① 为什么cDNA文库可以物种间基因交流,基因组文库是部分可以
两类文库的构建方法和目的的不同决定了其基因的分离和提取难易度不同。
基因组文库的部分基因(特别是不能表达形成mRNA的非酶切部分)很难通过某种方法从基因组文库中分离出来,从而影响了它们在物种间交流的可能性。
cDNA的基因中没有内含子、启动子和终止子。(最关键的原因)
基因工程中,如果用原核生物作为受体细胞,目的基因是来自真核生物的基因组文库的基因,真核生物的基因组文库的基因含有内含子,在原核生物体内没有内含子剪切酶,就不行,如果目的基因来自真核生物的cDNA文库的基因,其基因没有内含子,就可以用.
② 什么是cDNA,有什么作用
cDNA就是环状DNA的意思,c就是circle的首字母,
环状DNA有两种,一种是原核细胞的拟核,拟核就是一个环状的DNA分子,是原核生物邪恶遗传物质;另一种是存在于原核细胞中的除拟核之外的一种小型的环状DNA分子,他也控制一部分形状。
③ 原核生物的目的基因一般不从cDNA中提取,请问为什么
因为原核生物的基因结构里头不包括内含子,直接可以用限制酶切取就好了,cDNA提取的一般是真核生物的目的基因
④ 原核生物的目的基因一般不从cDNA文库中提取 为什么
原核生物的基因不含内含子,因此不需从cDNA文库中获取
⑤ 在基因工程中,为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物,为什么通常要用cDNA而不用
cDNA是用生物体的mRNA通过RT-PCR反转录而成的,cDNA在反转录过程中只能反转录出能够转录成mRNA的外显子,说明cDNA全部的核苷酸序列可以转录成mRNA并且成功翻译成蛋白质。。。
⑥ 为什么cdna文库适用于真核生物,基因组文库适用于原核生物
cDNA文库是通过RNA反转录得来的,真核生物含有内含子(即转录为RNA后会被剪掉不表达的部分),而原核生物不含内含子,所以cDNA文库适用于真核生物,基因组文库适用于原核生物
⑦ 获得原核细胞的目的基因可采用什么方法
1cDNA文库法(即原教材中提到的逆转录法)。cDNA文库,是指汇集以某生物成熟mRNA为模板逆转录而成的cDNA序列的重组DNA群体。虽然可用基因组文库法来获取真核生物的目的基因,但是由于高等真核生物基因组DNA文库比其cDNA文库大得多,相关工作量同样大得多。更为重要的是,在真核生物基因组中合有大量的间隔序列或内含子,但在大肠杆菌等原核生物中没有类似序列的存在,所以大肠杆菌不能从真核生物基因的初级转录本中去除间隔序列,即不能表达真核生物DNA。而在真核生物成熟mRNA中已不存在间隔序列(已在拼接过程中被去除),所以可以以真核生物成熟mRNA为模板,逆转录而成的cDNA可被大肠杆菌表达。因此,在基因工程中,cDNA文库法是从真核生物细胞中分离目的基因的常用方法。
.2。从基因文库中获取 这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了(基因组文库法 就是原教材中的用限制性内切酶直接获取。利用λ噬菌体载体构建基因组文库的一般操作程序如下:① 选用特定限制性内切酶, DNA进行部分酶解,得到DNA限制性片段② 选用适当的限制性内切酶酶解λ噬菌体载体DNA。③ 经适当处理,将基因组DNA限制性片段与λ噬菌体载体进行体外重组。④ 利用体外包装系统将重组体包装成完整的颗粒。⑤ 以重组噬菌体颗粒侵染大肠杆菌,形成大量噬菌斑,从而形成含有整个DNA的重组DNA群体,即文库。)经典解释
3。直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”。这种方法有如用猎枪发射的散弹打鸟,无论哪一颗弹粒击中目标,都能把鸟打下来。鸟枪法的具体做法是:用限制酶(即限制性内切酶)将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别转入不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA(外源DNA)的所有片段分别在受体细胞中大量复制(在遗传学中叫做扩增),从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法吧带有目的基因的DNA片段分离出来。如许多抗虫,抗病毒的基因都可以用上述方法获得。
⑧ 为何要建立CDNA文库而不是DNA文库
刚开始我也不知道,在网络里查了一下差不多懂了:
真核生物基因组DNA十分庞大,其复杂程度是蛋白质和mRNA的100倍左右,而且含有大量的重复序列. 采用电泳分离和杂交的方法,都难以直接分离到目的基因.这是从染色体DNA为出发材料直接克隆目的基因的一个主要困难.
高等生物一般具有105种左右不同的基因,但在一定时间阶段的单个细胞或个体中,都尽有15%左右的基因得以表达,产生约15000种不同的mRNA分子.可见,由mRNA出发的cDNA克隆,其复杂程度要比直接从基因组克隆简单得多.
⑨ cDNA 和DNA有何区别
cDNA 和DNA的区别:
DNA指的是生物体的主要遗传物质,单体脱氧核糖核酸聚合而成的聚合体,内部有内含子等结构.cDNA是由与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由RNA与DNA经过反转录过程而成反转录的DNA,其内部无内含子等结构,基因克隆中利于在原核生物中表达.
cDNA 和DNA的关系:
cDNA为具有与某RNA链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementary DNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)的作用而合成,并且在合成单链cDNA后,在用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶的作用合成双链cDNA。真核生物的信使RNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来基因的DNA(基因组DNA,genomic DNA)不同而无内含子;相反地对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3′末端的多A序列等的核苷序列上,与exson序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。cDNA同样可以被克隆。