『壹』 分離純化微生物的方法有哪些各方法適用分離什麼菌種
主要有:劃線法、倒平板法、塗布法,根據分離的菌種選擇不同的培養基。
稀釋混合倒平板法、稀釋塗布平板法、平板劃線分離法、稀釋搖管法、液體培養基分離法、單細胞分離法、選擇培養分離法等。其中前三種方法最為常用,不需要特殊的儀器設備,分離純化效果好。
從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。在分子生物學的研究及應用中,不僅需要通過分離。
分離技術
主要是稀釋和選擇培養,稀釋是在液體中或在固體表面上高度稀釋微生物群體,使單位體積或單位面積僅存留一個單細胞,並使此單細胞增殖為一個新的群體。最常用的為平板劃線法。
如果所要分離的微生物在混雜的微生物群體中數量極少或者增殖過慢而難以稀釋分離時,需要結合使用選擇培養法,即選用僅適合於所要分離的微生物生長繁殖的特殊培養條件來培養混雜菌體,改變群體中各類微生物的比例,以達到分離的目的。為保證分離到的微生物是純培養,分離時必須用。
以上內容參考:網路-微生物分離純化
『貳』 以DNA的分離純化為例,闡述生物大分子分離純化的基本原則原理和注意事項
首先最重要的一點事保證大分子物質不變性,否則分離純化的工作將毫無意義,對於分離dna如果,是從生物體中直接提純,要注意提取溶液的濃度,根據你所想要的A型或者B型來選配鹽水,ph當然很重要,稍微偏鹼性有利於提純。如果從rna和dna的混合物種分離,直接使用弱鹼性的緩沖液進行電泳就行。
此外,就是要提取周期短。周期越長提取效果越差
步驟盡量簡潔。過於繁瑣的步驟會讓生物大分子活性降低,尤其提取酶的時候尤其重要
當然一定的純度也是必須的考慮因素,根據實驗需要,提純也需要不同的純度,自然方法有差異
提純過程中的副產物也是需要考慮的因素。要保證他們不能影響提純工作的進行
『叄』 如何進行生物大分子的分離提純
用凝膠過濾層析法
是最好的方法之一。
可以分離不同大小的物質例如蛋白質混合物、膠體混合物等等。
大分子物質先出來,小分子物質後出來。
『肆』 生物實驗室做實驗有用到哪些設備
微生物實驗室主要用於無菌環境下微生物提純、分離、增殖及鑒定等工作,對無菌環境的要求很高。那麼微生物實驗室中需要用到哪些儀器設備呢?
一、無菌室
無菌室是實驗室的核心部分,主要為樣品提供保護,保證實驗結果的准確和人員的安全。
二、超凈工作台
微生物的培養都是在特定培養基中進行無菌培養,那麼無菌培養必然需要超凈工作台提供一個無菌的工作環境。超凈工作台的主要用途是微生物的接種及處理時的無菌操作。
三、高壓蒸汽滅菌鍋
高壓蒸汽滅菌鍋是一個密閉的、可以耐受一定壓力的雙層金屬鍋。一般在進行無菌操作前需要將操作器皿、培養基等在高壓滅菌鍋里進行滅絕後才能使用。
四、培養箱
培養箱主要用於實驗室微生物的培養,為微生物的生長提供一個適宜的環境。培養箱有以下幾種:
1、普通培養箱
2、生化培養箱
3、恆溫恆濕箱
4、厭氧培養箱
五、天平
天平是用於精確稱量各類試劑及葯品的設備。實驗室常用的是電子天平。
六、微波爐/電爐
其主要作用是用於溶液的快速加熱,微生物固體培養基的加熱溶化等。
七、搖床
搖床又稱搖瓶機,它是培養好氣性微生物的小型試驗設備或作為種子擴大培養之用。
八、冰箱
冰箱是實驗室中保存試劑和樣品必不可少的儀器。微生物學實驗中用到的試劑有些要求是4度保存,有些要求是負20度保存,實驗人員一定要看清試劑的保存條件,放置在恰當的溫度下保存。
九、顯微鏡
微生物個體微小,必須藉助顯微鏡才能觀察清楚它們的個體形態和細胞結構。因此,在微生物學的各項研究中,顯微鏡就成為不可缺少的工具。
