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化學發光競爭法有哪些

發布時間:2022-07-31 06:27:30

㈠ 關於化學發光檢測法

化學發光檢測法有很多,不知你說的是不是焰色反應,如果是焰色反應,則是由於金屬原子內部電子能級躍遷導致的,不同金屬會發出不同顏色(波長)的光。這時一般只能作為定性檢測,不能作為定量檢測。
如果指的是原子發射光譜,其發光原理也是原子中最外層電子受到激發(可以是光致也可以是熱致等等),由基態轉化為激發態,然後躍遷回基態以光的形式輻射能量。這時可以作為定量分析(可定量必可以定性),這時可以看發射光譜譜圖曲線的高度,一般有幾種方法來測量,像外標法,內標法,標准曲線法等等,如果想知道更詳細的東西可以參考儀器分析的有關內容。

㈡ 免疫分析方法有哪些

(1)放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)。RIA技術是使用以放射性同位素(如125I、32P、3H等)作標記的抗原或抗體,用γ-射線探測儀或液體閃爍計數器測定γ-射線或β-射線的放射性強度,來測定抗體或抗原量的技術。它包括以標記抗原為特點的放射免疫分析和以標記抗體為特點的免疫放射分析(immunoradiometricassay,IRMA)。前者以液相競爭結合法居多,既測大分子抗原又測小分子抗原;後者以固相法測大分子抗原為主。

RIA在早期建立的農葯免疫分析方法中佔了很大比重,建立了狄氏劑、艾氏劑、2,4-D和2,4,5-T、對硫磷和百草枯等農葯的放射免疫分析法。盡管該方法靈敏度非常敏銳(RIA通常為10-9g、10-12g,甚至10-15g),應用范圍廣,但進行RIA需使用昂貴的計數器,也存在放射線輻射和污染等問題,因此在農葯殘留檢測領域的應用和發展受到了一定的限制,並逐步為其他免疫分析方法所取代。

(2)酶免疫分析法(enzymeimmunoassay,EIA)。EIA是繼RIA之後發展起來的一項免疫分析技術。其檢測原理與放射免疫法類似,但所用的標記物為酶,它將抗原、抗體的特異性免疫反應和酶的高效催化作用有機結合起來,通過測定結合於固相的酶的活力來測定被測定物的量。用做標記物的酶有辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)和鹼性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP)、葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase,GO)、脲酶(urease)等。酶標記反應的固相支持物有聚苯乙烯塑料管、膜等。目前大多數採用96孔酶標板(MTP)作為固相支持物。這種板的檢測容量大,樣本數量多,只需有台簡單的酶標儀就可得出准確的檢測數據。也有學者採用磁珠作為固相材料進行EIA研究,其原理是將高分子材料(聚苯乙烯、聚氯乙烯等)包裹到金屬小顆粒(Fe2O3,Fe3O4)外面,再通過化學方法鍵合上氨基(-NH2)、羧基(-COOH)、羥基(-OH)等活性基團,再與抗體或抗原耦聯,製成免疫性微珠。該方法的優點是微珠比表面積大,吸附能力強,能懸浮在液相中快速均勻的捕獲樣品中的待測物,通過外加磁場後能夠實現微珠與樣品液的快速分離,從而減少檢測時間、提高檢測靈敏度。

由於酶標試劑制備容易、穩定、價廉,酶免疫分析的靈敏度接近放射免疫技術,故近年來EIA技術發展很快,已開發了多種EIA方法。其中酶聯免疫法(,ELISA)是目前農葯殘留檢測中應用最廣泛的酶免疫分析技術。

(3)熒光免疫分析法(fluorescenceimmunoassay,FIA)。FIA檢測的基本原理是將抗原抗體的高度特異性與熒光的敏感可測性有機地結合,以熒光物質作為示蹤劑標記抗體、抗原或半抗原分子,制備高質量的特異性熒光試劑。當抗原抗體結合物中的熒光物質受到紫外光或藍光照射時,能夠吸收光能進入激發態。當其從激發態回復基態時,能以電磁輻射形式放射出所吸收的光能,產生熒光。繪制農葯濃度-熒光強度曲線,可以定性、定量檢測樣品中的農葯殘留量。

適用於抗體、抗原或半抗原分子標記的熒光素須符合要求:①應具有能與蛋白質分子形成穩定共價鍵的化學基團,或易轉變成這類反應形式而不破壞其熒光結構;②標記後,熒光素與抗體或抗原各自的化學結構和性質均不發生改變;③熒光效率高,與蛋白質結合的需要量很少;④熒光素與蛋白質結合的過程簡單、快速,游離的熒光素及其降解產物容易除去;⑤結合物在一般儲存條件下性能穩定,可保存使用較長時間。

