細胞免疫化學爬片怎麼看

Ⅰ 爬片的什麼叫爬片

爬片又名細胞爬片 ，細胞爬片就是讓玻片浸在細胞培養基內，細胞在玻片上生長，主要用於組織學，免疫組織化學，冰凍切片，細胞塗片，原位雜交等.

Ⅱ 如何判斷細胞爬片細胞固定後皺縮

我們實驗室做過，小編順便推薦一下細胞爬片是從上海晶安買的，實驗效果不錯. 細胞免疫熒光步驟： 1.細胞爬片；首先是玻片的處理，普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊，先用洗衣粉洗干凈，用水沖靜烤乾，然後泡酸過夜，撈酸後流水洗。
【爬片的准備】

1. 爬片：
24*24蓋玻片，剛好用於6孔板。也可用更大的蓋玻片，放在大的培養皿中爬片。

2. 蓋玻片泡酸過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再置於無水酒清中浸泡6小時，再用三
蒸水沖洗3遍（個人認為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了，如果不幹凈的話，細胞帖壁不
好），放在飯盒或者玻璃培養皿中烘乾後進行高壓消毒、烤乾。

3．蓋玻片浸泡75%乙醇10分鍾消毒，然後酒精燈上烤乾，直接放入培養皿，開始種細胞。重點是玻片是干凈的、無菌的。

4.蓋玻片在液體中經常有貼壁吸附力，用一般鑷子很難一次性夾起，將注射器針頭針尖
向背面弄個小鉤，這樣將爬片輕輕勾起，用小鑷子取出就可以。

【細胞爬片】

1. 胰酶消化細胞後計數重懸細胞於完全培養基中。

2. 加細胞時，根據玻片的大小，先在每個孔里准備放爬片的位置滴少量培養基，目的是使
玻片與培養皿靠培養基的張力粘合到一起，然後放玻片，防止加細胞懸液時玻片漂起，造成雙層細胞貼片。整個過程注意無菌操作。

3. 根據自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養板內即可

4. 按照實驗設計，作用一定時間後取玻片。注意細胞不能太密，否則容易掉片。

【細胞爬片的固定】

1. 細胞爬片取出後，PBS洗2遍。但比如做凋亡的TUNEL染色時就避免洗，因為凋亡的
細胞在洗的過程中有可能會脫落。

2.常用的固定液
1.） 冷丙酮，可用於一般的免疫組化染色。將純的丙酮預先放入冰箱-20℃後便為冷丙酮，加入冷丙酮於-20℃（丙酮有很強的揮發性，注意將含有丙酮和爬片的器皿蓋嚴，防止其揮發）固定10分鍾。取出後，室溫吹乾，然後放入-20℃保存。

2. ）多聚甲醛(常用4%)：可用於免疫電鏡；也可用於免疫熒光以及TUNEL染色。主要檢測組織內一些性能嬌弱的抗原特別是細胞表面抗原，例如各類淋巴細胸分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等室溫固定15分鍾後，將表面液體吹乾，入-20℃保存
3.） 95％乙醇，可用於免疫組化。
優點：穿透性強、抗原性保存較好。
缺點：但醇類對低分子蛋白質、多肽及胞漿內蛋白質保存效果較差，使蛋白變性的作用輕，固定後可再溶解；染色過程中，溫育時間長，抗原可流失而減弱反應強度室溫固定
15分鍾後，將表面液體吹乾，入-20℃保存
4. ）甲醛(福爾馬林)應用最廣
優點：形態結構保存好，且穿透性強，
缺點：甲醛放置過久可氧化為甲酸，使溶液pH降低，影響染色；分子間交聯形成的網格
結構可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露。可造成假陰性的染色結果。室溫固定15分鍾後，將表面液體吹乾，入-20℃保存。

