提供了較理想的場所，這就要求管理者從孵化過程的各個環節入手，及時檢測細菌的生存狀態， 採取各種有效措施切斷病原微生物的傳播渠道。除了以上所述， 從種蛋入場區嚴格控制開始，還要注意保持孵化器的清潔衛生，每周不少於2次進行徹底擦拭，尤其進、出風口處，不允許有灰塵。孵化、出雛廳的四周牆壁、地面， 每周不少於3次徹底用消毒液清理，要求所檢測的細菌總數不超過32個。出雛後要認真沖洗出雛器，不允許留有異物，消毒要完全徹底，出雛盤要沖洗干凈，消毒徹底，以防病原微生物污染下批雞雛。每次出雛後，要對出雛場地進行徹底清洗、 消毒。由於孵化生產過程有其循環性，因此，要求雞蛋、入孵、沖洗、 出雛任何一個環節的衛生消毒工作都要做得全面、徹底， 才能從整體上切斷病原微生物的傳播途徑，降低其生存數量，最終達到提高雛雞質量、增加經濟效益的目的。

其他信息參考
http://www..com/s?wd=%CE%A2%C9%FA%CE%EF%B5%C4%BF%D8%D6%C6&lm=0&si=&rn=10&ie=gb2312&ct=0&cl=3&f=1&rsp=1

8. 如何保證實驗動物出現的變化只能用於實驗要探究的因素引起的

環境因素對實驗動物機體具有「有利」和「有害」兩個方面的作用。一方面環境因素是實驗動物生存的必要條件，動物通過新陳代謝同周圍環境不斷地進行物質和能量交換，同時動物經常接受外界環境刺激產生免疫反應增強體質，促進生長；另一方面環境因素也存在對動物機體有害的各種因素，動物處於有害因素作用下，雖然有一定適應環境變化的能力或產生免疫反應來消除或減輕這些有害因素的作用，但是有害因素作用超過一定水平，就會對動物機體產生直接或間接危害，動物各種功能就會失調，引起各種疾病甚至死亡。環境條件不僅影響實驗動物的質量,而且還直接影響動物實驗的科學性、動物反應的敏感性和實驗結果的可重復性，所以必須嚴格控制實驗動物的環境條件。
實驗動物設施是作為飼養和管理實驗動物場所中較大的居住因素。因此，在充分考慮到動物的同時，也要注意到從事實驗的研究人員及實際操作的飼養技術人員的安全。還應當考慮到設施周圍的公共衛生。在建築施工時，不僅應有防震、防火的安全措施，還應有空調的自動控制和報警等設備。由於存在選址條件和建築方面的法令制度以及經濟方面等種種原因的牽制因素，所以作為從設計階段作出綜合性判斷的總設計者，應該反復與有關實驗動物方面的技術人員、實驗人員、設計人員等進行充分的商討。
1. 隔離系統(Insulation system) 是以隔離器(Isolator)為主體及其附屬裝置組成的飼養系統。用作飼養無菌動物和已知菌動物。工作人員通過隔離器上組裝的無菌手套進行操作,不直接接觸動物。送入隔離器的空氣需經超高效過濾，潔凈度達到100級，飼料、飲水、墊料、籠具等都應高壓高溫滅菌。一切物品的移入均需通過滅菌渡艙，並事先包裝消毒。

2. 屏障系統(Barrier system) 這是飼養SPF動物的設施。人、實驗動物、飼料、飲水、墊料、空氣及其它物品均需進行嚴格的微生物控制。送入的空氣需經初、中、高效三級過濾，潔凈度達到10000級，飼料、飲水、墊料經滅菌後方可使用。飼養人員進入屏障系統需經充分淋浴，然後穿上無菌工作服、戴口罩和手套。要利用空氣壓力差防止污染,即清潔區域（如清潔走廊、SPF動物飼養室、清潔消毒用品貯存室等）空氣壓力要大於污染區域。在屏障設施內一切操作要實行嚴格的微生物控制，因為屏障系統內要長期飼養SPF動物,保持不被污染，而人員、物品要經常出入,其中人員又不能徹底滅菌,所以人是最大可能的污染源，因此，對人員的要求要特別嚴格，要有嚴密的操作細則。

3. 亞屏障系統(Semi-barrier system) 這是飼養目前我國正在推行的清潔級動物的設施。其送入飼養室的空氣也必須經過凈化處理，經初、中、亞高效過濾，空氣潔凈度要求達到100000級。對人、動物、物品等出入的管理與屏障系統大致相同。

近年來空氣凈化技術發展迅速，種種類型的水平或垂直超凈層流架及屏障單元，可以代替凈化、屏障的飼養室。工作人員不須淋浴只需要消毒手臂,戴滅菌手套即可操作,這樣就大大地簡化了進入屏障和亞屏障系統建築內的復雜程序。此外，由於屏障只維持於籠架的小范圍，局部空氣凈化可以達到很高的要求，在這樣小范圍內飼養SPF 級或清潔級動物是有一定保證的。

4. 開放系統(Open system) 只能飼養普通級實驗動物。它是無空氣凈化裝置的飼養系統，但並非不需要進行嚴格的環境控制和積極的微生物控制，仍需維持對環境條件的基本要求。飼料、飲水和墊料要求不被污染，飼養室內要有防鼠、防昆蟲等措施。

開放系統的各動物室的籠具可以集中洗刷和消毒。經過消毒處理的物品與污染的物品的進出要通過不同路線，並要分開堆放，杜絕交叉。

9. 實驗動物遺傳學和微生物質量的標准化在實驗動物設計有什麼意義

實現實驗動物標准化（質量控制）應從控制實驗動物的遺傳、微生物和寄生蟲、營養、環境等四方面著手。
實驗動物按遺傳學控制分類可分為近交系動物、雜交群動物、封閉群動物。實驗動物具有明確遺傳背景並嚴格遺傳控制的動物，遺傳因素會對實驗結果進行干擾，甚至通過改變實驗動物的遺傳結構，使某些特定實驗能順利開展。很多生命科學的研究，要求實驗動物的遺傳結構有較高的同一性、穩定性和純合度。
實驗動物按微生物控制可分為無菌動物（悉生動物）、無特定病原體（SPF）動物、清潔動物和普通動物。微生物感染對人、動物和實驗的影響：（1）引起人畜共患病，影響工作人員的身體健康。（2）引起動物傳染病，影響均衡生產，影響動物健康和質量。（3）嚴重干擾實驗結果的可靠性、准確性、重復性。（4）污染環境
實驗動物在實驗設計的過程中，要對實驗動物的遺傳學和微生物學進行嚴格控制，清楚所採用的實驗動物遺傳學和微生物學特性，有針對性的進行實驗設計，保證實驗結果的准確性、精確性、可重復性。

10. 對實驗動物進行微生物學控制的意義何在

防止外來生物和雜菌的干擾，保證實驗的可靠性/准確性。另外，更為重要的是保護自己乃至他人，使人乃至環境免受病原微生物的影響。