如何用物理方法分離循環的腫瘤細胞

『壹』 細胞分離

體外培養（in vitro culture）包括：組織培養（tissue culture）、細胞培養（cell culture）、器官培養（organ culture）。顧名思義，就是將活體結構成分（如活體組織、活體細胞或者活體器官等）從體內或其寄生體內取出，放在類似於體內生存環境的體外環境中，讓其生長發育的方法。廣義組織培養與體外培養同義。

體外培養已經歷了約一百年的發展歷史，但發展初期進程比較緩慢，沒有引起很多學者的重視。直到上世紀50年代後期，體外培養技術才廣泛應用於生物學研究的各個領域，使這項技術得到飛速發展。現在體外培養已成為細胞工程、基因工程、抗體工程的重要組成部分。

細胞培養指從生物機體取出部分組織分散成單個細胞或直接從機體取出單個細胞，也可把體外培養細胞分散成單個細胞在體外條件下培養，細胞能繼續存活與增殖。培養過程中細胞不再形成組織。

發展與完善細胞培養技術圍繞防止污染、改進培養方法、設計新型培養容器、設計不同的培養液等幾個方面進行。

1885年Roux溫生理鹽水培育雞胚組織；

1903年Jolly，1906年Beebe等發明了蓋片懸滴培養；

1907年Harrison培養蛙胚神經成功，開始創建蓋片凹玻璃懸滴培養法；
1910、1912年Carrel採用無菌操作、更新培養基、傳代，完善了懸滴培養法；
1924年Maximow採用雙蓋片懸滴培養法；
1923年Carral設計創立了卡氏瓶培養法，用此法可根據需要隨時更換培養液，既有利於組織不斷生長，又可以運用不同種類的營養液培養不同的細胞，極大地推動了當時組織培養研究。

Earle等加以改進，使大量細胞能直接生長於玻璃瓶壁上，培養了正常細胞與腫瘤細胞的細胞株。至此大多數研究人員都採用培養瓶培養細胞。

組織培養從二十世紀40年代起迅速發展,在培養容器、培養基和培養技術等方面出現了很多革新。

在培養容器方面, 由簡單的用試管、旋轉管培養，發展到多種培養瓶培養，近年來，塑料瓶、皿、多孔培養板的使用已日趨普遍。

在培養基方面，從50年代初，Parke、Eagle等設計出合成培養基後，從純天然培養基到合成培養基、從雞胚浸出液發展到動物血清（促細胞生長物），直至60年代設計出無血清培養基。

首先反映在設計不同種類的緩沖鹽溶液，以用來培養不同的細胞和洗滌細胞。Earle在1948年設計了含有碳酸氫鈉等鹽類的Earle氏鹽溶液，Hank』s在1949年設計了Hank』s氏鹽溶液。

在培養技術方法方面，革新進展更為迅猛，Earle、Dulbecco等於1943年創建單層細胞培養法，首建長期傳代的L-細胞系。
1948年Sanford創建單細胞分離培養法，獲L-細胞純系。
1951年Gey首建人腫瘤細胞——Hela細胞系。
1961年Hayflick首建人二倍體細胞系25種，開辟了應用新方向。
從50年代末開始，組織培養技術應用進入了一個繁盛的階段，廣泛應用於生物學和醫學研究各個領域。
誘變建立遺傳缺陷細胞株、雜交瘤技術制備單抗、發展細胞大量培養技術、利用重組技術構建工程細胞株，已成為生物工程的重要生產手段。

在連續灌注培養工藝方面，美國Ohashi,Ryo等人2001年報道採用2L一次性生物反應器灌注培養雜交瘤細胞生產單克隆抗體，以Becton Dickenson Cell Mab+10%胎牛血清+1％聚醚F-68為培養基，最高活細胞密度超過1×107cells/ml；2001年瑞士Heine, Holger等人用帶超聲細胞分離器(UCS)的連續灌注攪拌罐生物反應器培養鼠雜交瘤細胞生產單克隆抗體，穩態培養時活細胞密度超過2×107cells/ml；2004年德國Thomas等人在1L攪拌罐生物反應器中培養rCHO細胞生產人MUC-1糖蛋白，採取葡萄糖濃度限制的高產率灌注工藝減少有害代謝物，代謝轉向TCA循環增加，活細胞密度保持在(1～2)×107cells/ml。

在流加懸浮培養工藝方面，美國麻省理工Xie Liang等人2000年報道在2L生物反應器中流加培養雜交瘤細胞，通過營養控制降低氨和乳酸的比生成速率，補充培養基包括營養成分、胎牛血清和痕量金屬，最大活細胞密度達到1.7×107cells/mL。