十、生物安全櫃
微生物實驗中所涉及到的部分試劑和樣品微生物有些是有毒的,對於操作人員來說傷害比較大。為了防止有害德懸浮微粒、氣溶膠的擴散,可以利用生物安全櫃對操作人員、樣品及樣品間交叉感染和環境提供安全的保護作用。
十一、菌落計數器
菌落計數儀可幫助操作者計數菌落數量。通過放大,拍照,計數等方式來准確的獲取菌落的數量。有些高性能的菌落計數器還可直接連接電腦來完成自動計數的操作,方便快捷的計數。
十二、分光光度計
分光光度計在微生物試驗中用於測定微生物懸液的濃度,可以正確選取合適的培養時間。
十三、離心機
離心機是用於收集微生物菌體以及其他沉澱物。有冷凍離心機和常溫離心機之分。
十四、液氮罐
液氮罐里裝有液氮,可用於微生物實驗室中各菌種的長期保存。
『伍』 從生物材料中提取生物大分子物質時,對生物材料的選擇有什麼要求
首先,這種生物材料必須含有這種生物大分子物質,沒有目標物質,啥也提取不出來。其次,這種生物材料要比較容易獲得,盡量不要用人體來源的材料,要用動物的或者是構建基因工程菌來生產目標物質。然後,就是這種生物材料的雜質含量要少,有些雜質會干擾提取的效果,造成生物分離過程成本太高,還有的雜質會影響目標物質的活性,這種雜質要第一步就除去,否則,提取的目標物質也不會產生應該有的作用。最後,要易破碎,因為,不少生物目標物質都是在細胞內部的。
『陸』 請問:怎樣分離提純微生物
1. 稀釋塗布平板法
(1) 倒平板 將肉膏蛋白腖瓊脂培養基, 高氏Ⅰ號瓊脂培養基;馬丁氏瓊脂培養基加熱溶化,待冷至55~60℃, 高氏Ⅰ號瓊脂培養基加入10%酚數滴,馬丁氏瓊脂培養基加入鏈黴素溶液。混勻後分別倒平板,每種培養基倒三皿;
(2) 制備土壤稀釋溶液 稱取土樣10g,放入盛有90ml無菌水並帶入玻璃珠的三角燒瓶,振動約20min,使土樣與水分混合,將細胞分散.用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻,然後用無菌吸管從此試管中吸取1ml加入另一個盛有9ml無菌水的試管中,混合均勻,以此推製成10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6不同稀釋的土壤溶液;
(3) 塗布 將上述每種培養基的三個平板地面分別用記號筆寫上10-4,10-5,10-6三種稀釋度,然後用無菌吸管分別由10-4,10-5,10-6三管土壤稀釋液中各取0.1ml對號放入已寫好室溫下靜置5~10min,使菌液吸附進培養基;
(4) 培養 將高氏Ⅰ號瓊脂培養基平板;馬丁氏瓊脂培養基平板倒置於28℃溫室中培養3~5day,肉膏蛋白腖平板倒置於37℃溫室中培養2~3day;
(5) 挑菌落 將培養後長出的單個菌落分別挑取少許細胞接種到上述三種培養基的斜面上,分別置28℃和37℃溫室培養,大菌苔長出後,檢查其特徵是否一致,同時將細胞塗片染色後用顯微鏡檢查是為單一的微生物。若發現有雜菌,需要再一次進行分離、純化,直到獲得純培養。
2.平板劃線分離法
(1)倒平板 按稀釋塗布平板倒平板,並用記號標明培養基名稱,土樣編號和實驗日期;
(2) 劃線 在近火焰處,左手拿皿底,右手拿接種環,挑取上述的土壤懸液一環在平板上劃線.劃線的方法很多,但無論採用那種方法,其目的都是通過劃線將樣品在平板上進行稀釋,使之形成單個菌落;
(3) 挑菌落 同稀釋塗布平板法,一直到分離的微生物認為純化為止。
『柒』 植物提取的提純分離需要哪些設備
