疫組織化學染色怎麼做

⑴ 免疫組化及特殊染色 是啥意思

其為製成病理切片，將病變組織包埋在石蠟塊里，用切片機切成薄片，進行染色。

病理切片是用組織病理學方法製作的一定大小的病理切片。病理組織包埋石蠟塊，切片薄，蘇木精－伊紅（H－E）染色，在顯微鏡下進一步檢查病變。觀察病變的發生、發展，最後作出病理診斷。

部分病變組織或器官通過各種化學葯品和埋葬方法進行處理，使其固定和硬化。在切片機上切成薄片，粘附於玻片上，染色後置於顯微鏡下觀察病理變化，進行病理診斷，為臨床診斷和治療提供幫助。

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病理切片的相關內容：

1、根據各器官的組織結構確定切片方向。垂直或橫向切割通常是顯示組織形態的關鍵，如長管狀器官。

2、根據解剖部位準確取樣。病理標本應根據病理部位和性質的不同取樣。

3、用鋒利的刀剪開紙巾，不要來回剪文件。不要把組織夾得太緊，以免使組織、細胞因擠壓而變形。

⑵ 酶免疫細胞如何進行化學染色

免疫細胞化學染色是將血液、骨髓液、漿膜腔積液等等各種體液組織製成的塗片和骨髓等組織的切片經各種單克隆抗體的標定和常用的過氧化物酶或鹼性磷酸酶顯色後對白血病細胞直接鏡檢，以確定細胞類型。
免疫組織化學染色方法繁多，可根據標記物的不同分為：免疫酶細胞化學染色、免疫熒光細胞化學染色、免疫金銀染色技術以及親合免疫組織化學染色技術等。目前血液系統疾病檢查常用免疫細胞化學染色方法有三種：過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法、鹼性磷酸酶-抗鹼性磷酸酶（APAAP）法和親和素-生物素-過氧化物酶復合物（ABC-AP）法。PAP法抗原、抗體反應及酶標原理與APAAP法完全相同，都屬於免疫組織化學反應，只是所標記的酶不同。PAP法酶化學反應原理與ABC-AP法完全相同，但ABC-AP法為親合免疫組織化學反應。在染色步驟及方法上PAP法和ABC-AP法完全相同。
免疫細胞化學能夠識別抗原蛋白質一級結構中氨基酸的差別，從而對細胞結構、功能及細胞代謝等進行綜合分析，確定細胞的類型、來源及細胞的分化階段。應用骨髓切片免疫組織化學技術可以對骨髓細胞進行原位觀察，通過對細胞特異性抗原的定性、定位和定量分析，了解骨髓組織和細胞的結構和變化，這對血液系統疾病尤其是血液系統腫瘤的診斷、鑒別診斷，以及血液腫瘤的分類、分型和預後的判斷提供了有利的研究手段。

⑶ 免疫組化 如何復染（免疫組化，蘇木精，鹽酸，石

（一）、儀器設備

1）18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫用微波爐；2）水浴鍋

（二）、試劑

1）PBS緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L.

2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（CB，pH6.0，1000ml）：檸檬酸三鈉 3g，檸檬酸 0.4g.

3）0.5mol/L EDTA緩沖液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH調至pH8.0，加水至1000ml.

4）1mol/L的TBS緩沖液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris鹼，用1N的HCl調至pH8.0，加水至1000ml.

