① 用薄層色譜法鑒別異黃酮時,一般展開劑用什麼
摘 要 目的 探討鑒別廣金錢草黃酮和生物鹼成分的方法。方法 應用薄層色譜法鑒別廣金錢草黃酮和生物鹼成分，黃酮採用ρ=3%AlCl3（乙醇）溶液顯色，生物鹼採用稀碘化鉍鉀試液顯色。結果與結論 以薄層色譜鑒別廣金錢草黃酮和生物鹼成分，不同於一般化學鑒別（試管法），其分離效果較好，專屬性強，具有實際參考價值。 關鍵詞 廣金錢草；薄層色譜鑒別；黃酮；生物鹼廣金錢草是豆科植物廣金錢草Desmodium styracifolium (Osb.)Merr. 的乾燥地上部分，為較常用中葯［1，2］。中國葯典2000年版收載有「清熱除濕，利尿通淋」的作用［1］。對廣金錢草的鑒別，文獻主要介紹性狀鑒別、顯微鑒別及一般的化學鑒別（試管法） ［1，3］。本文以薄層色譜法鑒別廣金錢草中的黃酮和生物鹼成分，報道如下。1 儀器及試劑1.1 儀器 20 cm×10 cm雙槽展開缸。1.2 試劑 薄層層析硅膠G(化學純)，GF254(化學純)，青島海洋化工廠產品。 層析氧化鋁（鹼性），100～200目，上海社園精細有限公司產品。羧甲基纖維素鈉，上海化學試劑分裝，黏度2%水溶液為300～800 mPa/s。其餘試劑均為分析純。2 供試品及對照葯材2.1 廣金錢草葯材購自采芝林葯店北京路分店，經廣東葯學院葯用植物與生葯學教研室鑒定為豆科廣金錢草Desmodium styracifolium (Osb.)Merr.（中國葯典2000年版一部）的全草。2.2 廣金錢草對照葯材由廣東省葯品檢驗所中葯室提供。3 廣金錢草黃酮薄層色譜鑒別［2］取廣金錢草粉末1 g，置圓底瓶中，加甲醇20 mL，加熱迴流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，濾過，濾液用醋酸乙酯提取2次，每次10 mL，合並醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取廣金錢草對照葯材1 g，同法製成對照葯材溶液。照薄層色譜法（中國葯典2000版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點於同一以ρ=0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以ψ(醋酸乙酯∶甲酸∶水)=（8∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以ρ=3%AlCl3（乙醇）溶液［4,5］， 105 ℃加熱約5 min，置紫外光燈（365 nm）下檢視［6］，供試品色譜中，在與對照葯材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。見圖1。4 廣金錢草生物鹼薄層色譜鑒別取廣金錢草粉末1 g，置圓底瓶中，加濃氨溶液5 mL［6］，密塞，搖勻，放置30 min，加氯仿50 mL，加熱迴流2 h，取出放冷，分取氯仿液，葯渣再用氯仿適量洗滌，合並氯仿液，用無水硫酸鈉脫水，置水浴上蒸至約1 mL，加於鹼性氧化鋁柱（5 g，直徑15 mm）上，用ψ(氯仿∶無水乙醇)=（1∶1）混合溶液50 mL洗脫［6］，收集洗脫液，置水浴上蒸至約1 mL，作為供試品溶液。另取廣金錢草對照葯材1 g，同法製成對照葯材溶液。照薄層色譜法（中國葯典2000版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各4 μL，分別點於同一以ρ=3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，以ψ(苯∶丙酮∶甲醇)=（8∶3∶0.5）為展開劑，另槽用等量的濃氨溶液預平衡15 min，展開，取出，晾乾。置254 nm下檢視，供試品色譜中，在與對照葯材色譜相應的位置上，顯相同的暗斑點；噴以稀碘化鉍鉀試液［6,8］，供試品色譜中，在與對照葯材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
② 大豆異黃酮產品怎麼辨別正品
