如何确保生物活性

㈠ 用什么方法去掉植物细胞的细胞壁，并且保证细胞膜及内容物的生物活性

去掉细胞壁的植物细胞叫原生质体，保留有细胞活性。
用于植物原生质体游离的酶组成主要是纤维素酶和果胶酶，有时再加入半纤维素酶。酶液浓度一般为纤维素酶1% ~ 2%，果胶酶0.5% ~ 1%。浓度过低，去壁率低，影响原生质体分裂；浓度高则破裂多，产率低，褐化严重，分裂频率低。酶液pH 5.1 ~ 5.8，酶解时间几小时至几十小时不等，以获得足以满足所需原生质体的数量为准。但是，酶解时间过长会造成先前已经游离的原生质体解体、破碎或非目的融合，所以，一般不超过24 h。酶解温度以45 ~ 50℃最佳，但对植物细胞来说太高，一般都在25℃左右酶解。这有利于保持原生质体的活力。酶解处理通常静置在黑暗中进行，偶尔用手轻轻摇晃即可。对于愈伤组织、悬浮细胞等难游离原生质体的材料，可置于低速（30 ~ 50 rpm）的摇床上促进酶解。

㈡ 生物活性的活性检测

材料表面在 SBF 中形成磷灰石的能力能够反应材料在体内的生物活性，具体检测方法如下：
1.SBF 配置
由于SBF 溶液对于磷灰石过饱和，所以配备方法不恰当会导致溶液中磷灰石沉淀产生。整个配备过程需要确保溶液无色、透明，容器表面无沉淀出现，如果过程中产生沉淀，倒去溶液，洗净仪器重新配制。准备一个 1000ml 的塑料烧杯。首先于塑料烧杯中装好 700ml 离子交换蒸馏水、一个适当大小磁子，杯口密封以蒸发皿或塑料薄膜。搅拌并调节水温至 36.5±1.5C。
按表1所列顺序在 36.5C 恒温下逐个溶解第一到第八个化合物，溶解过程
表1 配置1000 ml SBF 溶液时试剂添加顺序、添加量 Order Reagents Amounts Containers Purities（%） Formula weights 1 NaCl 8.035 Weight paper 99.5 58.4430 2 NaHCO3 0.355 Weight paper 99.5 84.0068 3 KCl 0.225 Weight bottle 99.5 74.5515 4 K2HPO4·3H2O 0.231 Weight bottle 99.0 228.2220 5 MgCl2·6H2O 0.311 Weight bottle 98.0 203.3034 6 1.0 M-HCl 39ml Graated cylinder — — 7 CaCl2 0.292 Weight bottle 95.0 110.9848 8 Na2SO4 0.072 Weight bottle 99.0 142.0428 9 Tris 6.118 Weight paper 99.0 121.1356 10 1.0 M-HCl 0-5ml Syringe — — 2.磷灰石形成能力测试
对于密质薄片材料，测出样品尺寸并计算样品表面积精确到 2mm 应用如下公式计算出 SBF 用量：
Vs=Sa/10,
Vs（ml）是 SBF 的体积量，Sa（mm）表示样品的表面积。
对于多孔材料，SBF 的用量应大于上式计算量准备好塑料瓶或烧杯，装入计算出的 SBF 体积量加热到 36.5C， 然后按示意图往里放置样品。 笔记：样品在容器中放置有两种情况，如图 1(a)，1(b)。少数情况下，SBF 溶液会生成同 质磷灰石沉积于样品表面。所以如果样品放置是图 A1(b)种情况，表征实验应该检测样品的 下表面。 四个星期内，分别取出恒温浸透不同时长的各组样品，纯水轻盈洗净。然后将样品放入干燥 器中常温干燥。
图1 SBF中样品浸泡示意图 1.四唑盐（MTT）比色法：
检测细胞存活和生长的方法除前面所介绍的方法外，还可用四唑盐比色法试验（MTT）。此法的原理是：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物，并沉积在细胞中，而细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的蓝紫色结晶物，用酶联免疫检测，以在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反应活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。
●0.25%胰蛋白酶消化细胞使其成为单细胞，用含0.1%胎牛血清的RPMI培养基配成1x10^9个/L的但细胞悬液，将细胞接种于96孔培养板中，每孔100ul。
●将培养板置CO2培养箱中，在37℃、5%CO2条件下，培养3-5天。
●培养3-5天后，每孔加入MTT溶液10ul，继续置培养箱孵育3-6h，终止培养，加10%SDS-HCl 100ul/孔，37℃培养数小时，将细胞内与细胞周围的MTT颗粒充分溶解。
●用酶联免疫检测仪测定每孔吸光度（OD），选波长490nm。以时间为横轴，OD值为纵轴绘制细胞生长曲线。
用此法测细胞活力，为保证结果的准确性，最好在试验前测定每种细胞的贴比率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，再确定每孔细胞接种数和培养时间，以保证培养终止时不会过满。另外，实验时设空白对照，比色时，以空白孔调零。
3.2.2 CCK-8 法
Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
● 制备细胞悬液：细胞计数
● 接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
● 37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
●加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。或者直接配置含10%CCK8的培养基，以换液的形式加入。
●培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。
●测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。

