『壹』 化學發光免疫分析法有哪三類
1、化學發光免疫分析,是用化學發光劑直接標記抗體或抗原的一類免疫測定方法。目前常見的標記物主要為魯米諾類和吖啶酯類化學發擾搜光劑。標記物為吖啶酯(雅培)或者ABEI(新產業);
2、化學發光酶免疫分析,是以酶標記生物活性物質進李李尺行免疫反應,免疫反應復合物上的酶再作用於發光底物,在信號試劑作用下發光,用發光信號測定儀進行發光測定。目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶(HRP )和鹼性磷酸酶(ALP ),它們有各自的發光底哪高物。HRP 最常用發光底物是魯米諾及其衍生物 。標記物為鹼性磷酸酶(廈門波生)或者辣根過氧化物酶(強生);
3、電化學發光免疫分析,電化學發光是指由電化學反應引起的化學發光過程。標記物為三聯吡啶釕(羅氏)。
『貳』 化學發光有什麼試劑
您好!
原理:
化學發光是物質在進行化學反應過程中伴隨的一種光輻射現象,可以分為直接發光和間接發光。直接發光是最簡單的化學發光反應,有兩個關鍵步驟組成:即激發和輻射。如A、B兩種物質發生化學反應生成C物質,反應釋放的能量被C物質的分子吸收並躍遷至激發態C*,處於激發的C*在回到基態的過程中產生光輻射。這里C*是發光體,此過程中由於C直接參與反應,故稱直接化學發光。
間接發光又稱能量轉移化學發光,它主要由三個步驟組成:首先反應物A和B反應生成激發態中間體C*(能量給予體);當C*分解時釋放出能量轉移給F(能量接受體),使F被激發而躍遷至激發態F*;最後,當F*躍遷回基態時,產生發光。
化學發光分析測定的物質可以分為三類:第一類物質是化學發光反應中的反應物;第二類物質是化學發光反應中的催化劑、增敏劑或抑制劑;第三類物質是偶合反應中的反應物、催化劑、增敏劑等。這三類物質還可以通過標記方式用來測定其他物質,進一步擴大化學發光分析的應用范圍。
物質:
螢火蟲、蠟蟬等昆蟲體內化學組分(如腺苷醯螢光素等)的發光作用。
『叄』 化學發光劑的常用發光劑
酶促反應的發光底物
酶促反應的發光底物是指經酶的降解作用而發出光的一類發光底物,目前化學發光酶免疫技術中常用的酶有辣根過氧化物酶(HRP)和鹼性磷酸酶(AP)。HRP的發光底物為魯米諾或其衍生物和對-羥基苯乙酸。AP的發光底物為3-(2-螺旋金剛烷-4-甲氧基-4-甲基-4-(3-磷酸氧基)-苯基-1,2-二氧乙烷(AMPPD)和4-甲基傘形酮磷酸鹽(4-MUP,熒光底物)。
(1).魯米諾或其衍生物。 魯米諾的氧化反應在鹼性緩沖液中進行,通常以0.1mol/L pH8.6Tris緩沖液作底物液。要注意是:首先,魯米諾和H2O2在無HRP催化時也能緩慢自發發光,而在最後光強度測定中造成空白乾擾,因而宜分別配製成2瓶試劑溶液,只在用前即刻混合;其次, HRP發光增強劑如某些酚試劑(如鄰-碘酚)或螢火蟲熒光素酶可增強HRP催化魯米諾氧化的反應和延長發光時間,提高發光敏感度。
(2).對-羥基苯乙酸(HPA)。 對-羥基苯乙酸(HPA)在H2O2存在下被HRP氧化或氧化二聚體(熒光物質),在350nm激發光作用下,發出450nm波長的熒光,可用熒光光度計測量。
(3).AMPPD。 AMPPD在鹼性條件下,被ALP酶解生成相當穩定的AMP-D陰離子,其有2-30min的分解半衰期,發出波長為470nm的持續性光,在15min時其強度達到高峰,15-60min內光強度保持相對穩定。
(4)4-MUP。 4-MUP被ALP催化生成4-甲基傘形酮,在360nm的激發光的作用下,發出448nm的熒光,用熒光光度計進行測量。
直接化學發光劑
直接化學發光劑不需酶的催化作用,只需改變溶液的pH等條件就能發光的物質,如吖啶酯(acridinium, AE)在有過氧化氫的稀鹼溶液中即能發光。
電化學發光劑
電化學發光劑是指通過在電極表面進行電化學反應而發出光的物質。化學發光劑三聯吡啶釕[Ru(bpy)3]2+(圖16-7)和電子供體三丙胺(TPA)在陽性電極表面可同時失去一個電子而發生氧化反應。二價的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三價,成為強氧化劑,TPA失去電子後被氧化成陽離子自由基TPA+,它很不穩定,可自發地失去一個質子(H+),形成自由基TPA.,成為一種很強的還原劑,可將一個高能量的電子遞給三價的[Ru(bpy)3]3+使其形成激發態的[Ru(bpy)3]2+.。激發態的三聯吡啶釕不穩定,很快發射出一個波長為620nm的光子,回復到基態的三聯吡啶釕。這一過程可在電極表面周而復始地進行,產生許多光子,使光信號增強。