我買保健品都會要具備這些我才會購買的：1、選擇名牌或者品牌產品2、選擇生產經營多年的產品3、選擇產品標簽上有明確的大豆異黃酮含量的產品4、選擇有防偽標識的產品5、選擇非轉基因，天然原料提取的產品6、選擇專業公司生產的產品。有了這些條件我才會放心。大豆異黃酮我一直是選購的紫一家的，效果真心不錯，主要是現在活動期間，比我之前購買的還要實惠。好有送禮品、
③ 檢識黃酮類化合物的常用化學方法有哪些
黃酮類化合物（flavonoids）是一類存在於自然界的、具有2-苯基色原酮（flavone）結構的化合物。它們分子中有一個酮式羰基，第一位上的氧原子具鹼性，能與強酸成鹽，其羥基衍生物多具黃色，故又稱黃鹼素或黃酮。黃酮類化合物在植物體中通常與糖結合成苷類，小部分以游離態（苷元）的形式存在。絕大多數植物體內都含有黃酮類化合物，它在植物的生長、發育、開花、結果以及抗菌防病等方面起著重要的作用。
鹽酸-鎂粉還原反應
取葯材粉末少許與試管中，用乙醇或甲醇數毫升溫浸提取，取提取液加鎂粉少許振搖，滴加幾滴濃鹽酸，1-2min內即出現顏色。大多黃酮醇、二氫黃酮及二氫黃酮醇類顯紅-紫紅色，黃酮類顯橙色，異黃酮及查爾酮類無變化。如蘆丁的鹽酸鎂粉反應中溶液由黃色變紅色。
其他還原反應還有：鹽酸-鋅粉反應，黃酮、黃酮醇類常不顯色，只有二氫黃酮醇類可被鋅粉還原呈深紅色；鈉-汞齊反應，黃酮類成分可產生黃、橙、紅等色；四氫硼鈉（鉀）反應，僅二氫黃酮醇類可被四氫硼鈉還原呈紅色，其他黃酮類不反應。
金屬鹽類試劑絡合反應
黃酮類成分和鋁鹽、鎂鹽、鉛鹽、鋯鹽等試劑反應，生成有色的絡合物，可供某些類型黃酮的鑒別。產生絡合作用的條件是黃酮類成分必須具備下列條件之一，如5-羥基、3-羥基或鄰二羥基。根據有色絡合物的最大吸收波長，可進行定量測定。常用的試劑有三氯化鋁、醋酸鉛、醋酸鎂與二氯氧化鋯等試劑。
④ 如何用HNMR,譜區別黃酮、異黃酮及二氫黃酮c環上的質子
若是鑒別的話：
1.紙色譜（PC）：適用於分離各種天然黃酮類化合物及其苷類混合物。混合物的鑒定常採用雙向色譜法。以黃酮苷類來說，一般第一向展開採用某種醇性溶劑，如正丁醇-醋酸-水（4：1：5，上層）等，主要是根據分配作用原理進行分離。第二向展開溶劑則用水或其他含水溶液，如2～6%醋酸等，主要是根據吸附作用原理進行分離。
黃酮類化合物苷元中，平面性分子如黃酮、黃酮醇、查耳酮等，用含水溶劑如3%～5%HOAC展開時，幾乎停留在原點不動（Rf＜0.02）；而非平面性分子如二氫黃酮、二氫黃酮醇、二氫查耳酮等，因親水性較強，Rf 值較大（ 0.10～0.30）。黃酮類化合物分子中羥基苷化後，極性隨之增大，在醇性展開劑中Rf 值相應降低，同一類型苷元，Rf值依次為：苷元＞單糖苷＞雙糖苷。但在用水或2～8%醋酸、3%氯化鈉水溶液或1%鹽酸展開時，則苷元幾乎停留在原點不動，Rf 值大小順序為：苷元＜單糖苷＜雙糖苷。
2.硅膠薄層色譜：用於分離和鑒定弱極性黃酮類化合物。分離黃酮苷元常用的展開劑是甲苯-甲酸乙酯-甲酸（5：4：1）。
3.聚醯胺薄層色譜：特別適合於分離含游離酚羥基的黃酮及其苷類。展開劑中多含有醇、酸和水。
用紫外及可見光譜對黃酮類化合物進行結構測定的一般程序：
(1)測定樣品在甲醇溶液中的UV光譜。
(2)測定樣品在甲醇中加入各種診斷試劑後得到的UV及可見光譜。常用的診斷試劑有甲醇鈉（NaOMe）、醋酸鈉(NaOAc)、醋酸鈉-硼酸(NaOAc-H3BO3 )、三氯化鋁(AlCl3)、三氯化鋁-鹽酸(Al?鄄Cl3-HCl)等。
(3)樣品如為黃酮苷類，需先進行水解或甲基化後水解，得到苷元或甲基化苷元，再測定苷元或其衍生物的UV光譜。
黃酮類化合物在甲醇溶液中的UV光譜特徵:
1.黃酮及黃酮醇類：黃酮、黃酮醇等多數黃酮類化合物，因分子中存在桂皮醯基及苯甲醯基組成的交叉共軛體系，故其甲醇溶液在200～400nm的區域內存在兩個主要的紫外吸收帶，稱為峰帶Ⅰ（300～400nm）及峰帶Ⅱ（220～280nm）。黃酮、黃酮醇可通過帶I的最大吸收峰波長予以鑒別，小於350nm者為黃酮，而大於350nm者為黃酮醇。
2.查耳酮及橙酮類：共同特徵是帶Ⅰ很強，為主峰，而帶Ⅱ較弱，為次強峰。查耳酮中，帶Ⅱ位於220～270nm， 帶Ⅰ位於340～390nm，有時分裂為Ⅰa (340～390nm)及Ⅰb（300～320nm）。