目前植物提取行業大都採用的工藝是:原料預處理→除菌除雜澄清過程→膜分離純化→濃縮及制劑過程,採用板框壓濾、樹脂分離、溶劑萃取、熱濃縮等傳統工藝來制備植物提取產物,對於植物提取產物的質量不穩定、有效成分純度較低、易破壞熱敏性物質等活性成分、耗費大量有機溶劑以及耗時耗能等問題仍然存在,而植物提取產物的應用取決於其色澤、氣味、狀態及功效的穩定性是否達標。
植物提取現在應用較多的是膜分離設備
『捌』 蛋白質分離提純的方法,要生物化學的方法(要詳細的)
分離提純蛋白質的方法採用滲析的方法,因為蛋白質可以形成膠體,膠體的分離好提純方法應該是滲析。
『玖』 微生物實驗室需要哪些常用的儀器
微生物實驗室主要用於無菌環境下微生物提純、分離、增殖及鑒定等工作,對無菌環境的要求很高。那麼微生物實驗室中則需要用到以下儀器設備。
一、無菌室
無菌室是實驗室的核心部分,主要為樣品提供保護,保證實驗結果的准確和人員的安全。
二、超凈工作台
微生物的培養都是在特定培養基中進行無菌培養,那麼無菌培養必然需要超凈工作台提供一個無菌的工作環境。超凈工作台的主要用途是微生物的接種及處理時的無菌操作。
三、高壓蒸汽滅菌鍋
高壓蒸汽滅菌鍋是一個密閉的、可以耐受一定壓力的雙層金屬鍋。一般在進行無菌操作前需要將操作器皿、培養基等在高壓滅菌鍋里進行滅絕後才能使用。
四、培養箱
培養箱主要用於實驗室微生物的培養,為微生物的生長提供一個適宜的環境。培養箱有以下幾種:
1、普通培養箱
2、生化培養箱
3、恆溫恆濕箱
4、厭氧培養箱
五、天平
天平是用於精確稱量各類試劑及葯品的設備。實驗室常用的是電子天平。
六、微波爐/電爐
其主要作用是用於溶液的快速加熱,微生物固體培養基的加熱溶化等。
七、搖床
搖床又稱搖瓶機,它是培養好氣性微生物的小型試驗設備或作為種子擴大培養之用。
八、冰箱
冰箱是實驗室中保存試劑和樣品必不可少的儀器。微生物學實驗中用到的試劑有些要求是4度保存,有些要求是負20度保存,實驗人員一定要看清試劑的保存條件,放置在恰當的溫度下保存。
九、顯微鏡
微生物個體微小,必須藉助顯微鏡才能觀察清楚它們的個體形態和細胞結構。因此,在微生物學的各項研究中,顯微鏡就成為不可缺少的工具。
十、生物安全櫃
微生物實驗中所涉及到的部分試劑和樣品微生物有些是有毒的,對於操作人員來說傷害比較大。為了防止有害德懸
十一、菌落計數器
菌落計數儀可幫助操作者計數菌落數量。通過放大,拍照,計數等方式來准確的獲取菌落的數量。有些高性能的菌落計數器還可直接連接電腦來完成自動計數的操作,方便快捷的計數。
十二、分光光度計
分光光度計在微生物試驗中用於測定微生物懸液的濃度,可以正確選取合適的培養時間。
十三、離心機
離心機是用於收集微生物菌體以及其他沉澱物。有冷凍離心機和常溫離心機之分。
十四、液氮罐
液氮罐里裝有液氮,可用於微生物實驗室中各菌種的長期保存。
『拾』 1、 生物制葯產品分離提純包括哪些基本操作單元結合實例介紹1個。
1.分離提純首先要確定你的產物是胞內產物還是胞外產物。胞內產物先要經細胞破碎,碎片分離後提純。分離的方法多種,常用的是過濾和離心,一些新的方法有如雙水相萃取,膜分離等。提純是對目的產物的進一步純化處理,方法很多,比如超濾,微濾,膜分離,液膜等。
2.生物制葯產品副反應主要是由葯品的純度決定,雜質是引起副反應的主要因素。副反應類型:葯效下降,葯物毒性,過敏反應等
3.開辦生物制葯企業條件:資金,產品,人才,場地,創新研究,國家政策支持
4.臨床試驗分三期:
一期是為了觀察葯物的毒性和代謝過程,需在健康人身上進行;
二、三期是為了觀察葯物的有效性和安全性,受試對象為病人。 二期要求50-200人,三期要求大於400人。