(4)化學發光免疫分析法(luminescentimmunoassay,LCIA)。LCIA又可分為化學發光免疫測定(chemiluminescentimmunoassay,CLCIA)和生物發光免疫測定(bio-luminescentImmunoassay,BLCIA)。

1976年,Shroeder首先用生物素(B)-親和素(A)系統建立了均相化學發光免疫測定技術,爾後Halman和Velan又將其引伸到非均相體系,現已滲入到生物學研究的各個領域。其原理是以發光指示抗原與抗體的結合,當發游標記物與相應的抗體或抗原結合後,底物與酶作用,或與發光劑產生氧化還原反應,或使熒光物質(例如紅熒烯等)激發,釋放光能。最後用光度計測定其發光強度,進行定量分析。常用發游標記物有辣根過氧化物酶(HRP)、魯米諾(luminol)、異魯米諾(isoluminol)、咯粉鹼(lophine)、光澤精(lucigen)、雙(2、4、6-三氯苯)草酸酯、聯苯三酚和6[N-(4-二氨基丁基)-N-乙基]-氨基-2,3-二氫吩嗪-1,4-二酮(ABEI)等。用上述發游標記物標記的抗體(或抗原)在一定的pH緩沖溶液中與相應的抗原(或抗體)結合時,在協同因子(例如H2O2等)的作用下發光,其發光強度與被測物的濃度成正比,故可以用於定量分析。

發光免疫測定具有特異性強、靈敏度高(檢測限量達10-15mol/L)、快速(1~3h)、發光材料易得等優點。但其發光過程和強度常受到發光物質本身的化學結構、介質的pH、協同發光物質和金屬離子雜質等影響。

(5)金免疫層析分析法(goldimmuno-chromatographyassay,GICA)。GICA檢測原理是將配體(抗體或抗原)以線狀包被固化於硝酸纖維素膜等微孔薄膜上,膠體金標記另以配體或其他物質並以干態固定在吸水材料上,通過毛細作用,使樣品溶液在層析條上泳動,當泳動至膠體金標記物處時,如樣品中含有待檢受體,則發生第一步高度特異性的免疫反應,形成的免疫復合物繼續泳動至線狀包被區時,發生第二步高度特異性的免疫反應,形成的免疫復合物被截留在包被的線狀區,通過標記的膠體金而顯紅色條帶(檢測帶),而游離的標記物則越過檢測帶,與結合的標記物自動分離。通過檢測帶上顏色的有無或色澤深淺來實現定性或定量測定2。

2金標試紙條檢測

GICA法具有快速(5~20min)、廉價、結果明確、無需復雜操作技巧和特殊設備、攜帶方便等優點。但相對於其他免疫分析方法,該方法檢測靈敏度稍低,主要適合現場快速定性或半定量測定。目前該方法已被應用於醫學和生物學等眾多研究領域,尤其在發達國家已經得到了廣泛的應用。

(6)免疫分析與儀器分析技術的聯用技術。使用單一的IA技術進行農葯殘留分析獲得的信息量少,而理化分析方法的選擇性又比較差。Kramer等人將免疫分析法和液相色譜法(LC)聯合起來使用,從而簡化了分析方法,提高了檢測效率。LC-IA的聯用,將LC的高分離能力和IA的高靈敏性和高特異性融為一體。該分析法尤其適合多組分殘留分析和微量分析。免疫分析與氣相色譜/質譜(GC/MS)的聯用可減少結構相似的農葯或代謝產物分析中的交叉反應,以降低假陽性。

㈢ 化學發光法和酶聯免疫法的區別

1、原理上的區別

化學發光法依據化學檢測體系中待測物濃度與體系的化學發光強度在一定條件下呈線性定量關系的原理,利用儀器對體系化學發光強度的檢測,而確定待測物含量。

酶聯免疫法原理是在測定時把受檢標本和酶標抗原或抗體與固相載體表面的抗原或抗體起反應加入酶反應的底物後,底物被酶催化變為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據顏色反應的深淺來進行定性或定量分析。

2、分類上的區別

化學發光法依據供能反應的特點,可將化學發光分析法分為普通化學發光分析法,供能反應為一般化學反應;生物化學發光分析法,供能反應為生物化學反應;電致化學發光分析法,供能反應為電化學反應。根據測定方法又可分為直接測定CL分析法、偶合反應CL分析法等。

酶聯免疫法根據測定方法可分為雙抗體夾心法;雙位點一步法;間接法測抗體法,利用酶標記的抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體;競爭法,以測定抗原為例,受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合,因此結合於固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。