5）酶消化液： a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2（pH7.8） 配製。 b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配製。

6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配製。

7）封裱劑：

a、甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩沖液（pH9.0～9.5）等量混合；

b、油和TBS（或PBS）配製。

8）TBS/PBS pH9.0～9.5，適用於熒光顯微鏡標本；pH7.0～7.4適合於光學顯微鏡標本。

（三）、操作流程

1、脫蠟和水化

脫蠟前，應將組織晶元在室溫中放置60分鍾或60℃恆溫箱中烘烤20分鍾。

1）組織晶元置於二甲苯中浸泡10分鍾，更換二甲苯後再浸泡10分鍾；

2）無水乙醇中浸泡5分鍾；

3）95%乙醇中浸泡5分鍾；

4）70%乙醇中浸泡5分鍾；

2、抗原修復

用於福爾馬林固定的石蠟包埋組織晶元。

1）抗原熱修復

（1）高壓熱修復 在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0）。蓋上不銹鋼高壓鍋的蓋子，但不進行鎖定。將玻片置於金屬染色架上，緩慢加壓，使玻片在緩沖液中浸泡5分鍾，然後將蓋子鎖定，小閥門將會升起來。10分鍾後，去除熱源，置入涼水中，當小閥門沉下去後打開蓋子。本方法適用於較難檢測或核抗原的抗原修復。

（2）煮沸熱修復 電爐或者水浴鍋加熱0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0）至95℃左右，放入組織晶元加熱10~15分鍾。

（3）微波熱修復 在微波爐里加熱0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0）至沸騰後將組織晶元放入，斷電，間隔5~10分鍾，反復1-2次。適用的抗原有：AR，Bax，Bcl-2，C-fos，X-jun，C-kit，C-myc，E-cadherin，Chromogranin A，Cyclin，ER，Heat shock protein，HPV，Ki-67，MDMZ，p53，p34，p16，p15，P-glycoprotein，PKC，PR，PCNA，ras，Rb，TopoismeraseⅡ等。

2）酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前預熱至37℃，切片也預熱至37℃，消化時間約為5~30分鍾；胃蛋白酶消化37℃時間為30分鍾。適用於被固定遮避的抗原，其中有：Collagen，Complement，Cytokeratin，C-erB-2，GFAP，LCA，LN等。

3、免疫組織化學染色

SP法

1）脫蠟、水化；

2）PBS洗2～3次各5分鍾；

3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室溫靜置10分鍾；

4）PBS洗2～3次各5分鍾； 5）抗原修復；

6）PBS洗2～3次各5分鍾；

7）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鍾。甩去多餘液體。

8）滴加Ⅰ抗50μl，室溫靜置1小時或者4℃過夜或者37℃1小時。

9）4℃過夜後需在37℃復溫45分鍾。

10）PBS洗3次各5分鍾；

11）滴加Ⅱ抗40～50μl，室溫靜置，或37℃1小時；

12）II抗中可加入0.05%的tween-20.

