① 漢恆生物科技（上海）有限公司怎麼樣
簡介：漢恆生物科技（上海）有限公司[簡稱漢恆生物]是一家專門從事生物技術服務和產品銷售與研發的高科技企業，公司專注於為廣大科研工作者提供優質專業的技術服務以及品質卓越的試劑產品。漢恆生物科技（上海）有限公司[簡稱漢恆生物]的主要服務包括腺病毒包裝、慢病毒包裝、逆轉錄病毒包裝、細胞穩定株篩選、siRNA設計、microRNA以及IncRNA研究服務。漢恆生物科技（上海）有限公司[簡稱漢恆生物]的主要產品包括特效抗支原體葯-SaveIt以及高效轉染試劑-Lipofiter。
法定代表人：鄒傑
成立時間：2010-12-28
注冊資本：375萬人民幣
工商注冊號：310114002217917
企業類型：有限責任公司（自然人投資或控股）
公司地址：上海市嘉定區菊園新區昌徐路88號2幢1391室
② Lipofiter轉染試劑怎麼樣
漢恆生物的LipoFiter 不錯，毒性很低，轉染效果也不亞於Lipo2000，我們簽了文章引用協議，他們一個月送我們1ml（包毒用，很好，經濟實惠～～但是遠遠不夠我們用，要是能多送點該多好～）。
③ 如何驗證crisper cas9效果
CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一種來自細菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫機制。在細菌及古細菌中，CRISPR系統共分成3類，其中Ⅰ類和Ⅲ類需要多種CRISPR相關蛋白（Cas蛋白）共同發揮作用，而Ⅱ類系統只需要一種Cas蛋白即可，這為其能夠廣泛應用提供了便利條件[1]。
目前，來自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系統應用最為廣泛。Cas9 蛋白（含有兩個核酸酶結構域，可以分別切割DNA 兩條單鏈。Cas9首先與crRNA及tracrRNA結合成復合物，然後通過PAM序列結合並侵入DNA，形成RNA-DNA復合結構，進而對目的DNA雙鏈進行切割，使DNA雙鏈斷裂。
由於PAM序列結構簡單（5』-NGG-3』），幾乎可以在所有的基因中找 到大量靶點，因此得到廣泛的應用。CRISPR-Cas9系統已經成功應用於植物、細菌、酵母、魚類及哺乳動物細胞，是目前最高效的基因組編輯系統[1]。
通過基因工程手段對crRNA和tracrRNA進行改造，將其連接在一起得到sgRNA（single guide RNA）。融合的RNA具有與野生型RNA類似的活力，但因為結構得到了簡化更方便研究者使用。通過將表達sgRNA的原件與表達Cas9的原件相連接，得到可以同時表達兩者的質粒，將其轉染細胞，便能夠對目的基因進行操作[2,3]。
目前常用的CAS9研究方法是通過普通質粒,質粒構建流程如下：
Cas9質粒構建
目前常見的CAS9普通質粒有（漢恆生物提供cas9質粒試劑盒）：
雖然普通質粒很多時候也能達到實驗效果，但是質粒轉染具有效率低，作用時間短暫性等缺點。病毒的出現解決了質粒這些問題，常用的病毒主要有慢病毒和腺病毒，慢病毒常用質粒見addgene（lentiCRISPR v2，lentiGuide-Puro，lentiCas9-Blast），慢病毒可以整合入宿主基因組中，長期穩定的表達（漢恆生物提供CRISPR/cas9 慢病毒包裝），但是由於慢病毒克隆能力有限而CAS9本身分子量比較大（大於4kb），且長期插入可能導致亂切，脫靶等，同時慢病毒包裝最終獲得的滴度不高等原因，腺病毒更有優勢，腺病毒克隆能力強，獲得的病毒滴度也高。同時相對於普通質粒來說，作用是時間也比較長，可以達到更理想的敲除效果。
④ 普通心肌細胞為什麼對TTX不敏感
心肌細胞為什麼對TT插不敏感？這是屬於正常現象。因為普通的心肌細胞對這個TT差不是特別的敏感
⑤ 將一段基因連到腺病毒載體上一定要穿梭質粒么原因是什麼
