分析化學怎麼測熒光

⑴ 熒光分光光度計測試步驟是怎麼樣的

測試步驟：
(一)樣品准備

1.液體樣品根據用戶提供的技術指標，檢查濃度范圍是否合適，如果需要稀釋，則要考慮所需溶劑類型和稀釋倍數。

2.固體樣品均勻粉末、片狀或具有光滑平面的塊狀樣品，均可直接測定。

(二)操作步驟

1.開機：接通電源，打開主機開關，點燃(打開)光源後，根據說明書要求啟動計算機。

2.檢測前准備：參照儀器說明書，在20天內至少進行一次激發校準和發射校準，檢測前儀器應預熱。

3.工作條件的選擇：環境溫度應在20℃±5℃;相對濕度不大於70%;電源穩定，無磁場、電場干擾。根據樣品的特性及熒光強度，選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應時間等)。

4.基本測定

(1)熒光激發光譜測定

設置儀器參數，掃描發射波長，找到maxλem，以此為發射波長，記錄發射強度作為激發波長的函數，便得到激發光譜。

(2)熒光發射光譜測定

設置儀器參數，掃描激發波長，找到maxλex，以此為激發波長，記錄發射強度與發射波長間的函數關系，便得到熒光發射光譜。

(3)差譜測定

設置儀器參數，選擇合適的工作方式，測定背景溶液的發射光譜並儲存起來，在一定的工作方式下，掃描樣品溶液的發射波長，得到當時的光度值和儲存的背景值之間的差示值，即差譜。

(4)峰面積積分

選擇適當的工作方式，對樣品溶液進行積分操作，即得到峰面積積分。

(5)熒光強度

選擇合適的測量參數，設置λex、λem，採用定點讀數或掃描方式，即可測得所選波長處的熒光強度。

(6)定量測定

配製一系列已知濃度的標准溶液，在一定的測定條件下，設置λex、λem，按照由稀至濃的次序，測定標准溶液的熒光強度，繪制熒光強度—濃度的工作曲線，不改變儀器參數測定未知溶液的熒光強度，由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。

(三)分析結果的表述

1.熒光激發光譜、發射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出。

2.峰面積積分、熒光強度由儀器控制電腦計算顯示。

3.定量測試：在相同的測定條件下，測定一系列已知濃度的標准溶液的熒光強度，繪制出熒光強度-濃度的工作曲線。濃度未知的溶液的熒光強度測定後，由工作曲線求出該溶液的濃度。

(四)注意事項

1.在實驗開始前，應提前打開儀器預熱，並配製好所需的溶液，對於已經配製好的溶液，在不用時放在4℃冰箱中保存，放置時間超過一星期的溶液要重新配製。

2.實驗所用的樣品池是四面透光的石英池，拿取的時候用手指掐住池體的上角部，不能接觸到四個面，清洗樣品池後應用擦鏡紙對其四個面進行輕輕擦拭。

3.在測試樣品時，注意熒光強度范圍的設定不要太高，以免測得的熒光強度超過儀器的測定上限。

4.實驗結束後，要及時的清理檯面，處理廢液，清洗和放置好樣品池，將下次要用的溶液放回冰箱，並且按規定登記實驗記錄，養成良好的實驗習慣。

⑵ 熒光分光光度計如何測熒光強度怎麼測

熒光光度計的兩個單色器是不同的，一個叫做激發單色器，一個叫做發射單色器。在光路中是這樣的，光源燈發出的光進入激發單色器中，然後進入樣品池，激發樣品中的物質發射出熒光，然後在樣品池中呈90°角的方向，發射出的熒光進入發射單色器，然後再進入接收器得到熒光強度。激發單色器是用來激發物質的熒光，在某個波長，被測物質有最大的吸收，和可見分光光度計類似。發射單色器是熒光在某個波長上熒光強度是最大的。一般被測物質的發射波長比激發波長大。