3.異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇：除有由A環苯甲醯基系統引起的帶Ⅱ吸收（主峰）外，因B環不與吡喃酮環上的碳基共軛（或共軛很弱），帶Ⅰ很弱，常在主峰的長波方向處有一肩峰。根據主峰的位置，可以區別異黃酮與二氫黃酮及二氫黃酮醇。前者在245～270nm，後者在270～295nm。
黃酮類化合物的1HMNR譜主要特徵:
一、A環質子
1.5,7-二羥基黃酮：H-6及H-8將分別作為二重峰（J=2.5Hz），出現在δ5.7～6.9區域內，且H-6總是比H-8位於高場。
2.7-羥基黃酮：A環上有H-5、H-6、H-8三個芳香質子。H-5因有C-4位羰基強烈的負屏蔽效應的影響，以及H-6的鄰偶作用，將作為一個二重峰（J=9.0Hz）出現在δ8.0左右。H-6因有H-5的鄰偶（J=9.0Hz）及H-8的間偶（J=2.5Hz）作用，將表現為一個雙二重峰。H-8 因有H-6的間位偶合作用，顯現為一個裂距較小的二重峰（J=2.5Hz）。
二、B環質子
1.4』-氧取代黃酮：B環質子分為H-3』，H-5』和H-2』，H-6』兩組，各以相當於2個氫的雙峰信號（（J=8.5Hz）出現在δ6.5～7.9區域。H-3』，H-5』的化學位移總是比H-2』，H-6』的化學位移值小，原因是有4』-OR取代基的屏蔽作用，以及C環對H-2』，H-6』的負屏蔽效應。
2.3』,4』,5』-三氧取代黃酮類：當B環有3』,4』,5』-羥基時，則H-2』及H-6』將作為相當於兩上質子的一個單峰，出現在δ6.50～7.50范圍內。
三、C環質子
1.黃酮類：H-3常常作為一個尖銳的單峰信號出現在δ6.30處。
2.異黃酮類：異黃酮上的H-2，因正好位於羰基的β位，且通過碳和氧相接，故將作為一個單峰出現在比一般芳香質子較低的磁場區（δ7.60～7.80）。
3.二氫黃酮及二氫黃酮醇類
①二氫黃酮類：H-2與兩個磁不等同的H-3偶合（Jtrans=11.0Hz，Jcis=5.0Hz），故作為一個雙二重峰出現，中心位於δ5.2處。兩個H-3，因有相互偕偶（J=17.0Hz）及H-2的鄰偶，將分別作為一個雙二重峰出現，中心位於δ2.80處，但往往相互重迭。
②二氫黃酮醇類：在天然存在的二氫黃酮醇中，H-2及H-3多為反式二直立鍵，故分別作為一個二重峰出現（J=11.0Hz）。H-2位於δ4.9前後，H-3則位於δ4.30左右。
流化噴霧乾燥是近十年來迅速發展的一種制粒技術。該技術利用流化床乾燥器使粉末呈流化態，再噴灑葯液（或黏合劑），使之與粉末黏合成顆粒。其將浸膏與粉末混合、乾燥、粉碎、制粒等工序合並在一起，具有工藝簡單、減少污染機會、減輕勞動強度、可連續生產等優點。最近幾年，各種符合GMP要求的流化乾燥設備不斷創新，使這項技術日趨成熟。
在該項研究中，技術人員採用FLP型流化造粒包衣機對全浸膏粉膠囊及部分生葯粉加浸膏的膠囊，分別用流化噴霧乾燥制粒工藝進行了小試制備。
首先，制備含生葯加浸膏的養血膠囊，即將中葯提取液濃縮至相對密度達1.15～1.18，將生葯粉粉碎成細粉（100目），按生葯粉∶浸膏為1∶1的重量比，將生葯粉置流化床內，加熱至80℃，抽風，使粉末流化，採用頂噴式噴灑濃縮液，50分鍾後結束噴液，沸騰乾燥15分鍾，將所得顆粒分填膠囊。隨後，制備全浸膏的清熱膠囊，即將葯液濃縮到相對密度1.14～1.18的范圍，取該品種干浸膏細粉（100目），按浸膏粉∶浸膏液為1∶1的重量比，將上述浸膏粉置於流化床內，之後使葯粉流化，噴灑葯液，床內溫度控制在40℃以下，50分鍾後噴液完成，沸騰乾燥15分鍾，將所得顆粒分填膠囊。所得樣品為均勻細粒狀淺褐棕色粉末。
研究表明，顆粒粒徑與噴灑葯液的霧化程度、噴灑過程中流化床內的溫度有關。液滴大，溫度低，顆粒粒徑大；反之則小。用新工藝方法制備的顆粒粒徑在45～60目之間，外觀性狀均較常規方法為好，顆粒均勻，顏色稍淺，溶散也較常規方法快。並且新工藝製得的顆粒剖面可見許多微孔。用這些細顆粒填充膠囊，流動性好，裝量比常規製法穩定，裝量差異小。研究人員對制備的細顆粒與傳統工藝製得的顆粒按產品質量標准檢驗，結果表明，薄層分析的斑點以新工藝法明顯清晰，這可能與兩種方法加熱時間長短不同對所含成分的影響有關。