怎麼用多功能酶標儀檢測化學發光

1. 多功能酶標儀的介紹

多功能酶標儀又稱多功能微孔板檢測儀，可對以微孔板為體系的實驗提供多種不同模式的檢測。通常，多功能酶標儀至少可提供「吸收光」、「熒光」、「發光」三種不同的檢測模式。一些中高端多功能酶標儀還可完成「時間分辨熒光」、「熒光偏振」、「熒光共振能量轉移」等高級熒光檢測實驗。

2. 多功能酶標儀的相關參數

1、光密度測讀模式：1）波長范圍：230~1000nm，精確選擇波長1nm。
2）帶寬：2 nm (230-285 nm), 4 nm (>285 nm)。
3）波長准確度：±2.0nm。
4）波長重現性：±0.2nm。
5）測讀范圍：0~4.0 OD。
6）光分辨度：0.0001 OD。
7）測讀准確度(微孔板)：<1% @ 2.0 OD <3% @ 3.0 OD
8）(比色杯)：<1% 0-3.0 OD
9）測讀精確度：<±0.003 OD±1.0%,0~2.0 OD。
10）雜散光：0.03% @ 230 nm。
11）微孔板測讀時間：96: 11 秒384: 22 秒。
12）溫度范圍：室溫+4~65度。
2、時間分辨熒光法（TRF）
1）波長范圍 濾光片: 230 - 700 nm (850 nm 可選)，單色器: 250 - 850 nm，單色器遞增量1nm。
2）數據採集可調
3）測讀次數：1~100flashes，
4）測讀延遲：0~600usec。
5）讀取數據積分時間：50~1500usec。
6）帶寬可調：9nm, 13.5nm, 17nm, 20nm
8）精確度：60fM/孔 銪元素（96孔及384孔頂讀模式）。
9）讀取速度：96孔板17秒，384孔48秒。
3、熒光偏振（FL）
1）深部阻擋濾光片/二向色鏡（頂部）。
2) 波長范圍：400 - 700 nm (320-850 nm 可選)。
3）檢測靈敏度：3nM熒光素/孔時，<5mp SD。
4）讀取速度：96孔板42秒，384孔123秒。
4、化學發光模式（Lum）
1）連續波長范圍250~850nm。
2）靈敏度：10 amol ATP（96孔及384孔頂讀模式）。
3）讀取速度：96孔板120秒，384孔420秒。
4）光交叉<0.5%。

3. SpectraMax 190全自動酶標儀能否檢測化學發光（光強）

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4. 如何使用多功能酶標儀檢測雙熒光素酶

報告基因檢測被廣泛應用於研究基因表達及外部刺激下原核和真核細胞的反應。Luciferase報告基因系統是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統。可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。但是報告基因實驗中往往會受到各種實驗條件的影響，例如培養細胞的數目和活力的差別、細胞轉染和裂解的效率、以及加樣操作過程中引起的變異。Dual-Luciferase雙熒光素酶報告基因檢測系統中含有在同一細胞中同時表達的兩種熒光素酶。共轉染的「對照」報告基因會作為內對照，減小細胞活性和轉染效率對實驗的影響。因此雙報告系統減少了外部干擾，使得實驗數據更可信。Promega提供了一種先進的雙報告基因技術（Dual-reporter assays）,結合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試，該技術同時使用兩個獨立的報告基因以提高實驗的准確性，Biotek synergy 系列微孔板檢測儀作為雙報告基因的檢測分析平台獲得了Promega DLR 認證。
在雙報告基因系統中，通常一個報告基因用於檢測特定實驗條件下待測物的反應，即「實驗」reporter，另一個報告基因用來檢測實驗條件，類似於內部對照，用於校準「實驗」reporter的數據。通過這種方法，可減少內在的變化因素所削弱的實驗准確性，例如：轉染效率、細胞活性、細胞裂解差異以及加樣操作過程中引起的差異。Promega公司的Dual-Luciferase系統利用螢火蟲和海腎熒光素酶的活性分別檢測實驗組和對照組。螢火蟲熒光素酶是一種分子量為61KD的單體酶，分兩步催化蟲熒光素的氧化反應，產生560nm的光，海腎熒光素酶是一種分子量為36KD的單體酶，催化海腎熒光素的氧化反應，產生中心波長為480nm的藍光。螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶沒有種源同源性，對應不同的反應底物，反應中沒有任何的交叉干擾。