⑶ 熒光物含量測定方法的定量測定

熒光分析法的定量測定方法較多，可分為直接測定法和間接測定法兩類。
a.直接測定法：
利用熒光分析法對被分析物質進行濃度測定，最簡單的便是直接測定法。某些物質只要本身能發熒光，只須將含這類物質的樣品作適當的前處理或分離除去干擾物質，即可通過測量它的熒光強度來測定其濃度。具體方法有兩種。
1. 直接比較法：配製標准溶液的熒光強度Fx，已知標准溶液的濃度Cs，便可求得樣品中待測熒光物質的含量。
如果空白溶液的熒光強度調不到零，則必須從Fs和Fx值中扣除空白溶液的熒光強度F0，然後進行計算。
2. 標准曲線法：將已知含量的標准品經過和樣品同樣處理後，配成一系列標准溶液，測定其熒光強度，以熒光強度對熒光物質含量繪制標准曲線。再測定樣品溶液的熒光強度，由標准曲線便可求出樣品中待測熒光物質的含量。
為了使各次所繪制的標准曲線能重合一致，每次應以同一標准溶液對儀器進行校正。如果該溶液在紫外光照射下不夠穩定，則必須改用另一種穩定而熒光峰相近的標准溶液來進行校正。例如，測定維生素B1時，可用硫酸奎寧溶液作為基準校正儀器。
b、間接測定法：
有許多物質，它們本身不能發熒光，或者熒光量子產率很低，僅能顯現非常微弱的熒光，無法直接測定，這時可採用間接測定方法。
間接測定方法有以下幾種：
1.化學轉化法：通過化學反應將非熒光物質變為適合於測定的熒光物質。例如金屬與螯合劑反應生成具有熒光的螯合物。有機化合物可通過光化學反應、氧化還原、偶聯、縮合反等應，使它們轉化為熒光物質。
2.熒光猝滅法：這種方法是利用本身不發熒光的被分析物質能使某種熒光化合物的熒光猝滅的性質，通過測量熒光化合物熒光強度的下降，間接地測定該物質的濃度。
3.敏化發光法：對於很低濃度的分析物質，如果採用一般的熒s光測定方法，其熒光信號太弱而無法檢測，可使用一種物質（敏化劑）以吸收激發光，然後將激發光能傳遞給發熒光的分析物質，從而提高被分析物質測定的靈敏度。

⑷ 樣品分析的X熒光方法

(一)基本原理

如果樣品中元素的特徵X射線峰計數率與被激發元素的含量成直線關系，則採用已知含量的標准樣品進行比較方法，很容易求得樣品中元素的含量為

放射性勘探方法

式中：I_i為樣品中待分析元素A的特徵X射線譜峰的計數率；I_標為與樣品處於相同幾何條件下測得的標准標品中元素i的X射線譜峰計數率；C_標為標准樣品中元素i的質量分數，%。

如果樣品與標准樣品兩者之一的特徵X射線峰計數率與元素含量是非線性關系，那麼利用上式得到的含量，就受到很大歪曲，甚至是極端錯誤的。

為了保證分析線性關系及分析的精度，一般可採用以下方法。

1.飽和厚度樣品法

對樣品中待測元素受激發產生的特徵X射線，當樣品厚度增加，而特徵X射線強度不再增加，則認為樣品達到了飽和厚度。

由方程(4-8)式，假定d是無限厚度，於是方程可寫成

放射性勘探方法

由此可見上式中μ_m(E_x)+μ_m(i)表示在厚樣品情況下非線性影響是始終存在的。因此，有人認為不作任何校正的厚樣品X射線譜分析只能是近似或半定量的。

如果樣品是多成分的復雜樣品，那麼吸收系數將變得更加復雜。其總質量吸收系數等於各成分質量吸收系數和質量分數乘積之和，即

放射性勘探方法

代入(4-38)式，可得

放射性勘探方法

岩石、礦石樣品都是多成分樣品，需要考慮到每個元素與熒光輻射和初始輻射光子的相互作用，產生吸收或激發(包括二次激發或三次激發)。測得的待測元素的熒光計數是受到吸收或增強效應的影響之後的結果，這樣就會使I_i與C_i之間原來的正比關系受到了歪曲。