細胞分離就是通過物理、生物、化學的方法，將生物組織分離為單細胞分散系的過程。
一般動物組織經培養，其細胞會延培養基表面平鋪生長，自行達到細胞分離的目的。還可用膠原酶處理分離。
而植物組織培養後會形成愈傷組織，要用化學方法才能獲得單個細胞（一般用纖維素酶）。

『貳』 如何破壞腫瘤細胞的細胞膜，在不改變其他結構和胞內酶活性的情況下

在一定的PH環境和一定溫度內，先保持胞內酶的活性，在對腫瘤細胞的細胞膜進行分析，了解其結構，並用相應的抗體或酶對細胞膜進行溶解。

『叄』 腫瘤細胞與樹突狀細胞共培養，怎樣將兩者分開

腫瘤細胞與樹突狀細胞共培養，可以用免疫磁珠，過柱分離。或者熒光，流式分選

『肆』 將骨癌患者的骨頭取出來，高溫殺死癌細胞再移植回去，這種方法靠譜嗎

將骨癌患者的骨頭取出來，高溫殺死癌細胞再移植回去，這種方法靠譜嗎？

大家好，在網路上有這么一篇文章，就是關於骨腫瘤的一個治療方法，就是說將這個患者的患有骨腫瘤的部位的這個骨頭取出來，高溫煮死癌細胞之後再放回去，那很多人對這個話題，還是頭一次聽說，那這種方法到底靠譜嗎？有沒有什麼科學依據呢？

第三，總之骨腫瘤切除術之後，再進行重建，也有很多的方法，而且每一種方法他都有自己的優缺點，而且在實際生活中，具體採取何種方法來進行治療，這個是需要根據病人的病情以及病人的意願，還有家庭的經濟情況來決定的。

好，以上便是本文章的全部內容，我們下期再見。

『伍』 癌細胞是怎麼進行轉移和擴散的都有哪些症狀

我們身體裡面有非常多的淋巴管和淋巴組織。淋巴組織屬於免疫系統，本來是可以消滅腫瘤的，但是，腫瘤細胞通過各種途徑逃避了免疫細胞的打擊。

甚至讓免疫細胞作為癌症的幫凶，幫助他們轉移。癌細胞通過淋巴管道，可以轉移到附近的淋巴結，甚至遠處的淋巴結。

癌細胞長到一定程度，可以脫落，進入到癌症周圍的血管之中，然後隨著血流進入全身的各個組織和器官，所以，血供豐富的器官，容易被轉移。例如肝轉移，肺轉移，腦轉移和骨轉移。

常見的乳腺癌就比較容易引起骨轉移，癌細胞轉移到骨上後會破壞骨質，產生骨痛，嚴重的可以導致骨折，比較容易轉移到脊柱骨。而脊柱骨骨破壞嚴重產生的骨折則可以引起截癱等嚴重並發症。

癌轉移到不同位置會出現相應症狀，轉移到大腦可以引起神經精神症狀。當然癌症一般伴隨消瘦、乏力等常規表現。對於輔助診斷和判斷患者預後也有一定的幫助。

『陸』 循環腫瘤細胞如何培養

一、首先是富集，分離，篩選出循環腫瘤細胞。
由於CTCs在外周血中的數量極少, 通常需在約1億個白細胞和500億個紅細胞中尋找僅有的數
個腫瘤細胞[1], 因此為了提高CTCs的檢出率, 通常需在檢測前行CTCs富集. 目前CTCs的富集方
法按其原理主要分為免疫磁性分離法和基於形態學的富集法。
免疫磁性分離法(immunomagnetic separation,IMS) IMS的原理是基於腫瘤細胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結合, 繼而在外加磁場中通過相應抗原抗體復合物與磁珠相連被吸附而滯留在磁場中, 無該種表面抗原的其他細胞由於不能與連接著磁珠的特異性單抗結合而沒有磁性, 不在磁場中停留, 從而使腫瘤細胞得以分離。
密度梯度離心法是目前實驗室常用的一種基於形態學特點富集腫瘤細胞的方法, 可從外周血中分離單個核細胞(包括CTCs), 設備要求不高, 方法較為簡單, 但該方法缺乏特異性, 易導致缺乏相應密度的
腫瘤細胞丟失。
二、培養
直接培養往往增殖數量有限，甚至在細胞株化前可能死亡而無法長期培養。
可以通過導入腺病毒載體的方法來實現不死化。

