Ⅰ 酶組織化學反應的主要方法
酶組織化學反應主要經過兩步。
1、酶促反應，即酶催化細胞內相應底物生成無色的初級反應底物。好凳悉
2、顯色反應，捕獲和偶聯。將初級反應產物與捕獲劑反應，經過粗唯一步或友乎兩步反應生成有色的最終反應產物，或將初級反應產物與一些偶聯劑發生偶聯反應生成有色沉澱，顯示酶活性部位。
Ⅱ 做免疫組化前注意什麼
做免疫組化前需要注意的方面：
1、抗原有無丟失主要看組織切片的新鮮程度，一般切片室溫保存超過3-6個月，可能切片內的抗原丟失很嚴重，此時可以通過重新用石蠟塊切片來進一步驗證（蠟塊需要低溫保存）。
2、石蠟切片在製作過程中可能因醛基對抗原決定族的封閉，這需要通過抗原修復來充分暴露，從而增加抗原抗體結合反應，提高陽性率，一般用6min*4次中火微波抗原修復，用枸櫞酸鈉緩沖液。
3、注意檢查抗體有無選擇錯誤和抗體孵育條件是否不適。
4、抗選擇單克隆抗體易出蘆派現陰性結果，因為靈敏度低但特異性好；一抗的speciesreactivity中無檢測組織的種屬，這是比較常見的錯誤；一抗選擇rat，而二抗是抗mouse/rabbit等均有可能出現陰性結果。
5、抗體孵育時間過短，容易導致陰性結果。一般一抗我建議4℃孵育過夜和37℃復溫45min；二抗我一般37℃30min。我不喜歡參照二抗染色試劑盒說明書。
6、抗體濃度過低。這是陰性結果的最可能原因。必須提高稀釋度，我一般初次做一種新抗體，喜歡先用說明書建議的低濃度和高濃度做一次，然後決定是向喊嘩拍高還是低方向摸索。
一般先決定二抗的濃度（工作液就好辦了，直接滴加），重點摸索一抗的最適濃度。注意：免疫反應中存在前帶和後帶效應，這提示不是濃度越高，陽鄭羨性率就越高，反之亦然。
7、血清封閉時間也可相應縮短。一般10-30min，但這個時間可以調整，封閉主要是降低切片的總體背景著色。
8、細胞通透也不可忽視。許多戰友認為石蠟切片一般不需細胞通透，因為切片時可能已經把細胞切開了，但對於胞核蛋白，建議還是通透一下，促進抗體等試劑充分進入參與反應。
(2)酶細胞化學技術有哪些擴展閱讀：
一、免疫組化的分類：
1、免疫熒光細胞化學技術：將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發光的照射後會發出一定波長的熒光，從而可以確定組織中的抗原定位或定量。
2、免疫酶細胞化學技術：是目前免疫組織化學研究中最常用的技術，基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然後加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞或組織內的相應抗原進行定位或定性研究。
3、免疫膠體金技術：就是用膠體金標記一抗，二抗或其他的能特異性的結合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對組織或細胞內的抗原進行定性，定位或定量研究。由於膠體金的電子密度高，多用於免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究。
二、免疫組化的原理：
抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性，免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動物後獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質。
由於抗原與抗體的復合物是無色的，因此還必須藉助於組織化學的方法將抗原抗體結合的部位顯示出來，以其達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性，定位或定量的研究。
Ⅲ 酶免疫細胞如何進行化學染色
免疫細胞化學染色是將血液、骨髓液、漿膜腔積液等等各種體液組織製成的塗片和骨髓等組織的切片經各種單克隆抗體的標定和常用的過氧化物酶或鹼性磷酸酶顯色後對白血病細胞直接鏡檢，以確定細胞類型。
免疫組織化學染色方法繁多，可根據標記物的不同分為：免疫酶細胞化學染色、免疫熒光細胞化學染色、免疫金銀染色技術以及親合免疫組織化學染色技術等。目前血液系統疾病檢查常用免疫細胞化學染色方法有三種：過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法、鹼性磷酸酶-抗鹼性磷酸酶（APAAP）法和親和素-生物素-過氧化物酶復合物（ABC-AP）法。PAP法抗原、抗體反應及酶標原理與APAAP法完全相同，都屬於免疫組織化學反應，只是所標記的酶不同。PAP法酶化學反應原理與ABC-AP法完全相同，但ABC-AP法為親合免疫組織化學反應。在染色步驟及方法上PAP法和ABC-AP法完全相同。
免疫細胞化學能夠識別抗原蛋白質一級結構中氨基酸的差別，從而對細胞結構、功能及細胞代謝等進行綜合分析，確定細胞的類型、來源及細胞的分化階段。應用骨髓切片免疫組織化學技術可以對骨髓細胞進行原位觀察，通過對細胞特異性抗原的定性、定位和定量分析，了解骨髓組織和細胞的結構和變化，這對血液系統疾病尤其是血液系統腫瘤的診斷、鑒別診斷，以及血液腫瘤的分類、分型和預後的判斷提供了有利的研究手段。
Ⅳ 免疫組化:-2:p16(2/3層)ki67(30%)什麼意思
p16(2/3層)，提示為中重度不典型增生，需要採取物理治療（如冷凍、激光等），或者考慮宮頸錐切術。