『肆』 ivd體外診斷檢測中有哪些常用的發光底物發光劑
直接發給劑有吖啶酯、三聯吡啶釕,酶促發光有魯米諾,這些都是最常用的。
『伍』 直接化學發光常用的發光劑是
吖啶酯和三聯吡啶釕。
吖啶悶頌碧酯是一類可用作化學發游標記物的化學物質,加入發光啟動試劑後0.4s左右發射櫻旅光強度達到最大,半衰期為0.9s左右。
三聯吡啶釕其標記物的發光原理是,一螞舉種在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應。
『陸』 使用酶促發光底物的是
使用酶促發光底物的是酶促反應發光劑。
酶促反應化學發光是利用標記酶的催化作用,使發光劑(底物)發光,這一類需酶催化後發光的發光劑 稱為酶促反應發光劑。酶促化學發光靈敏度高,但速度慢,酶活性容易受外界影響,其代表性的發光物質有魯米諾及其衍生物、AMPPD。
優點主要有:
1、背景發光低,信噪比高。
2、發光反應干擾因素少。
3、光釋放快速集稿迅中、發光效率高、發光強度大。
4、易於與蛋白質聯結且聯結後光子產率不減少。
5、標記物穩定(在2-8 ℃下可保存數月之久)。
『柒』 化學發光劑有哪些,有哪些類型的試劑
光現象是一種常見的自然現象,利用光測定光反應反應物、催化劑、增敏劑、抑制劑,偶合反應中的反應物、催化劑、增敏劑的方法叫做光法。光是物質在化學反應過程中,其物質分子吸收化學能產生光的輻射現象。
『捌』 常見的化學發光反應體系有哪些
最常見的是魯米諾及其衍生物-過氧化氫體系,其次,吖啶脂類如光澤精-過氧化氫體系,二氧雜環丁烷類如AMPPD在鹼性知磷酸酶ALP的催化下分解,然後,還有過氧化草醯酯+染料體系,釕聯吡啶道+TPA體系等等。除此之外還有版很多,像魯米諾體系裡的氧化劑未必只有過氧化氫,還有高錳酸鉀、Br2、甲醛等等。催化劑也可以是過氧化物酶或者過渡金屬離子還有就是諸如乙醇蒸汽、異丙醇蒸汽這些,在納米金屬粒子上也是可權以產生催化化學發光的。
『玖』 3-氨基鄰苯二甲醯肼發光原理
3-氨基鄰粗神苯二甲醯爛凳物肼發光原理?魯米諾(3-氨基鄰苯二甲醯肼),又名發光氨,飢液是黃色晶狀粉末,不溶於水,溶於大部分極性有機溶劑。
2) 發光機理
在鹼性條件下,被氧化劑氧化生成3-氨基鄰苯二酸的激發態中間體,當其返回到基態過程中發出光子。
3) 優勢
魯米諾化學發光具有選擇型好、簡便、低成本、高靈敏及水溶性好等優點。
4) 新型魯米諾類化學發光試劑。新型衍生物發光試劑的研究方向有兩種:一種是在原有發光試劑的基礎上進行結構改造,發現更優越的發光試劑;另一種是將不同的芳香環引入魯米諾的氨基位置上,增加化學發光強度。常見的魯米諾發光試劑包括有異魯米諾異硫氰酸酯(ILITC)、N-(4-氨基丁基) -N-乙基異魯米諾(ABEI)以及 4,5-二氨基鄰苯二醯肼(DPH)等已經應用於很多領域。因為含有魯米諾部分的發光試劑發光強度低而且合成困難,所以相關新型衍生物的報道不太多。
5) 應用
發光試劑運用夾心化學發光免疫分析(CLIA)與蛋白質的氨基共價結合,用於臨床病人 HIV p24的免疫診斷。檢測基於 HIV p24 抗原與生物素化的抗體(anti-p24mAb) 及發光試劑1標記的抗體 (anti-p24mAb)作用,形成一個夾心狀的抗體-抗原-抗體免疫復合物,接著免疫復合物被包有鏈霉親和素的磁性顆粒捕獲,誘導化學發光而被檢測。
『拾』 魯米諾試劑是用來幹嘛的
魯米諾試劑除了用於生化檢測中、羧酸和氨類化合物標記、金屬離子檢測外,還經常用刑偵血跡檢測,靈敏度非常高。
我們常說的魯米諾試劑是魯迅芹米諾與過氧化氫(雙氧水的主要成分)的混合物。
魯米諾試劑使用識別血液的試劑,血跡即使被擦拭,血液中的血紅素還是會殘留下來,當魯米諾試劑噴在血紅素上,會與活性氧產生氧拿鏈化作用,釋放出藍紫色熒光。被稱為魯米諾反應。是鑒定血液用的有機物質。
魯米諾試劑的特點及缺點:
魯米諾是一種化學發光試劑,又可以叫做發光氨。通常溫度下的物質狀態為黃色晶體或者米黃色的粉末,且本身的性質很穩定。
一般常說的魯米諾試劑就是魯米諾與過氧化氫的混合物。魯米諾的溶液具有顯著的強酸性,會刺激人體器官,如眼睛、口鼻、皮膚、呼吸道等等。
魯畝敏畢米諾有眾所周知的缺點,例如缺乏特異性,這可能導致血液存在的假陽性指示,以及要求在完全黑暗的情況下進行測試以獲得最佳結果。