腺病毒包裝中的難點主要在於怎麼將外源基因表達框或者外源的shRNA表達框構建至腺病毒骨架載體上。由於腺病毒骨架載體比較大(~30kb)，而且載體中的一些常用酶切位點幾乎都有多個，如果用常規的酶切-連接的方式將外源基因或者shRNA表達框構建至腺病毒骨架載體上，成功率很低，因此，目前的腺病毒表達系統基本上都是用同源重組的方法將外源基因或shRNA表達框構建至腺病毒骨架載體上
PS: 有其他不懂的問題可以咨詢上海漢恆生物網站的客服人員,他們態度很好！
⑥ 做sirna 干擾細胞一周了還有效嗎
In readily transfected cells treated with potent and effective siRNAs such as the new AmbionSilencer Select siRNAs, near-maximal silencing can be achieved for 5–7 days.賽默飛他們siRNA干擾持續大概一個星期左右。要看你的具體的干擾的細胞，干擾效果等情況。但是，肯定是很短的。建議;重新干擾。--漢恆生物
⑦ 多個sgrna作用於同一個基因相互之間會不會有影響
但因為結構得到了簡化更方便研究者使用，進而對目的DNA雙鏈進行切割。 由於PAM序列結構簡單（5』-NGG-3』）。 通過基因工程手段對crRNA和tracrRNA進行改造CRISPR (clustered，作用是時間也比較長、魚類及哺乳動物細胞, regularly interspaced，且長期插入可能導致亂切、細菌，lentiCas9-Blast），來自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系統應用最為廣泛，作用時間短暫性等缺點： Cas9質粒構建 目前常見的CAS9普通質粒有（漢恆生物提供cas9質粒試劑盒）, short palindromic repeats)是一種來自細菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫機制。在細菌及古細菌中，但是由於慢病毒克隆能力有限而CAS9本身分子量比較大（大於4kb），同時慢病毒包裝最終獲得的滴度不高等原因,質粒構建流程如下，其中Ⅰ類和Ⅲ類需要多種CRISPR相關蛋白（Cas蛋白）共同發揮作用，CRISPR系統共分成3類。Cas9首先與crRNA及tracrRNA結合成復合物，是目前最高效的基因組編輯系統[1]，將其連接在一起得到sgRNA（single guide RNA），而Ⅱ類系統只需要一種Cas蛋白即可。通過將表達sgRNA的原件與表達Cas9的原件相連接，長期穩定的表達（漢恆生物提供CRISPR/，形成RNA-DNA復合結構，脫靶等，常用的病毒主要有慢病毒和腺病毒，lentiGuide-Puro，幾乎可以在所有的基因中找 到大量靶點，這為其能夠廣泛應用提供了便利條件[1]，獲得的病毒滴度也高。融合的RNA具有與野生型RNA類似的活力。 目前常用的CAS9研究方法是通過普通質粒，慢病毒可以整合入宿主基因組中，得到可以同時表達兩者的質粒，但是質粒轉染具有效率低，然後通過PAM序列結合並侵入DNA，便能夠對目的基因進行操作[2，腺病毒克隆能力強。 目前,3]。病毒的出現解決了質粒這些問題，將其轉染細胞。CRISPR-Cas9系統已經成功應用於植物，腺病毒更有優勢，使DNA雙鏈斷裂，可以分別切割DNA 兩條單鏈。Cas9 蛋白（含有兩個核酸酶結構域。同時相對於普通質粒來說，因此得到廣泛的應用，慢病毒常用質粒見addgene（lentiCRISPR v2、酵母： 雖然普通質粒很多時候也能達到實驗效果;cas9 慢病毒包裝），可以達到更理想的敲除效果
⑧ 慢病毒包裝試劑盒包出病毒的滴度一般是多少
不知道別的公司是什麼樣的，漢恆生物的滴度是這樣的。還可以免費申請試用裝
過表達慢病毒
＞10^8 PFU/ml
干擾慢病毒
＞10^8 PFU/ml
⑨ rescue 基因轉染多長時間