免疫組化，是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及相對定量的研究。
抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性，免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動物後獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質。
(4)酶細胞化學技術有哪些擴展閱讀
免疫組織化學技術按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
這些常用免疫組織化學方法的原理如下：
1、免疫熒光細胞化學技術
將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復合物中的熒光素受激發光的照射後會發出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量。
2、免疫酶細胞化學技術
是目前免疫組織化學研究中最常用的技術．基本原理是先以酶標記的雹嫌抗體與組織或細胞作用，然後加入亂肆鍵酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞或組織內的相應抗原進行定位或定性研究。
3、免疫膠體金技術
就是用膠體金標記一抗，二抗或其他的能特異性的結合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對組織或細胞內的抗原進行定性，定位或嘩巧定量研究．由於膠體金的電子密度高，多用於免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究。
Ⅳ 各種酶的生產方法是什麼簡要概括。
酶工程(Enzyme Engineering))又稱為酶技術。隨著酶學研究的迅速發展，特別是酶應用的推廣，使酶學基本原理與化學工程相結合，從而形成了酶工程.酶工程是酶制劑的大批量生產和應用的技術。它從應用的目的出發，將酶學理論與化學工程相結合研究酶，並在一定的反應裝置中利用酶的催化特性，將原料轉化為產物的一門新技術,就酶工程本身的發展來說，包括下列主要內容：
2．1酶的產生
酶制劑的來源，有微生物、動物和植物，但是，主要的來源是微生物。由於微生物比動植物具有更多的優點，因此， —般選用優良的產酶菌株，通過發酵來產生酶。為了提高發酵液中的酶濃度，選育優良菌株、研製基因工程菌、優化發酵條件。工業生產需要特殊性能的新型酶，如耐高溫的α—澱粉酶、耐鹼性的蛋白酶和脂肪酶等，因此，需要研究、開發生產特殊性能新型酶的菌株。
2． 2 酶的制備
酶的分離提純技術是當前生物技術「後處理工藝」的核心。採用各種分離提純技術，從微生物細胞及其發酵液，或動、植物細胞及其培養液中分離提純酶，製成高活性的不同純度的酶制劑，為了使酶制劑更廣泛地應用於國民經濟各個方面，必須提高酶制劑的活性、純度和收率，需要研究新的分離提純技術。
2． 3 酶和細胞固定化
酶和細胞固定化研究是酶工程的中心任務。為了提高酶的穩定性，重復使用酶制劑，擴大酶制劑的應用范圍，採用各種固定化方法對酶進行固定化，制備了固定化酶，如固定化葡萄糖異構酶、固定化氨基醯化酶等，測定固定化酶的各種性
質，並對固定化酶作各方面的應用與開發研究。目前固定化酶仍具有強大的生命力。它受到生物化學、化學工程、微生物、高分子、醫學等各領域的高度重視。
固定化細胞是在固定化酶的基礎發發展起來的。用各種固定化方法對微生物細胞、動物細胞和植物細胞進行固定化，製成各種固定化生物細胞.研究固定化細胞的酶學性質，特別是動力學性質，研究與開發固定化細胞在各方面的應用，是當今酶工程的一個熱門課題。
固定化技術是酶技術現代化的一個重要里程碑，是克服天然酶在工業應用方面的不足之處，而又發揮酶反應特點的突破性技術。可以說沒有固定化技術的開發，就沒有現代的酶技術。
2．4．酶分子改造
又稱為酶分子修飾。為了提高酶的穩定性，降低抗原性，延長葯用菌在機體內的半衰期，採用各種修飾方法對酶分子結構進行改造，以便創造出天然酶所不具備的某些優良特性(如較高的穩定性、無抗原性、抗蛋白酶水解等)，甚至於創造出新的酶活性，擴大酶的應用，從而提高酶的應用價值，達到較大的經濟效益和社會效益。
酶分子改造可以從兩個方面進行：
(1)用蛋白質工程技術對酶分子結構基因進行改造，期望獲得一級結構和空間結構較為合理的具有優良特性、高活性的新酶(突變酶)。
(2)用化學法或酶法改造酶蛋白的一級結構，或者用化學修飾法對酶分子中側鏈基團進行化學修飾．以便改變酶學性質。這類酶在酶學基礎研究上和醫葯上特別有用。
Ⅵ 酶分離純化的主要技術措施有哪些
酶是蛋白質，因此一般拆伏蛋白質的分離原則都應該旅鉛攜遵行。但激李酶作為特殊的蛋白質，最重要的原則是一定在純化過程中保持酶的活性，所以純化過程中一般要注意保持低溫、緩沖液配方避免酶的抑制。每個步驟都要檢測酶活性，一方面直觀了解純化的回收率，另一方面可以計算酶的純度。酶的分離純化方法一般根據酶的分子量、等電點、疏水性等生化性質，選擇相應的沉澱、鹽析、層析方法，其中親和層析可以應用可逆性底物作為配基或特異性抗體，制備親和層析膠。酶的分離純化工作主要是,將酶從雜蛋白中分離出來或者將雜蛋白從酶溶液中除去。現有的酶分離純化方法都是依據酶和雜蛋白在性質上的差異而建立的。 1、根據分子大小而設計的方法,如離心分離法、篩膜分離法、凝膠過濾法等。 2、根據溶解度的大小分離的方法,如鹽析法,有機溶劑沉澱法,共沉澱法。