5. 多功能酶標儀的簡介

多功能酶標儀指擁有多種檢測模式的單體台式酶標儀。通常具有比色皿插槽，可檢測吸光度（Abs)、熒光強度(FI)、時間分辨熒光（TRF)、熒光偏振（FP)、和化學發光（Lum)。

6. 多功能酶標儀的操作方法

首先將抗原(或抗體)物質吸附(醫學上稱「包被」)在樣品盤中(國際上通用的樣品盤是96 標准微孔反應板)；再將待測樣品(如血液、體液等)加入樣品盤；於是待測未知的抗體(或抗原)與包被的抗原(或抗體)相結合，成為抗體抗原復合物。
當依次加入酶結合物(即酶標記抗體或酶標記抗原)和酶的底物時便產生呈色反應，呈色程度與被檢測樣品中待測抗體(或抗原)的量相關，據此就可以得出定性或定量的檢測結果。

7. 多功能酶標儀的用途

酶標儀是一種用途廣泛的生物檢驗醫療設備，利用酶聯免疫分析法,根據酶標記原理，根據呈色物的有、無和呈色深淺進行定性或定量分析。這是一種極具生命力的免疫學技術。可用於單克隆抗體篩分、凝血分、抗生素靈敏度檢驗，以及其它需要進行比色的分析工作中。該儀器適用於臨床檢驗、微生物學、流行病學、免疫學、內分泌學以及農林科學等領域。廣泛用於醫院、血站、防疫站、生物製品等部門。
我國衛生行政主管部門已明確規定,對多發常見的肝炎病診斷，不能用目測進行，必須用酶標儀判斷。沒有酶標儀或不用酶標儀的醫院不能上等級，也沒有判斷肝炎的資格和權利。對於有蔓延趨勢的艾滋病毒的判斷，必須建立專門的艾滋病實驗室並採用酶標儀進行判斷。
分類
酶標儀是實驗室常用的一種儀器，一般可以按照濾光方式的不同和功能的不同進行劃分。
一. 按照功能的劃分,酶標儀可以分為光吸收酶標儀,熒光酶標儀,化學發光酶標儀和多功能的酶標儀.光吸收酶標儀是用來進行可見光與紫外光吸光度的檢測.特定波長的光通過微孔板中的樣品後,光能量被吸收,而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關系,由此可以用來定性和定量的檢測.光吸收的檢測技術成熟,成本低,操作簡單,但是動態范圍窄,靈敏度比較低,特異性不強.一般可見光和紫外光分別採用鎢燈及氘燈作為光源，而紫外/可見酶標儀是可以將兩種光源進行切換，適應不同測量波長的需求。
熒光酶標儀是用來進行熒光的檢測.通過激發光柵分光後的特定波長的光照射到被熒光物質標定的樣品上後,會發出波長更長的發射光,通過發射光柵後到達檢測器.熒光的強度與樣品的濃度呈一定的比例.熒光檢測靈敏度高,可實時檢測,使用方便,檢測模式多樣,但是容易受外界干擾,激發光與發射光容易互相影響,干擾檢測.化學發光是來自生物化學反應中的自發光,可分為輝光型和閃光型兩種類型.輝光型發光持久,穩定,能持續一段時間;閃光型發光時間短,變化快,穩定性不強,需要應用自動加樣器才可以進行.化學發光中發出的光子數與樣品量呈一定比例關系,化學發光酶標儀靈敏度非常高,動力學范圍廣.多功能酶標儀是以上三種酶標儀的集合,比如BioTek的Synergy H1/H4,它集成了兩種或者三種酶標儀於一體,可以同時進行光吸收,熒光和化學發光的檢測,功能強大,使用范圍廣,可作為研究平台,避免了重復購買,是實驗室的首選.
二. 酶標儀基於濾光方式的不同可分為濾光片式的酶標儀和光柵式酶標儀.濾光片式酶標儀採用濾光片來進行波長的選擇,酶標儀內置濾光片輪,可選擇試驗所需的不同波長的濾光片來進行分光,光源發出的全波譜光經過濾光片後,大部分被過濾,只剩下濾光片本身允許的波長通過,這樣就可就通過濾光片來獲得特定的波長.濾光片輪一般包含4-6塊濾光片,通過選擇不同的濾光片可獲得不同的波長,但是獲得的波長都是固定的,受到一定的限制,不能獲得任意所需的波長,而且更換濾光片價格比較昂貴. 一般波長固定的濾光片有405，450，490，630nm。
光柵式酶標儀雖然才出現短短十餘年,但是發展非常迅猛,現在已經是主流的酶標儀.比如BioTek的Synergy Mx/H1m,它採用光柵進行分光,光源發出的全波譜光線經過光柵後,通過光柵上面分布的一系列狹縫的分光,就可以獲得任意波長的光，波長連續可調，一般遞增量為1nm, 同時具有帶寬可選的功能.光柵式酶標儀使用方便靈活,可以通過軟體選擇任意波長的光,而且可以進行全波長的掃描,通過全波長掃描可以獲得未知樣品的吸收峰,從而可以達到檢測未知樣品的目的,在實驗室中很受歡迎,可以進行更多實驗的檢測.因此目前在國內的普及程度很高.另外根據通道的個數，可以將酶標儀分為單通道和多通道兩種類型，單通道又有自動和手動兩種之分。