『柒』 物理療法包括哪些內容

1、人工療法

酒精擦浴等。

2、電療法

包括靜電療法、直流電療法、低頻電療法、中頻電療法、高頻電療法、超高頻電療法、特高頻電療法、離子導入療法、電離空氣療法、電水浴療法、射頻療法、經顱微電流刺激療法等。

3、磁療法

包括靜磁場療法、脈動磁場療法、低頻磁場療法、中頻電磁場療法、高頻電磁場療法等。

4、光療法

包括紅外線療法、可見光療法、紫外線療法、激光療法等。

此外，還有超聲波療法、水療法、傳導熱療法、冷凍療法、運動療法、拔罐療法、電子生物反饋療法等。

5、自然療法

包括礦泉、氣候、空氣、日光、海水療法等。

6、力學療法

就是運動或者其它的方式來治療某些問題，如斜面護脊床墊的矯正脊柱的方法就屬於這種力學療法。

(7)如何用物理方法分離循環的腫瘤細胞擴展閱讀：

物理療法的作用：

（1）消炎作用，理療都可促進炎症的吸收消散，按炎症的性質，可分別選用各種療法。

（2）鎮痛作用，主要對神經、關節、肌肉疼痛以及內臟的痙攣性疼痛。

（4）興奮作用，主要用於神經麻痹、肌肉萎縮、局部感覺障礙等。

（5）緩解痙攣作用。

（6）松解粘連、軟化瘢痕。

此外，有脫敏、殺菌、治癌、解熱及發汗作用等。

『捌』 物理療法和化學療法

化學療法就是利用能治療疾病，但不導致病人死亡的化學物質治療某種疾病。保羅·恩利希最先使用了這個名詞，他是一所研究感染性疾病和血清研究所的所長。
在利物浦，己有人試著用一種合成的砷化合物來治療寄生蟲的感染。但當恩利希試圖重復這些結果時，他發現疾病產生了對這種葯物的耐葯性。他要求化學家試著合成許多不同的砷化合物。
圖：一個18歲的病人因癌症化療後頭發脫落。
後來，另一位德國科學家弗里茨·紹丁在1905年發現了引起梅毒（一種經性傳播的疾病）的微生物。恩利希就用他的化合物來試驗對這種新微生物的治療作用。他高興地發現，606號化合物有效果。他把這種化合物稱為灑爾氟散，並戲稱它為「神奇的子彈」，因為它對梅毒有特效。1911年，它第一次運用於梅毒的治療。
從那以後，科學家們一直在尋找能殺傷腫瘤細胞、不對人體造成嚴重傷害的化學物質。在發現有效的化學物質之前，科學家得對幾千種化學物質進行測試。
許多種癌症現在能被治癒。干擾素是人體針對某些病毒發生反應後而自然產生的蛋白質。它們刺激人體自身的防禦系統，殺傷一些癌症細胞。它們已經被成功地用於治療某些類型的白血病，並能延緩一些腫瘤的發展。
化學療法是將葯物經血管帶到全身，對身體所有細胞都有影響。這種療法有時也稱為「胞毒療法」，因為所用葯物都是有害，甚至是帶毒性的，體內細胞，無論是否惡性細胞，都受到破壞。
化學治療的臨床應用有四種方式
1．晚期或播散性腫瘤的全身化療
因對這類腫瘤患者通常缺乏其它有效的治療方法，常常一開始就採用化學治療，近期的目的是取得緩解。通常人們將這種化療稱為誘導化療(Inction Chemotherapy)。如開始採用的化療方案失敗，改用其它方案化療時，稱為解救治療(Salvage Treatment)。
2．輔助化療(Adjuvant Chemotherapy)
是指局部治療(手術或放療)後，針對可能存在的微小轉移病灶，防止其復發轉移而進行的化療。例如骨肉瘤、睾丸腫瘤和高危的乳腺癌病人術後輔助化療可明顯改善療效，提高生存率或無病生存率。
3．新輔助化療(Neoadjuvant Chemotherapy)
針對臨床上相對較為局限性的腫瘤，但手術切除或放射治療有一定難度的，可在手術或放射治療前先使用化療。其目的是希望化療後腫瘤縮小，從而減少切除的范圍，縮小手術造成的傷殘；其次化療可抑制或消滅可能存在的微小轉移，提高患者的生存率。現已證明新輔助化療對膀胱癌、乳腺癌、喉癌、骨肉瘤及軟組織肉瘤、非小細胞肺癌、食管癌及頭頸部癌可以減小手術范圍，或把不能手術切除的腫瘤經化療後變成可切除的腫瘤。
4．特殊途徑化療
(1)腔內治療 包括癌性胸腔內、腹腔內及心包腔內積液。通常將化療葯物(如絲裂黴素、順鉑、5-氟脲嘧啶、博來黴素)用適量的流體溶解或稀釋後，經引流的導管注入各種病變的體腔內，從而達到控制惡性體腔積液的目的。
(2)椎管內化療 白血病及許多實體瘤可以侵犯中樞神經系統，尤其是腦膜最容易受侵。治療方法是，通常採用胸椎穿刺鞘內給葯，以便腦積液內有較高的葯物濃度，從而達到治療目的。椎管內常用的葯物有甲氨喋呤及阿糖胞苷。
(3)動脈插管化療 如頸外動脈分枝插管治療頭頸癌，肝動脈插管治療原發性肝癌或肝轉移癌。
合理用葯原則
盡管目前已有40餘種常用的抗腫瘤葯物，而且新葯還在不斷地發展，但欲取得好的療效，還必須有合理的治療方案，包括用葯時機、葯物的選擇與配伍、給葯的先後次序、劑量、療程及間隔時間等，才能做到全面、合理、有效地選擇聯合化療方案。通常聯合化療方案的組成要考慮以下原則：