3、作用上的區別

化學發光法在痕量金屬離子、各類無機化合物、有機化合物分析及生物領域都有廣泛的應用。

酶聯免疫法可用於測定抗原,也可用於測定抗體,ELISA現在已成為目前分析化學領域中的前沿課題 。

㈣ 化學發光包括哪些方法

化學發光是物質在進行化學反應過程中伴隨的一種光輻射現象,可以分為直接發光和間接發光。直接發光是最簡單的化學發光反應,有兩個關鍵步驟組成:即激發和輻射。如A、B兩種物質發生化學反應生成C物質,反應釋放的能量被C物質的分子吸收並躍遷至激發態C*,處於激發的C*在回到基態的過程中產生光輻射。這里C*是發光體,此過程中由於C直接參與反應,故稱直接化學發光。

㈤ 什麼是化學發光分析方法

化學發光分析法就是對化學發光進行分析的。如伯樂生命的chemidoc
xrs+
系統與chemidoc
mp
系統就是進行化學發光分析法的。化學發光分析法具有靈敏度高、設備簡單、操作方便、線性范圍廣、分析快、也便於實現自動化等優點。無論是測定微時金屬元素、大氣污染檢測還是降低噪音等方面,都會運用化學發光分析法。
希望採納

㈥ 「化學發光法」指的是什麼

化學發光法是利用化學發光測定化學發光反應反應物、催化劑、增敏劑、抑制劑,偶合反應中的反應物、催化劑、增敏劑的方法。
化學發光現象是一種常見的自然現象。
化學發光是物質在化學反應過程中,其物質分子吸收化學能產生光的輻射現象,如:REK-20N型化學發光定氮儀是興化睿科採用化學發光檢測原理,待測樣品(或標樣)被引入到高溫裂解爐後,在1050℃左右的高溫下,樣品被完全氣化並發生氧化裂解,其中的氮化物定量地轉化為一氧化氮(NO)。樣品氣經過膜式乾燥器脫去其中的水份。亞穩態的一氧化氮在反應室內與來自臭氧發生器的O3氣體發生反應,轉化為激發態的NO2*。當激發態的NO2*躍遷到基態時發射出光子,光信號由光電倍增管按特定波長檢測接收。再經微電流放大器放大、計算機數據處理,即可轉換為與光強度成正比的電信號。在一定的條件下,反應中的化學發光強度與一氧化氮的生成量成正比,而一氧化氮的量又與樣品中的總氮含量成正比,故可以通過測定化學發光的強度來測定樣品中的總氮含量。

㈦ 化學發光分析法的分類

化學發光分析法分為:
1、普通化學發光分析法 ( 供能反應為一般化學反應 ) ;
2、生物化學發光分析法 ( 供能反應為生物化學反應;簡稱 BCL) ;
3、電致化學發光分析法 ( 供能反應為電化學反應,簡稱 ECL) 等。
根據測定方法該法又可分為:
a、直接測定 CL 分析法;
b、偶合反應 CL 分析法 ( 通過反應的偶合,測定體系中某一組份;
c、時間分辨 CL 分析法 ( 即利用多組份對同一化學發光反應影響的時間差實現多組份測定 ) ;
d、固相、氣相、掖相 CL 。分析法;
e、酵聯免疫 CL 分析法等。

㈧ 化學發光免疫分析法有哪三類

1、直接化學發光,標記物為吖啶酯(雅培)或者ABEI(新產業)

2、酶促化學發光,標記物為鹼性磷酸酶(廈門波生)或者辣根過氧化物酶(強生)

3、電化學發光,標記物為三聯吡啶釕(羅氏)


註:括弧內為代表廠家。

㈨ 目前化學發光檢測方法有幾種是不是有板式化學發光檢測,磁微粒化學發光檢測法等幾種方法

不知道你是要問哪方面,是方法學?還是運行方式?還是說抗原抗體的包被方式?
方法學里邊分為輝光和閃光,輝光就是發光的時間長,無需原位進樣,常見的就是鹼性磷酸酶和魯米諾方法學。閃光就是發光的時間短,需原位進樣,常見的就是吖啶酯方法學。還有一種是電化學發光和熒光學。
運行方式有板式和單管式。板式的需要集齊樣本再做實驗,單管式的是樣本隨來隨做。
抗原抗體的包被方式常見的有有磁微粒和固相包被

㈩ 化學發光免疫分析法有哪三類

1、直接化學發光,標記物為吖啶酯(雅培)或者ABEI(新產業)
2、酶促化學發光,標記物為鹼性磷酸酶(廈門波生)或者辣根過氧化物酶(強生)
3、電化學發光,標記物為三聯吡啶釕(羅氏)
括弧內為代表廠家

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