【細胞爬片的組化染色】

1. PBS清洗標本 3次各2 min。

2. 0.5%Triton X-100( DPBS配) 孵育 1次20min。（此步驟用於胞漿、胞核抗原）

3. PBS清洗標本3次各 2 min。

4. 3%H2O2孵育 15 min。

5. 餘下步驟同石蠟切片組化染色。

Ⅲ 細胞爬片染色免疫組化法步驟是什麼

師兄用的晶安生物的細胞爬片。
晶安生物細胞爬片免疫組化法： 1 胰酶消化細胞，收集至離心管；調整樣本細胞數為1×106 /ml； 2 將單細胞懸液滴加至平皿內無菌載玻片表面，置於37℃ 5%的加濕CO2孵箱中過夜，使細胞爬片。 3 吸棄平皿內培養上清，加入新鮮培養基，用無菌培養基洗3次； 4 PBS沖洗相應方案的載玻片3次； 5 將載玻片置於95%乙醇中固定約1h； 6 倒置相差顯微鏡下觀察，並劃定載玻片上細胞爬片密集區； 7 在相應區域滴加按一定比例稀釋後一抗，4℃冰箱內過夜濕孵。陰性對照以PBS緩沖液代替一抗。 8 先暫復溫30min，後PBS沖洗載玻片3次； 9 滴加二抗，室溫濕孵30min；後PBS沖洗載玻片3次； 10 DAB顯色：將配置好的DAB溶液滴加至載玻片上，室溫下孵育3min至載玻片略顯黃色； 11 清水充分沖洗載玻片，蘇木素復染核3-5min，清水沖洗，鹽酸酒精分化20s，清水沖洗，氨水返藍3min，清水沖洗，後置於75%-80%-95%-無水酒精中脫水，每步驟約2min； 12 將載玻片置於1、2、3道二甲苯中，各約15min，中性樹脂封片，置於陰涼通風處風干。

Ⅳ 什麼叫細胞爬片細胞甩片滴片

爬片就是讓玻璃片浸在細胞培養基內，細胞會向玻璃片生長，觀察細胞遷移能力的。
甩片是將細胞在玻璃片上，再用甩片機講殘余液體甩掉
滴片就是將細胞懸液直接滴在玻璃片上觀察。

Ⅳ 如何做細胞爬片

細胞爬片就是讓細胞（貼壁細胞）在片子（蓋玻片）上生長。主要用來做免疫細胞化學啊，原位雜交等吧。在做這些實驗時，製作標本有兩種，一是離心做細胞塗片，二是細胞爬片。利用貼壁細胞在玻璃等物質上貼壁生長的特點，讓它在蓋玻片上生長，可以使製作的細胞片子更牢固，在後面的洗滌過程中，不易脫落。特別是在用粘附劑如多聚賴安酸處理過的片子上，細胞貼得更牢固。
製作方法：將片子放在細胞培養板（均已經消毒）中，加入一定數量的細胞懸液，讓它生長24小時。待它貼壁後，細胞爬片就製作好了。
需要的器材：多聚賴安酸、合適大小的蓋玻片（根據細胞培養板孔大小而定）、細胞培養板、培養基。

Ⅵ 細胞爬片是什麼

細胞爬片就是讓玻片浸在細胞培養基內，細胞在玻片上生長，主要用於組織學，免疫組織化學，冰凍切片，細胞塗片，原位雜交等.

Ⅶ 爬片具體步驟是什麼

單位實驗室做過，小編順便推薦一下細胞爬片是從上海晶安生物公司買的，實驗效果不錯.
細胞免疫熒光步驟：
1.細胞爬片；首先是玻片的處理，普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊，先用洗衣粉洗干凈，用水沖靜烤乾，然後泡酸過夜，撈酸後流水洗凈，烤乾，置於器皿中高壓滅菌，然後再烤箱中大約8小時烤乾備用。
爬片可以在培養皿 六孔板或24孔板中都可，我選擇在培養皿中爬。一為節約經費（培養皿可以重復利用）二來覺得培養皿口大，操作比較方便。培養皿消毒同上，消毒時記得消兩把鑷子
具體操作是：用胰酶消化好細胞，充分吹打，使之成單細胞懸液（注意：這一點很重要，關繫到將來爬出來片子的質量）
取出消毒的培養皿，可以先加少量培養基（以使玻片與培養皿緊密接觸），將玻片小心放入擺放其中，然後將單細胞懸液一滴一滴的滴到玻片上。最後蓋上培養皿置於37度5％CO2的暖箱中培養，根據細胞生長狀況，24小時或更長時間適時取出爬片。
爬片置於37度PBS中洗三次，每次3到5秒鍾，然後在4％多聚甲醛中固定15分鍾，然後再用37度去離子水將甲醛沖干凈，注意手法輕柔，要不然掉片很厲害。同時操作過程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功盡棄。
將做好的爬片置於濾紙上晾乾，然後用中性樹膠粘在載玻片上。注意一定要等中性樹膠徹底幹了之後才能做後續實驗，要不然玻片會掉下來的，就又是前功盡棄了 做好的細胞爬片可以放在－20保存備用，具體能保存多長時間不太清楚，當然盡量早用。
2.4%多聚甲醛固定10min(固定細胞器用預冷的70%甲醇+30%丙酮)；
3.PBS漂洗5min；
4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化處理)；
5.PBS漂洗2次，每次5min；
6.1%BSA封閉30min；
7.加入1%BSA稀釋的一抗，於37℃雜交2h；
8.PBS漂洗2次，每次5min；
9.加入1%BSA稀釋的二抗，於37℃雜交1h；
10.PBS漂洗2次，每次5min；
11.5ug/ml DAPI染色2min；
12.抗淬滅封片劑封片。
抗淬滅封片劑:
2.5% DABCO (w/v)
50mM Tris(pH8.0)
90%甘油