1．使用不同作用機制的葯物，以便發揮協同作用；
2．葯物不應有相似的毒性，以免毒性相加，患者不能耐受；
3．單一用葯必須有效。
化療注意事項
(1) 開始治療前診斷必須明確，白血病、多發性骨髓瘤與惡性組織細胞瘤必須得到血液學和骨髓細胞學診斷。惡性淋巴瘤與其它各種實體瘤必須得到局部組織的病理診斷，化療葯物一般不用於診斷性治療，更不能作為安慰劑使用，以免給病人造成不必要的損失。
(2) 患者一般情況較好，血象及肝、腎功能正常，才能耐受化療。凡有下列情況之一者，應慎重考慮葯物的種類與劑量：[1] 年老體弱；[2] 以往經過多種化療或與放療同時進行；[3] 肝、腎功能異常；[4] 明顯貧血；[5] 白細胞或血小板低於正常值；[6]營養不良、血漿蛋白明顯減少；[7] 腫瘤骨髓轉移；[8] 腎上腺皮質功能不全；[9] 有發熱、感染或其它並發症；[10] 心肌病變等；[11] 慢性肺功能不全。
化療失敗的原因
1．病人方面
骨髓與其它重要器官(肝、腎、心、肺等)的功能不全，患者的一般情況太差，不能耐受化療。
2．腫瘤方面
原發或繼發性抗葯；增殖比率較低處於靜止期細胞多；腫瘤的負荷過大，瘤細胞在1011 以上。
3．葯物方面
選擇性不強，對腫瘤和正常組織細胞的損傷差別不大；對GO期細胞無效或效力太差；不能作用於「避難所」內的瘤細胞如不能通過血腦屏障而進入顱內；最有效的使用方法尚未找到。
基本概述
應用各種物理因素作用於人體，以防治疾病的方法，稱為物理療法，簡稱理療。
物理療法有悠久的歷史，特別是70年代以來，擴大了理療的適應證，提高了理療效果。隨著現代物理學的發展，更有效的物理療法，將不斷充實到理療學科中來。
[編輯本段]主要種類
1.人工物理因素療法
（1）電療法
包括靜電療法、直流電療法、低頻電療法、中頻電療法、高頻電療法、超高頻電療法、特高頻電療法、離子導入療法、電離空氣療法、電水浴療法、射頻療法、經顱微電流刺激療法等。
（2）磁療法
包括靜磁場療法、脈動磁場療法、低頻磁場療法、中頻電磁場療法、高頻電磁場療法等。
（3）光療法
包括紅外線療法、可見光療法、紫外線療法、激光療法等。
此外，還有超聲波療法、水療法、傳導熱療法、冷凍療法、運動療法、拔罐療法、電子生物反饋療法等。
2.自然物理因素的療法
包括礦泉、氣候、空氣、日光、海水療法等。
[編輯本段]主要作用
1.共同性作用和特殊性作用
（1）共同性作用：如充血、消炎、鎮痛等。
（2）特殊性作用：如低頻電流引起肌肉收縮；紫外線促進維生素D的形成；直流電流的電解、電泳，能將葯物離子導入體內；超聲波的振盪霧化；高頻電可使組織內部產生「內生熱」等。
2.直接作用和反射作用
（1）直接作用：如高能量激光治療疣、胎痣、血管瘤；紫外線刺激皮膚細胞和殺菌；直流電場內的離子移動；超高頻電場促使偶極分子振盪以及電解拔毛等。
（2）反射作用：是間接作用，是理療的主要作用機制，是不同於其他療法的主要特點，是借機體的反射作用和防禦性反應，來保持和恢復生理平衡，從而消除病理過程。
[編輯本段]應用范圍
1.預防
許多種物理因素應用於健康人，可以增強抵抗力，預防某些疾病。
2.治療
（1）消炎作用，理療都可促進炎症的吸收消散，按炎症的性質，可分別選用各種療法。
（2）鎮痛作用，主要對神經、關節、肌肉疼痛以及內臟的痙攣性疼痛。
（4）興奮作用，主要用於神經麻痹、肌肉萎縮、局部感覺障礙等。
（5）緩解痙攣作用。
（6）松解粘連、軟化瘢痕。
此外，有脫敏、殺菌、治癌、解熱及發汗作用等。
3.康復
物理療法在病後恢復和傷殘者功能重建中，具有重要的實用價值。在病後，物理因素可以增進食慾，促進體力恢復，如紫外線療法、水療法、溫泉療法、日光浴療法等。對傷殘者功能恢復，如電療、光療、水療、體育療法均可廣泛應用，能提高勞動能力和降低殘廢率。
[編輯本段]注意事項
1.理療方法的綜合應用
（1）復合療法：即同時在同一患者或同一部位，進行2種以上的方法。
（2）聯合療法：先後連續應用2種以上的理療方法。
（3）交替聯合療法：是兩療法間隔時間較長的聯合作用，也即是交替應用。
2種以上理療方法之目的是利用物理因素的協同或相加作用以增強療效。
2.加劇反應的發生和處理
在某些理療過程中，出現症狀、體征惡化現象。這種加劇反應一般不需特殊處理，多在理療進行中自然消退。局部加劇反應如持續l周以上，或症狀進一步加重，則宜減少劑量，延長時間，或停止理療。全身加劇反應時應停止數日，從小劑量開始或更換其他理療方法。
3.適應和禁忌
（1）適應
應選擇適當的理療方法，針對治療某種病證，理療適用范圍包括各種炎症、神經系統疾病、心血管系疾病、骨傷科疾病等。
（2）禁忌
嚴重的心臟病、動脈硬化、有出血傾向、惡病質及可刺激腫瘤細胞生長的物理因素，均屬禁用范圍。

