A. 常見的化學發光反應體系有那些
最常見的是魯米諾及其衍生物-過氧化氫體系
其次,吖啶脂類如光澤精-過氧化氫體系
二氧雜環丁烷類如AMPPD在鹼性磷酸酶ALP的催化下分解
然後,還有過氧化草醯酯+染料體系,釕聯吡啶+TPA體系等等。
除此之外還有很多,像魯米諾體系裡的氧化劑未必只有過氧化氫,還有高錳酸鉀、Br2、甲醛等等。催化劑也可以是過氧化物酶或者過渡金屬離子
還有就是諸如乙醇蒸汽、異丙醇蒸汽這些,在納米金屬粒子上也是可以產生催化化學發光的。
B. 化學發光劑的常用發光劑
酶促反應的發光底物
酶促反應的發光底物是指經酶的降解作用而發出光的一類發光底物,目前化學發光酶免疫技術中常用的酶有辣根過氧化物酶(HRP)和鹼性磷酸酶(AP)。HRP的發光底物為魯米諾或其衍生物和對-羥基苯乙酸。AP的發光底物為3-(2-螺旋金剛烷-4-甲氧基-4-甲基-4-(3-磷酸氧基)-苯基-1,2-二氧乙烷(AMPPD)和4-甲基傘形酮磷酸鹽(4-MUP,熒光底物)。
(1).魯米諾或其衍生物。 魯米諾的氧化反應在鹼性緩沖液中進行,通常以0.1mol/L pH8.6Tris緩沖液作底物液。要注意是:首先,魯米諾和H2O2在無HRP催化時也能緩慢自發發光,而在最後光強度測定中造成空白乾擾,因而宜分別配製成2瓶試劑溶液,只在用前即刻混合;其次, HRP發光增強劑如某些酚試劑(如鄰-碘酚)或螢火蟲熒光素酶可增強HRP催化魯米諾氧化的反應和延長發光時間,提高發光敏感度。
(2).對-羥基苯乙酸(HPA)。 對-羥基苯乙酸(HPA)在H2O2存在下被HRP氧化或氧化二聚體(熒光物質),在350nm激發光作用下,發出450nm波長的熒光,可用熒光光度計測量。
(3).AMPPD。 AMPPD在鹼性條件下,被ALP酶解生成相當穩定的AMP-D陰離子,其有2-30min的分解半衰期,發出波長為470nm的持續性光,在15min時其強度達到高峰,15-60min內光強度保持相對穩定。
(4)4-MUP。 4-MUP被ALP催化生成4-甲基傘形酮,在360nm的激發光的作用下,發出448nm的熒光,用熒光光度計進行測量。
直接化學發光劑
直接化學發光劑不需酶的催化作用,只需改變溶液的pH等條件就能發光的物質,如吖啶酯(acridinium, AE)在有過氧化氫的稀鹼溶液中即能發光。
電化學發光劑
電化學發光劑是指通過在電極表面進行電化學反應而發出光的物質。化學發光劑三聯吡啶釕[Ru(bpy)3]2+(圖16-7)和電子供體三丙胺(TPA)在陽性電極表面可同時失去一個電子而發生氧化反應。二價的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三價,成為強氧化劑,TPA失去電子後被氧化成陽離子自由基TPA+,它很不穩定,可自發地失去一個質子(H+),形成自由基TPA.,成為一種很強的還原劑,可將一個高能量的電子遞給三價的[Ru(bpy)3]3+使其形成激發態的[Ru(bpy)3]2+.。激發態的三聯吡啶釕不穩定,很快發射出一個波長為620nm的光子,回復到基態的三聯吡啶釕。這一過程可在電極表面周而復始地進行,產生許多光子,使光信號增強。
C. ivd體外診斷檢測中有哪些常用的發光底物發光劑
直接發給劑有吖啶酯、三聯吡啶釕,酶促發光有魯米諾,這些都是最常用的。
D. 直接化學發光免疫分析使用的發光底物為
正確答案:E
解析:吖啶酯常用於直接標記發光;HRP標記的化學發光免疫分析的發光底物為魯米諾;鹼性磷酸酶標記的化學發光免疫分析的發光底物為AMPPD;三聯吡啶釕用於電化學發光免疫分析
。
E. 常用的鹼性磷酸酶(ALP)化學發光底物為
正確答案:B
解析:化學發光免疫分析中常用的標記酶有辣根過氧化物酶(HRP)和鹼性磷酸酶(ALP),HRP的化學發光底物為魯米諾或其衍生物;ALP的化學發光底物為AMPPD
。因此本題最佳答案是B
。