在這種情況下，只有標准樣品成分與分析樣品成分一致的時候，用公式(4-38)計算的含量才是正確的。這是很有局限性的，也是很重要的。特別對輕便X射線譜分析儀的應用，包括現場測量和樣品分析，在大多數情況下就是這樣取得的分析結果的。

2.薄樣品

如ρd很小，也就是[μ_m(E_x)+μ_m(i)]ρ·d≤1，於是(4-8)式指數可取近似，即

exp{-[μ_m(E_x)+μ_m(i)]ρ·d}≈1-[μ_m(E_x)+μ_m(i)]

由方程(4-8)式代入替換後可得

放射性勘探方法

式中k=ηI₀(E_x)；M_i=ρdC_i為單位面積上元素i的質量，常用mg/cm²表示。

(4-41)式表明，只要樣品薄到[μ_m(E_x)+μ_m(i)]ρ·d≤1時，測得的樣品中待測元素的熒光計數I_i與單位面積上元素質量成線性關素。也就是說，無論是初始射線或熒光射線，都不被吸收，實際上消除了基體效應。也可以認為，薄樣品中每一個原子發射的特徵X射線與另一個原子無關，因此沒有吸收或增強效應。

(二)樣品測量方法

1.樣品制備

厚樣品制備比較簡單，對於固體的岩礦樣品、土壤樣品等，一般粉碎到200目以下，混合均勻裝入底上蒙有一層6～10μm聚酯膜的樣品盒中壓平(應為飽和層厚度)，即可測量。或者加入適量黏合劑，在壓片機下壓成圓片。如果是液體樣品，可以直接裝入樣品杯中進行測量。

薄樣品制備復雜得多，提出的製作方法也很多，主要可分為濕式和乾式兩類，現簡單介紹幾種樣品制備方法。

1)將礦樣磨成小於200目的粉末，放入含有5/105火棉膠的乙醚(85%)和乙醇(15%)混合溶液中，倒入拉平的聚酯鍍鋁薄膜上，並放在已仔細調平的水平台上，等乙醚揮發後即成。

2)由2份聚甲基丙烯酸甲酯，3份聚丁烯丙烯甲酯，7.5份甲苯和少量添加劑混合製成一種聚合溶液，可以保存多年待用。使用時一般每次取25mL，加入粉末樣品(大約1.5～2.5g)，在0.5L左右的金屬容器中同時放入1/8in直徑的鋼球蓋好，放在振動器上振動20min，使其均勻分散，然後在聚酯膜上製成薄約50μm厚層。再烘乾1min即成小於25μm的薄膜；再製成1/4in直徑圓片進行測量；要注意的是樣品與標准樣品均要仔細稱量。

3)溶解成膜方法。將礦粉先用HCl溶解成溶液，再加入聚乙烯醇混合後取該溶液1mL，放在直徑47mm的濾紙上，安裝在一個聚四氟乙烯片上，用紅外燈乾燥後測量。

4)使粉末樣品沉積在微孔濾紙上製成薄樣品。這個方法是先製成一個如圖4-11所示的薄樣品收集器，將樣品研磨到325目放入真空瓶，同時在過濾器上放置一個直徑2.5cm的0.8μm微孔濾紙，蓋好橡皮蓋，開動真空泵，進入的空氣由快速活塞控制，成脈沖式進氣，吹動樣品成粉塵，使之在濾紙上沉積，即可獲得需要的薄樣品。

圖4-11 粉末薄樣品收集器

2.樣品的測量方法

使用高能量解析度的半導體探測器多道X射線能譜儀分析樣品，主要測量樣品中受激發元素發射的X射線特徵能量峰，與標准樣品比較，按(4-37)式計算元素含量。

3.儀器刻度

多道X射線能量譜的刻度與γ能譜儀的刻度要求是一樣的，包括能量刻度和效率刻度。

能量刻度，主要是檢查儀器的線性程度，線性好，定性確定元素比較准確。X射線多道譜儀能量刻度的單能輻射源比較容易得到。因為只要選用低能γ放射源激發純元素的特徵X射線，即可用來刻度儀器，容易做到能量峰分布均勻。