『玖』 實驗室培養的腫瘤細胞和從人體分離出的原代腫瘤細胞有什麼區別

將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培 養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。

操作步驟
（一）胰酶消化法
1、器材：將孕鼠或新生小鼠拉頸椎致死，置75%酒精泡2—3秒鍾（時間不能過長、以免酒精從口和肛門浸入體內）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠帶 入超凈台內（或將新生小鼠在超凈台內）解剖取肝臟，置平皿中。
2、用Hank』s液洗滌三次，並剔除脂肪，結締組織，血液等雜物。
3、用手術剪將肝臟剪成小塊（1mm2），再用Hank』s液洗三次，轉移至小青黴素瓶中。
4、視組織塊量加入5—6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20—40分鍾，每隔5分鍾振盪一次，或用吸管吹打一次，使細胞分離。
5、加入3—5ml培養液以終止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制劑）。
6、靜置5—10分鍾，使未分散的組織塊下沉，取懸液加入到離心管中。
7、1000rpm，離心10分鍾，棄上清液。
8、加入Hank』s液5ml，沖散細胞，再離心一次，棄上清液。
9、加入培養液l—2 ml（視細胞量），血球計數板計數。
10、將細胞調整到5×105/ml左右，轉移至25ml細胞培養瓶中，37℃下培養。 上述消化分離的方法是最基本的方法，在該方法的基礎上，可進一步分離不同細胞。細胞分離的方法各實驗室不同，所採用的消化酶也不相同（如 膠原酶，透明質酶等）。

『拾』 培養人腫瘤細胞，剩餘的腫瘤細胞該怎樣處理（化學或物理滅活）之後才能予以丟棄還有巴氏滴管什麼的。

這種用過的物品最好是用紫外照射30min後，再用稀釋的84消毒液進行處理。不過我們那一般做病毒的非常嚴格，癌細胞好一點。

希望能夠幫到你~有問題一起討論解決哦~