Ⅰ 土壤微生物碳氮實驗方法氯仿熏蒸乾燥器里分別放哪些試劑
1、提取液的制備：
儀器：抽氣皿、無醇氯仿，抽氣機，大鋁盒，分析天平，小三角瓶（50ml）、大塑料瓶（250ml），三角瓶（100ml）。 試劑的制備：
無醇氯仿（提取方法：用1N硫酸溶液與氯仿按體積比2：1於分液漏斗中震盪混勻，靜置分離，共做三次，再用去離子水代替硫酸與氯仿2：1混勻，震盪分離，共三次，將提純的放入到棕色試劑瓶中，加一勺無水硫酸鈉保存。）
分析步驟：1、稱取相當於干土12.5g的鮮土於大鋁盒中，在抽氣皿中放入盛有25ml無醇氯仿的小燒杯，放幾張小紙片以便於觀察沸騰，放入裝土的大鋁盒，連上抽氣機，抽真空使沸騰5分鍾，關緊活塞，關閉抽氣機，蓋上黑布，置於陰暗處（25℃）熏蒸24小時，到時間後，取回小燒杯，後反復抽真空3~5次，排除氯仿。
2、另稱取一批同等重量的土放入乾燥器中作未熏蒸處理，同樣包上黑布，置於陰暗處24小時。
3.將上述步驟中的兩批土樣轉移到大塑料瓶中（此操作應盡快進行）每個瓶內50ml0.5M硫酸鉀溶液，蓋緊瓶塞，震盪30分鍾，取出，用定量濾紙過濾到100ml大三角瓶中，應立即測定，如果不立即測定，可用保鮮膜封口（防止污染和揮發），保存在4℃的冰箱中24小時。
Ⅱ 土壤微生物的檢測怎麼做，哪裡可以做
土壤微生物是土壤中一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱，嚴格意義上應包括細菌、古菌、真菌、病毒、原生動物和顯微藻類。其個體微小，一般以微米或毫微米來計算，通常1克土壤中有幾億到幾百億個，其種類和數量隨成土環境及其土層深度的不同而變化。它們在土壤中進行氧化、硝化、氨化、固氮、硫化等過程，促進土壤有機物的分解和養分的轉化；那土壤內的微生物如何測定呢，下面喆圖小編帶大家來了解一下。
一、培養方法
（1）稀釋平板塗抹法
具體操作如下：
①准確稱取 10g（精確到 0.001）採集的鮮土，倒入裝有 90 ml 無菌水的 500 ml 的三角瓶中，置於往返震盪機上（120r/min，常溫），震盪 20 min，使土壤充分分散成為土壤懸液。
②將上面的土壤懸液用無菌移液管吸取 5 ml 到 45 ml 稀釋液中，即為 10-2稀釋度，依次按 10倍法稀釋，製成 10-1~-~10-6稀釋度。注意:每次吸取懸液時,在稀釋液中反復吸入和吹出 3-~5 次,減少因管壁吸附而造成的誤差,並使懸液進一步分散,每個稀釋度需要更換無菌吸管吸取懸液。)
③根據各類微生物在土壤中的數量多少選擇適當稀釋度的懸液接種。本實驗選擇細菌的稀釋度為 10-~10-5,放線菌為 10~-10-4,真菌為 10-1~-10-3。 -3-2
④土壤懸液的接種方法:在無菌培養皿中倒入 15~20 ml 選擇性培養基,待凝固後,用 0.2 ml無菌移液槍吸取0.2 ml各稀釋度的土壤懸液,然後立即用塗抹棒將懸液均勻的塗抹於培養基表面。用同一支吸管接種時,從高稀釋度開始,依次接種到低稀釋度。
⑤接種了土壤懸液的培養皿,平放在超凈工作台 20~30 min,使得菌液滲透入培養基內,然後倒置於 28~-30°C 生化培養箱中培養一定時間:細菌 1~-3 天,放線菌 10-~14 天,真菌 3~-7 天。
⑥培養結束後,取出培養皿計數。
(2)稀釋培養法