㈢ 蛋白质具有生物活性的充分条件是什么啊要说到点上啊！

具有生物活性，
要使蛋白质具有活性多肽链要进行修饰、加工等，还要进行折叠具有一定的空间结构
刚合成的多肽链是没有生物活性的。
蛋白质的结构可以分为四个等级。
一级结构：构成蛋白质的单元氨基酸通过肽键连接形成的线性序列，为多肽链。
二级结构：一级结构中部分肽链的弯曲或折叠产生二级结构。
三级结构：在二级结构基础上进一步折叠成紧密的三维形式。三维形状一般都可以大致说是球状的或是纤维状的。
四级结构：由蛋白质亚基结构形成的多于一条多肽链的蛋白质分子的空间排列。
形成肽链只是完成了蛋白质的一级结构。
须经高尔基体和内质网加工后，达到三级结构才有功能。
希望我的解释能对你有帮助。
参考资料： ke..com/view/380971.htm

㈣ 什么是生物活性

1、生物活性，在材料领域里主要指能在材料与生物组织界面上诱发特殊生物、化学反应的特性这种反应导致材料和生物组织间形成化学键合；
2、在生物矿化过程中，主要指生物材料与活体骨产生化学键合的能力，是衡量生物材料的一个重要指标，可通过材料表面在人体模拟体液中形成磷灰石的能力能够反应材料在体内的生物活性；
3、此评价材料生物活性方法的应用可以减少实验所需动物数量，同时增加动物实验的可持续时间。

㈤ 我现在需要一种PH在4左右的缓冲溶液，关键要能保持生物活性，问问什么情况会影响生物活性

PH在4的溶液是酸性较强的溶液，可用于缓冲偏碱性的溶液，要保持生物活性，不能只看溶液的酸碱度，还要结合生物适合在什么环境下生长，有些是适合在偏酸性的环境下生长，有些是适合在偏碱性环境下生长的。另外就是温度和氧气了

㈥ 如何验证一个新化合物的生物活性

这个问题较难。得通过化合物的结构与组成元素等，推知化合物可能有的活性然后加以验证。跟蛋白质比较像就推知有催化等。

㈦ 提取蛋白质时,如何保持它的生物活性

首先是提取物的助剂和提取剂要没有毒性。然后提取时要保证相对平稳的提取环境，避免过酸过碱，高温。低温使提取时间变长，但是低温可以保证其不变性。同时，要注意提取过程中杂质的进入，以及器材尽量低毒无毒

㈧ 高中生物实验中需要保持生物活性才能进行的归纳全一点

观察叶绿体和细胞质流动，植物细胞的质壁分离和复原，观察线粒体

㈨ 能立‎多奶‎粉是如何保护免疫物质生物活性的

它采用了TACHS收奶系统，原奶追‎溯，淘‎汰劣‎质牛奶；针孔冷冻干燥技术，真空环境和低温确保乳铁蛋白和免疫球蛋白活性；离子交换色谱技术，在酸性条件下成功从牛乳中分离出高纯度乳铁蛋白和免疫球蛋白。

㈩ 保存微生物活性的最佳方法是哪一种

低温保存微生物是最好的方法，因为低温会降低微生物的活性减少不必要的能量消耗，所以低温是保存微生物或者生物体最好的方法！