效率刻度是能量色散定量准確分析的基礎。與所有γ射線能譜分析一樣，必須受到重視，長期以來只重視增強、吸收基體效應校正，對效率刻度重視不夠。

4.標准樣品與標准工作曲線

標准樣品是用來與待測樣品進行比較分析用的已知元素含量樣品，(4-37)式表明了這個關系，無論是薄樣品或者厚樣品都是如此。(4-41)式表明薄樣品熒光峰計數與樣品中待測元素含量呈線性關系，與樣品中物質成分無關。因此，一個標准樣品可以適用於任何成分的待測樣品，只要測量幾何條件一致、稱量准確、沒有其他譜線干擾，就可以獲得滿意的分析結果。

標准工作曲線的製作是：選一套含量由低到高的標准樣品，其元素組成與待測樣品相近似，在與樣品測量相同的條件下進行測量；獲得標准樣品含量與X熒光計數率的校正曲線，由此曲線就可以根據相同條件下的樣品測量的熒光計數率，在標准曲線上求得相應的待測元素含量。

⑸ 熒光分光光度計測試熒光強度與哪些條件有關

待測物質方面
1.含共軛π鍵體系，體系越大熒光越強
2.剛性平面構型，剛性平面越大，熒光強度越大
3.取代基的影響，給電子取代基加強，吸電子取代基減弱
4.最低電子激發單重態性質，π-π*躍遷比n-π*躍遷產生更強的熒光
環境方面
1.溶劑，溶劑弛豫造成吸收發射間的能極差，溶劑的極性增大會使熒光光譜發生紅移，氫鍵也有一定影響
2.介質酸鹼性，視待測物的酸鹼性與結構而定
3.介質的溫度和黏度，溫度越高強度越小，黏度越大強度越大
4.有序介質（如表面活性劑）的影響，有序介質的存在會使強度增大
經供參考

⑹ 電致發光光譜原理及用什麼儀器檢測

電致化學發光檢測儀應用領域: 葯物、氨基酸、多肽、蛋白質及核酸檢測分析
蛋白質與葯物、核酸相互作用研究。
熒光分光光度計能測定：FS-2型FS-2型熒光分光光度計

熒光是熒光分子受到較短波長光的激發而發出較長波長熒光的一種現象。熒光激發光譜反映了激發波長和熒光強度的關系；熒光發射光譜反映了發射波長和熒光強度的關系。
相對於其他光學檢測器，熒光檢測器具有如下三個優點：高靈敏度，快速，安全。安全是指在測量過程中樣品不會受到影響或者破壞，同時也沒有危險的副產物生成。
靈敏度是一個重要的技術指標，因為熒光的強度和被測物質的濃度成一定的比例而細胞中離子濃度的很小的改變都會產生重大的生理影響。因此吸光光度法能夠檢測到幾個十分之一微摩爾的物質而熒光光度法可以准確測量吸光光度法百萬分之一(皮摩爾或者飛摩爾)的物質，數量級可達到10-18摩爾。利用熒光技術，可以測量物質濃度的快速變化，可以測量皮秒內的熒光強度的變化。
因為熒光技術是一種安全的技術，所以熒光不會對樣品造成影響。激發光要求產生熒光強度要低並且要減少光源的影響並且生物物質可以在不受外來影響的自然生理條件下測量。
FluoroMate FS-2的構造
FluoroMate FS-2是由光源，激發和發射單色器和檢測器，樣品測量部分。150W的氙燈提供200-900NM的光源。光在樣品前部被分光器分成兩部分，一束光照射樣品後通過光電二極體來檢測激發能量。發射光在通過單色器後被PMT檢測器檢測，為了放大信號，我們使用了光電倍增管（PMT）檢測器。
應用：
FluoroMate FS-2是高性能和高精確度的儀器，可以廣泛應用到如下領域：
1． 生命科學
基礎生物反應研究，低體積樣品的測量，偏振現象和各向異性的研究
2． 醫葯和醫學
痕量水平抗生素的測量，核酸，蛋白和病毒的結構分析
3． 分析化學
熒光物質的鑒別和測量，溶劑效應，光子產率和壽命，化學反應
4． 環境領域
空氣，水，土壤中的有機和無機氧化物的鑒別和測量
5． 工業
食品中的營養物質量；油漆，聚合物，光學增白劑和熒光塗料；原油質量
6． 光化學
激發狀態的表徵，膠束結構，膠團的反應動力學。
技術參數
1.光源: 150W 氙燈
2.波長范圍: 200 nm-900nm
3.靈敏度：S/N>500(峰對峰)
4.光柵: 1200grooves/250 nm blazing
5.波長掃描速度: 最大5000 nm/min
6.波長驅動器速度: 10,000 nm/min
7.波長精確度:+ 2 nm
8.波長重復性:+ 2 nm
9.狹縫寬度: 1，2，5，10，20 nm
10.尺寸: 518mm(W)×604mm(D)×272mm(H)
11.重量: 43.7kg
12.電源: 100~132V 50/60 Hz或者180~240V 50/60 Hz（可選）
http://www.chem17.com/procts/show/562839.asp