2016-07-2920:57 來源：生物學霸 點擊次數：143在基礎醫學與生物學研究領域中，基因干預越來越重要，方法也越來越多。如何實現細胞和動物水平上的基因高表達或抑制，我們需要精準、高效的基因轉染方法。 目前動物體內基因轉染方式，廣義上來說有兩種： 1、基因工程小鼠 基因工程小鼠，是經典的動物體內基因干預模型，包括轉基因小鼠（TGmouse，transgeneticmouse），敲除小鼠（KOmouse，Konckoutmouse），敲入小鼠（KImouse,Knockinmouse）。 基因工程小鼠對生物醫葯研究發揮了巨大的作用，但也存在不少的限制因素： （1）從受精卵開始的基因干預，經過長時間發育的復雜代償，所表現出來的功能表型和實際的基因功能表型可能存在巨大的偏差。2015年8月份，nature雜志發表了DidierStainier研究小組發現受精卵敲除egfl7基因和成年後用RNA干擾阻斷egfl7的表達，模式生物所得到的表型完全不一樣。 （2）基因工程小鼠周期長，成本高。君憶否，動物房裡伺候老鼠，一把屎一把尿拉扯它，給它找對象，還得幫它養孩子。（哭死） 2、病毒載體介導的動物體內基因轉染 目前最主流的病毒載體工具有三種：腺病毒（adenovirus），慢病毒（lentivirus），腺相關病毒（AAV，adenovirusassociatedvirus）。 相比較基因工程小鼠的局限性，病毒載體優勢明顯： ●避免了發育代償的問題。 ●周期和維持成本要小得多。 ●病毒載體介導的基因干預可以在動物造模後進行，作為一個基因治療干預手段，與臨床更加接近，而不僅僅是完成基因功能研究。 圖：AAVinvivo實例——在體感染小鼠海馬組織對比 （1）慢病毒 慢病毒由於其本身的基因組整合特性，長時間表達，因而在細胞基因轉染中被廣泛用於建立基因穩轉細胞系。但在動物活體（invivo）水平，慢病毒相比腺病毒和腺相關病毒，劣勢明顯。 a.慢病毒滴度的限制：動物體內基因轉染對注射的活性病毒載體總量及注射體積都有極高要求，而注射體積往往是容易被忽略但實際上限制最大的因素，如小鼠腦室注射，注射的體積不能超過2μL。同樣的病毒注射總量，病毒滴度越高則注射的體積數越小，而比慢病毒由於滴度限制(108～109TU/mL）,單位體積所含的病毒活性病毒顆粒數相比腺病毒和AAV少得多，因此在動物體內（invivo）基因轉染的應用上，慢病毒的轉染效果不理想。 b.潛在致瘤性：慢病毒整合到宿主細胞的基因組中，形成穩定的持續表達。雖然普遍認為慢病毒是相對安全的，但這種隨機插入仍會有致瘤的潛在危險性。 （2）腺病毒 腺病毒載體在動物基因轉染實驗中，特點突出且鮮明： a.腺病毒能夠在注射干預的72小時即開始強烈表達，因而對於一些干預窗口特別短的急性體內基因轉染，腺病毒有著顯著的優勢。 b.腺病毒載體在體內的表達時程為2～4周，四周後表達基因表達衰減明顯；如需要延長表達時間，可在第一次注射兩周後進行第二次注射。 圖：不同劑量的腺病毒載體體內基因轉染的起效時間曲線J.KOLLSetc.Proc.Natl.Acad.Sci.USAVol.91,pp.215-219,January1994/ c.腺病毒有較高的免疫原性，通過系統性給葯比較容易激活免疫系統產生相應的抗體，影響體內基因轉染效果，因此腺病毒載體的是目的臟器的局部注射（肝臟例外）。最常見的腺病毒載體給葯方式為原位多點注射，比如骨骼肌，心肌，腫瘤組織等，一般選取3～5個注射點，每個點10µL左右的注射量。 （3）腺相關病毒（AAV）：動物體內基因轉染神器 腺相關病毒，即AAV，是最優秀最安全的動物體內基因轉染工具，相比較慢病毒等其他病毒載體，AAV有滴度高，免疫原性極低，表達時間長，無任何致病性及病理毒理作用，病毒顆粒小，擴散范圍廣，多血清型且有相對組織親和性等優點。 AAV有多種血清型，每種血清型的靶器官親和力各不相同，這一點決定了AAV與其他病毒載體相比，更具有選擇性。漢恆生物在原有的AAV血清型基礎上，開發出器官親和型。