一系列稀釋度的製作與稀釋平板法相同。根據各類微生物在土壤中數量的多少選擇適當的稀釋度,分別接種 1 ml 稀釋液與製作好的液體培養基中,根據需要做 3~4 次重復,適溫培養。2 三大類土壤微生物培養基的分離三大類土壤微生物的分離採用稀釋平板塗抹法,每個菌種要求做 3 個稀釋度,每個稀釋度做3-4次重復,選取細菌和放線菌的菌落在20~-200之間的培養皿、真菌的菌落在 10-~100 的培養皿計數,並計算三次重復的平均值。每克干土中微生物數量計算式:
每克干土中菌落數=(菌落平均數×稀釋倍數×100%)/(濕土質量×干土)
1, 細菌:牛肉膏蛋白腖培養基:牛肉膏 3g、蛋白腖 5g、瓊脂 18g、蒸餾水 1000 ml、pH 值 7.0-~7.2 。
2, 放線菌:改良高氏 1 號培養基:KNO3 1g,FeSO4·7H2O 0.01g,K2HPO4 0.5g,澱粉 20g,MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、瓊脂 18g、3%重鉻酸鉀溶液 3.3ml、蒸餾水 1000ml、pH 值 7.2~-7.4
3,真菌:馬丁氏培養基(虎紅瓊脂):蛋白腖 5g、KH2PO4 1g、MgSO4 0.5g、葡萄糖 10g、瓊脂 18.5g、孟加拉紅 0.033g、氯黴素 0.1g、蒸餾水 1000ml。
所有培養基需在濕熱滅菌鍋中121°C滅菌 20-~30min
以上土壤微生物測定方案僅供參考，可以查詢專業公司進行檢測。
Ⅲ 土壤微生物量碳氮的測定方法
取一定重量的土壤，稱取1g，置於100ml無菌水中，充分振盪，然後離心，取上清液，就得到土壤浸出液（可以看做土壤中的微生物全部轉移至水中）。然後做梯度稀釋，取一定稀釋度的溶液，塗平板，培養後數菌落數，然後乘上稀釋倍數，就可得到1g土壤中該微生物的數量。
例如，你在稀釋10的7次方的平板上數出了15個菌落，則1g土壤中微生物數量為1.5×10的8次方個。
Ⅳ 求土壤微生物量氮的標准曲線的配置方法！謝謝！
1、土壤微生物量 (Mierobia lBiomass，MB) 能代表參與調控土壤能量和養分循環以及有機物質轉化相對應微生物的數量，一般指土壤中體積小於5Χ103um3的生物總量。它與土壤有機質含量密切相關。 目前，熏蒸法是使用最廣泛的一種測定土壤微生物量的方法閻，它是將待測土壤經葯劑熏蒸後，土壤中微生物被殺死，被殺死的微生物體被新加人原土樣的微生物分解(礦化)而放出CO2，根據釋放出的CO2:的量和微生物體礦化率常數Kc可計算出該土樣微生物中的碳量。因此碳量的大小就反映了微生物量的大小。 此外，還有平板計(通過顯微鏡直接計數)、成份分析法、底物誘導呼吸法、熏蒸培養法(測定油污染土壤中的微生物量—碳。受土壤水分狀況影響較大，不適用強酸性土壤及剛施用過大量有機肥的土壤等)、熏蒸提取法等，均可用來測定土壤微生物量。 熏蒸提取-容量分析法 操作步驟： （1）土壤前處理和熏蒸 （2）提取 將熏蒸土壤無損地轉移到200mL聚乙烯塑料瓶中，加入100mL0.5mol·L-1 K2SO4（圖水比為1:4；w：v），振盪30min（300rev·min-1），用中速定量濾紙過濾於125mL塑料瓶中。熏蒸開始的同時，另稱取等量的3份土壤於200mL聚乙烯塑料瓶中，直接加入100mlL0.5mol·L-1 K2SO4提取；另作3個無土壤空白。提取液應立即分析。 （3）測定 吸取10mL上述土壤提取液於150mL消化管（24mmх295mm）中，准確加入10mL0.018 mol·L-1K2Cr2O7—12 mol·L-1H2SO4溶液，加入2~3玻璃珠或瓷片，混勻後置於175±1℃磷酸浴中煮沸10min（放入消化管前，磷酸浴溫度應調至179℃，放入後溫度恰好為175℃）。冷卻後無損地轉移至150mL三角瓶中，用去離子水洗滌消化管3~5次使溶液體積約為80mL，加入一滴鄰菲羅啉指示劑，用0.05 mol·L-1硫酸亞鐵標准溶液滴定，溶液顏色由橙黃色變為藍色，再變為紅棕色，即為滴定終點。 （4）結果計算
Ⅳ 土壤微生物數量的測定方法
取一定重量的土壤，稱取1g，置於100ml無菌水中，充分振盪，然後離心，取上清液，就得到土壤浸出液（可以看做土壤中的微生物全部轉移至水中）。然後做梯度稀釋，取一定稀釋度的溶液，塗平板，培養後數菌落數，然後乘上稀釋倍數，就可得到1g土壤中該微生物的數量。
例如，你在稀釋10的7次方的平板上數出了15個菌落，則1g土壤中微生物數量為1.5×10的8次方個。
Ⅵ 測土壤微生物量碳磷酸浴用什麼做
磷酸浴用於重鉻酸鉀容量法中土壤樣品與重鉻酸鉀—硫酸(K2Cr2O7-H2SO4)溶液混合液體均勻加熱。一般也可用液體石蠟油、植物油浴替代，但植物油浴效果相對會差些。
重鉻酸鉀容量法
一、測定原理
在加熱的條件下，用過量的重鉻酸鉀—硫酸(K2Cr2O7－H2SO4)溶液，來氧化土壤有機質中的碳，Cr2O-27等被還原成Cr+3，剩餘的重鉻酸鉀(K2Cr2O7)用硫酸亞鐵(FeSO4)標准溶液滴定，根據消耗的重鉻酸鉀量計算出有機碳量，再乘以常數1.724，即為土壤有機質量。其反應式為：
重鉻酸鉀—硫酸溶液與有機質作用：
2K2Cr2O7+3C+8H2SO4=2K2SO4+2Cr2(SO4)3+3CO2↑+8H2O
硫酸亞鐵滴定剩餘重鉻酸鉀的反應：
K2Cr2O7+6FeSO4＋7H2SO4=K2SO4＋Cr2(SO4)3+3Fe2(SO4)3+7H2O
二、測定步驟：
1.在分析天平上准確稱取通過60目篩子(＜0.25mm)的土壤樣品0.1—0.5g(精確到0.0001g)，用長條臘光紙把稱取的樣品全部倒入乾的硬質試管中，用移液管緩緩准確加入0.136mol/L重鉻酸鉀—硫酸(K2Cr2O7-H2SO4)溶液10ml，(在加入約3ml時，搖動試管，以使土壤分散)，然後在試管口加一小漏斗。
2.預先將液體石蠟油、植物油、磷酸浴鍋加熱至185—190℃，將試管放入鐵絲籠中，然後將鐵絲籠放入油浴鍋中加熱，放入後溫度應控制在170—180℃，待試管中液體沸騰發生氣泡時開始計時，煮沸5分鍾，取出試管，稍冷，擦凈試管外部油液。
3.冷卻後，將試管內容物小心仔細地全部洗入250ml的三角瓶中，使瓶內總體積在60—70ml,保持其中硫酸濃度為1—1.5mol/l,此時溶液的顏色應為橙黃色或淡黃色。然後加鄰啡羅啉指示劑3—4滴，用0.2mol/l的標准硫酸亞鐵(FeSO4)溶液滴定，溶液由黃色經過綠色、淡綠色突變為棕紅色即為終點。
4.在測定樣品的同時必須做兩個空白試驗，取其平均值。可用石英砂代替樣品，其他過程同上。
三、結果計算
在本反應中，有機質氧化率平均為90%，所以氧化校正常數為100／90，即為1.1。有機質中碳的含量為58%，故58g碳約等於100g有機質，1g碳約等於1.724g有機質。由前面的兩個反應式可知：1mol的K2Cr2O7可氧化3／2mol的C，滴定1molK2Cr2O7，可消耗6mol FeSO4，則消耗1molFeSO4即氧化了3／2×1／6C=1／4C=3