13）PBS洗3次各5分鍾；

14）DAB顯色5～10分鍾，在顯微鏡下掌握染色程度；

15）PBS或自來水沖洗10分鍾；

16）蘇木精復染2分鍾，鹽酸酒精分化；

17）自來水沖洗10～15分鍾；

18）脫水、透明、封片、鏡檢。

SABC法

1）脫蠟、水化。

2）PBS洗兩次各5分鍾。

3）用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2，室溫封閉5～10分鍾，蒸餾水洗3次。

4）抗原修復。

5）PBS洗5分鍾。

6）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鍾。甩去多餘液體。

7）滴加Ⅰ抗，室溫1小時或者4℃過夜或者37℃1小時（4℃過夜後在37℃復溫45分鍾）。

8）PBS洗三次每次2分鍾。

9）滴加生物素化二抗，20℃～37℃20分鍾。

10）PBC洗3次每次2分鍾。

11）滴加試劑SABC，20℃～37℃20分鍾。

12）PBS洗4次每次5分鍾。

13）DAB顯色：DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色（鏡下掌握顯色程度）。

14）蒸餾水洗。蘇木素復染2分鍾、鹽酸酒精分化。

15）脫水、透明、封片、鏡檢。

⑷ 常用免疫組織化學染色方法有哪些

常用免疫組織化學染色方法, LSAB法.(SP法)(Labelled streptavidim biotln) 1.切片脫蠟至水. 2.0.3%H2O2甲醇處理切片10-20分鍾. 3.水洗. 4.抗原修復. 5.PBS洗3次,1分鍾/次. 6.加入血清孵育10分鍾. 7.摔去血清,加入一抗孵育30-60分鍾. 8.PBS洗3次,每次2分鍾.加入二抗,孵育20分鍾. 9.PBS洗3次,每次2分鍾. 10.加入SP復合物孵育20-30分鍾. 11.PBS洗3次,每次2分鍾. 12.DAB-H2O2孵育5-10分鍾. 13.PBS洗,水洗. 14.Harris蘇木素染核5-10分鍾. 15.水洗,分化 ,藍化,脫水,透明並封固.

⑸ 酶免疫細胞如何進行化學染色

免疫細胞化學染色是將血液、骨髓液、漿膜腔積液等等各種體液組織製成的塗片和骨髓等組織的切片經各種單克隆抗體的標定和常用的過氧化物酶或鹼性磷酸酶顯色後對白血病細胞直接鏡檢，以確定細胞類型。
免疫組織化學染色方法繁多，可根據標記物的不同分為：免疫酶細胞化學染色、免疫熒光細胞化學染色、免疫金銀染色技術以及親合免疫組織化學染色技術等。目前血液系統疾病檢查常用免疫細胞化學染色方法有三種：過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法、鹼性磷酸酶-抗鹼性磷酸酶（APAAP）法和親和素-生物素-過氧化物酶復合物（ABC-AP）法。PAP法抗原、抗體反應及酶標原理與APAAP法完全相同，都屬於免疫組織化學反應，只是所標記的酶不同。PAP法酶化學反應原理與ABC-AP法完全相同，但ABC-AP法為親合免疫組織化學反應。在染色步驟及方法上PAP法和ABC-AP法完全相同。
免疫細胞化學能夠識別抗原蛋白質一級結構中氨基酸的差別，從而對細胞結構、功能及細胞代謝等進行綜合分析，確定細胞的類型、來源及細胞的分化階段。應用骨髓切片免疫組織化學技術可以對骨髓細胞進行原位觀察，通過對細胞特異性抗原的定性、定位和定量分析，了解骨髓組織和細胞的結構和變化，這對血液系統疾病尤其是血液系統腫瘤的診斷、鑒別診斷，以及血液腫瘤的分類、分型和預後的判斷提供了有利的研究手段。

⑹ 什麼是免疫組化染色，它的原理和步驟是什麼

是病理學診斷方法，尤其是免疫組化在腫瘤診斷和鑒別診斷中的實用價值受到了普遍的認可。
免疫組織化學的臨床應用主要包括以下幾方面：
(1)惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷；
(2)確定轉移性惡性腫瘤的原發部位；
(3)對某類腫瘤進行進一步的病理分型；
（4）軟組織腫瘤的治療一般需根據正確的組織學分類，因其種類多、組織形態相像，有時難以區分其組織來源，應用多種標志進行免疫組化研究對軟組織腫瘤的診斷是不可缺少的；
（5）發現微小轉移灶，有助於臨床治療方案的確定，包括手術范圍的確定。
（6）為臨床提供治療方案的選擇。

⑺ 免疫組織化學染色法的介紹

免疫組織化學染色法是指在抗體上結合螢光或可呈色的化學物質，利用免疫學原理中抗原和抗體間專一性的結合反應，檢測細胞或組織中是否有目標抗原的存在，此方式不只可以用來測知抗原的表現量也可觀察抗原所表現的位置。只要是能夠讓抗體結合的物質，也就是具有抗原性的物質包括蛋白質、核酸、多糖、病原體等都可偵測。免疫組織化學的優勢在於專一性、靈敏度、簡便快速以及成本低廉，所以廣為醫院採用，通常是藉由特定的腫瘤標記來篩選癌症。免疫組織化學染色法對基礎研究及預防和診療上都是相當重要的一個方法。