⑺ 熒光現象怎麼檢測和收集

現在也可以用單光子雪崩二極體（SPAD）去做感測器。 然後通過時間相關單光子計數（TCSPC）來成像。 這種方法可以去測量熒光強度的同時更重要的是可以去檢測熒光的壽命也就是熒光壽命成像（FLMI）。熒光團受激發後會以指數衰減的方式發射出熒光。從最強點衰減到將近37%（好像是1/e）光強需要的時間就是他的熒光壽命，這個熒光壽命可以用來檢測細胞或者蛋白質的內環境 像ph值，離子濃度啊之類的。SPAD可以做到很小並做成陣列。這樣的話就不一定像PMT那樣掃描了，厲害的話可以做成實時成像。現在荷蘭那邊和愛丁堡那邊應該有做到512x512水平的SPAD陣列晶元。

⑻ 如何測定一種有機化合物是否具有熒光性質

如果化合物有紫外吸收，應該有熒光性質。
常溫物質經紫外線或X射線照射，吸收光能後進入激發態，並且立即退激發並發出比入射光的的波長長的出射光即熒光。。
熒光光譜有兩個主要優點:第一是靈敏度高.由於熒光輻射的波長比激發光波長長,因此測量到的熒光頻率與入射光的頻率不同.另外,由於熒光光譜是發射光譜,可以在與入射光成直角的方向上檢測,這樣,熒光不受來自激發光的本底的干擾,靈敏度大大高於紫外-可見吸收光譜,測量用的樣品量很少,且測量方法簡便.第二,熒光光譜能提供較多的信息,例如激發譜,發射譜,峰位,峰強度,熒光壽命。

⑼ 熒光檢測方法

熒光檢測是一種自然發光反應，通過熒光素酶與 ATP進行反應，可檢測人體細胞、細菌、黴菌、食物殘渣，在15秒鍾內得到反應結果。光照度通過專用設備進行測量，並以數字形式予以表示，在1975年首先被應用到食品工業中，在1985年在化妝品製造業中得到應用。
熒光定量：採用國際主流的熒光定量PCR技術，迅速提升技術水平。
結果穩定：檢測結果CV值與進口全自動PCR儀接近，具有自檢功能，避免錯誤數據的輸出。
封閉操作：全部檢測過程均為閉管操作，於反應管處檢測熒光，有效防止污染，解決PCR技術中最棘手之難題。
准確定量：滿足臨床對量化的需求，定量盪圍寬，可涵蓋大部分病原微生物，自動曲線擬合。
靈敏度高：利用光譜信號靈敏性的優勢，有效提高檢測靈敏度。
安全：全程無毒檢測。
操作簡便：省去後處理的煩瑣過程。
直接列印：直接列印結果，無須記錄大量數據。
升級版：FS1000有與電腦連接的數傳輸口，可以連接電腦，根據用戶需要提供先進分析軟體，全面分析實驗數據。（電腦和列印機選配件）
故障率低：維護非常簡單。
節約資源：可利用現用PCR擴增儀，最大限度節約資源。