8. 單功能酶標儀與多功能酶標儀區別是什麼

酶標儀、洗板機以及電腦組件構成了酶免檢驗工作站，其中的酶標儀根據功能劃分，可以分為四種酶標儀醫療器械，分別是光吸收酶標儀，熒光酶標儀，化學發光酶標儀和多功能酶標儀。

種、光吸收酶標儀

光吸收酶標儀是用來進行可見光與紫外光吸光度的檢測，特定波長的光通過微孔板中的樣品後，光能量被吸收，而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關系，由此可以用來定性和定量的檢測，光吸收的檢測技術成熟，成本低，操作簡單，但是動態范圍窄，靈敏度比較低，特異性不強。一般可見光和紫外光分別採用鎢燈及氘燈作為光源，而紫外/可見酶標儀是可以將兩種光源進行切換，適應不同測量波長的需求。

第二種、熒光酶標儀

熒光酶標儀是用來進行熒光的檢測，通過激發光柵分光後的特定波長的光照射到被熒光物質標定的樣品上後,會發出波長更長的發射光,通過發射光柵後到達檢測器.熒光的強度與樣品的濃度呈一定的比例.熒光檢測靈敏度高,可實時檢測,使用方便,檢測模式多樣,但是容易受外界干擾,激發光與發射光容易互相影響,干擾檢測.

第三種、化學發光酶標儀

化學發光酶標儀是來自生物化學反應中的自發光，可分為輝光型和閃光型兩種類型。輝光型發光持久，穩定，能持續一段時間;閃光型發光時間短，變化快，穩定性不強，需要應用自動加樣器才可以進行。化學發光中發出的光子數與樣品量呈一定比例關系，化學發光酶標儀靈敏度非常高，動力學范圍廣。

第四種、多功能酶標儀

多功能酶標儀是以上三種酶標儀的集合，它集成了兩種或者三種酶標儀於一體，可以同時進行光吸收，熒光和化學發光的檢測，功能強大，使用范圍廣，可作為研究平台，避免了重復購買，是實驗室的理想選擇。另外根據通道的個數，可以將酶標儀分為單通道和多通道兩種類型，單通道又有自動和手動兩種之分。

9. 如何用酶標儀檢測熒光（熒光，酶標儀，熒光

酶標儀的使用方法可以參考： 1.開啟儀器電源開關，預熱5分鍾，同時啟動電腦。 2.啟動Magellan.exe程序，加入程序主界面，儀器微孔板架同時自動打開。 3.將待測微孔板在板架上放好。 4.根據不同的測量要求，設置好測定波長和測量模式後，進行檢測

10. 什麼叫本底活性用多功能酶標儀測定化學發光時要設定本底活性嗎如何設定

本底活性就是空白的意思，或者說是對照，不管是做化學發光還是一般紫外，都要做對照的，也就是說要去掉本地活性，具體要看你實驗如何做，可查看相關文獻。希望對你有用。