計算公式為：
有機質g/kg=[ ((V0-V)N×0.003×1.724×1.1)／樣品重×1000
式中：V0—滴定空白液時所用去的硫酸亞鐵毫升數。
V—滴定樣品液時所用去的硫酸亞鐵毫升數。
N—標准硫酸亞鐵的濃度。mol/L
四、注意事項
1.根據樣品 有機質含量決定稱樣量。有機質含量在大於50g/kg的土樣稱0.1g，20—40g/kg的稱0.3g，少於20g/kg的可稱0.5g以上。
2.消化煮沸時，必須嚴格控制時間和溫度。
3.最好用液體石蠟或磷酸浴代替植物油，以保證結果准確。磷酸浴需用玻璃容器。
4.對含有氯化物的樣品，可加少量硫酸銀除去其影響。對於石灰性土樣，須慢慢加入濃硫酸，以防由於碳酸鈣的分解而引起劇烈發泡。對水稻(Rice)(Rice)(Rice)(Rice)土和長期漬水的土壤，必須預先磨細，在通風乾燥處攤成薄層，風干10天左右。
5.一般滴定時消耗硫酸亞鐵量不小於空白用量的1/3，否則，氧化不完全，應棄去重做。消煮後溶液以綠色為主，說明重鉻酸鉀用量不足，應減少樣品量重做。
Ⅶ 土壤中微生物碳氮的測定方法
1.3 土壤微生物區系測定
細菌、真菌、放線菌採用平板培養法。細菌採用牛肉膏蛋白腖培養基，放線菌採用改良高氏1號培養基，真菌採用馬丁氏培養基。
1.4 土壤微生物活性指標測定方法
1.4.1 土壤微生物生物量碳、氮的測定：土壤微生物生物量碳的測定：採用氯仿熏蒸—0.5mol （L-1K2SO4提取法，TOC自動分析儀測定；土壤微生物生物量氮的測定：採用熏蒸提取一開氏定氮法測定微生物生物氮量。
1.4.2 土壤氨化作用強度、硝化作用強度分析：土壤氨化作用測定採用土壤培養法，用半微量開氏定氮蒸餾法測定NH4+-N的含量；土壤硝化作用測定採用溶液培養法，用比色法測定NO2-N的減少量。
Ⅷ 測定微生物的生物量有哪些主要方法
測定微生物的生物量有哪些主要方法
測定的方法主要有四種：
1.直接計數測定：根據微生物種類，有血球計數板和細菌計數板；
2.比濁法：根據菌懸液的濃度在一定范圍內與光密度成正比，可以用分光光度計測OD值，用OD值表示樣品菌液濃度；
3.核酸計數法：熒光定量PCR技術；
4.活菌計數法：MPN和平板計數法由於測定方法的限制。新鮮土樣經氯仿熏蒸後（24h），土壤微生物死亡細胞發生裂解，釋放出微生物生物量碳，用一定體積的LK2SO4溶液提取土壤，借用有機碳自動分析儀測定微生物生物量碳含量。根據熏蒸土壤與未熏蒸土壤測定有機碳的差值及轉換系數（KEC），從而計算土壤微生物生物量碳。
Ⅸ 怎麼測定土壤中微生物啊大家來幫幫忙！
，加入蒸餾水，小心震盪。
2作為土壤微生物，應為它們種類繁多，如果真菌的顏色不明，要有一個提取的過程。
1，可以用高倍的光學顯微鏡.製作土壤浸出液。
4：取干凈土壤.培養：使用完全培養皿，滴入浸出液，培養
3.長出菌落後，根據菌落的形狀大小，有些是真菌菌落，有些是細菌菌落，真菌菌落可先用肉眼觀察，再都製成生物塗片，分層後取出上層清液。觀察真菌可以用較低倍數的光學顯微鏡，可染色處理，對於細菌的觀查，共生在一起，要想觀察好
Ⅹ 請教比色法如何測定土壤微生物生物量氮非常著急
你可以參考一下植物中蛋白質含量的測定，一般都是採用三酸消煮，然後再在定氮儀上進行測定，儀器要求不高，但是操作起來也是比較麻煩的。