染色时在什么时期染色微生物

1. 微生物的典型生长曲线哪个是染色的最佳时期

调整期：微生物对新的培养环境的适应阶段。主要表现是降糖慢、OD值上升慢，无产物积累。
对数生长期：微生物适应新环境后，开始大量、快速繁殖。主要表现是降糖快，OD值快速上升，开始积累发酵产物。
平衡期：也叫稳定期。微生物生长速度下降，新个体产生与死亡基本平衡。主要表现是降糖仍比较快，OD值变化小，发酵产物大量积累。
衰亡期：随着糖含量下降、产物大量积累和微生物衰老，微生物开始大量死亡。主要表现是降糖慢，产物基本停止积累，OD值下降。发酵过程也基本结束了。

2. 生物刚果红染色法，到底是什么时候加刚果红

常用的刚果红染色法有两种
方法一,先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应
在长出菌落的培养基上，覆盖质量浓度为1 mg/ml的CR（刚果红，下同）溶液，10～15 min后，倒去CR溶液，加入物质的量浓度为l mol/l的NaCI溶液，15 min后倒掉NaCl溶液，此时，产生纤维素酶的菌落周围将会出现透明圈。
（加NaCl的原因：刚果红是结合到培养基的多糖底物，但分解纤维素的细菌可以产纤维素酶，能分解这个多糖底物成为寡糖，这样刚果红就不能结合上去了，氯化钠就可以使结合不牢的刚果红洗去，这样就留下大小不一的透明圈，大的透明圈分解纤维素的能力就强）
方法二，在倒平板时就加入刚果红
配制质量浓度为10 mg/mI的CR溶液，灭菌后，按照每200 mI。培养基加入1 mI。的比例加入CR溶液，混匀后倒平板。等培养基上长出茵落后，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。

3. 历史上建立微生物染色法的科学家是谁

革兰氏染色法的重要意义是：
革兰氏染色法不仅用来观察细菌的形态，而且它还是细菌鉴定的重要方法，
微生物的细胞小且透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。因此，微生物染色技术是观察微生物形态结构的重要手段。

革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。

4. 微生物染色的染色方法

微生物染色方法一般分为单染色法和复染色法两种。前者用一种染料使微生物染色，但不能鉴别微生物。复染色法是用两种或两种以上染料，有协助鉴别微生物的作用。故亦称鉴别染色法。常用的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法，此外还有鉴别细胞各部分结构的（如芽胞、鞭毛、细胞核等）特殊染色法。食品微生物检验中常用的是单染色法和革兰氏染色法。
用一种染色剂对涂片进行染色，简便易行，适于进行微生物的形态观察。在一般情况下，细菌菌体多带负电荷，易于和带正电荷的碱性染料结合而被染色。因此，常用碱性染料进行单染色，如美兰、孔雀绿、碱性复红、结晶紫和中性红等。若使用酸性染料，多用刚果红、伊红、藻红和酸性品红等。使用酸性染料时，必须降低染液的PH值，使其呈现强酸性（低于细菌菌体等电点），让菌体带正电荷，才易于被酸性染料染色。
单染色一般要经过涂片、固定、染色、水洗和干燥五个步骤。
染色结果依染料不同而不同：
石碳酸复红染色液：着色快，时间短，菌体呈红色。
美兰染色液：着色慢，时间长，效果清晰，菌体呈蓝色。
草酸铵结晶染色液：染色迅速，着色深，菌体呈紫色。
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。
细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。
另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。

5. 微生物染色时到底是哪一步盖盖玻片，是，（ 制片→固定→媒染→染色→脱色→复染→水洗→干燥→镜检）那步

是镜检那一步。你的描述不恰当，微生物染色不包括镜检。
你可以这样理解：微生物观察分成制片和镜检两步。
所以你的描述最好是这样：
制片：固定→媒染→染色→脱色→复染→水洗→干燥
镜检：盖盖玻片→滴加香柏油→观察
这样的话你就很好理解了。

6. 微生物的染色

机制：对细菌细胞壁的详细分析，为解释革兰氏染色的机制提供了较充分的基础。目前多用物理机制来解释革兰氏染色现象。革兰氏染色结果的差异主要基于细菌细胞壁的构造和化学组分不同。通过初染和媒染，在细菌细胞膜或原生质体上染上了不溶于水的结晶紫与碘的大分子复合物。G+ 细菌由于细胞壁较厚、肽聚糖含量较高和交联紧密，故用乙醇洗脱时，肽聚糖层网孔会因脱水而明显收缩，再加上的G+ 细菌细胞壁基本上不含类脂，故乙醇处理不能在壁上溶出缝隙，因此，结晶紫与碘复合物仍牢牢阻留在其细胞壁内，使其呈现蓝紫色。G- 细菌因其细胞壁薄、肽聚糖含量低和交联松散，故遇乙醇后，肽聚糖层网孔不易收缩，加上它的类脂含量高，所以当乙醇将类脂溶解后，在细胞壁上就会出现较大的缝，这样结晶紫与碘的复合物就极易被溶出细胞壁。因此，通过乙醇脱色，细胞又呈现无色。这时，再经番红等红色染料复染，就使G- 细菌获得了新的颜色——红色，而G+ 细菌则仍呈蓝紫色（实为紫中带红）。� 要点：1、 待检菌菌龄应为18-24小时。一般情况下，革兰氏阴性菌的染色反应较为稳定，不易受菌龄的长短影响；而革兰氏阳性菌，有的在幼龄时呈阳性，超过24小时可变为阴性。故培养物越陈旧，菌细胞衰老、死亡，则染色常为阴性，造成错判。
2、 涂片以匀薄为佳，切不可浓厚。过于密集的菌体，因洗脱不匀常呈假阳性。镜检革兰氏染色反应时，要以分散开的细菌着色为准。涂片后不宜用火焰烤干，宜自然干燥；若经火焰固定时，应以不烫手为度，以免菌体受损，致使染色反应不准。
3、 革兰染色操作的关键步骤是对脱色的掌握，脱色时间不足，革兰氏阴性菌可染成阳性菌；脱色过度，革兰阳性菌会染成阴性菌。故应注意掌握，以无紫色脱出时立即水洗。脱色时间按涂沫厚薄、涂片含水量多少适当掌握，涂沫厚、涂片含水少（水洗后沥干水分）时，脱色时间稍长；涂沫薄、涂片含水量多（未沥干）时，脱色时间稍短，在20-30秒内调整。
4、 碘液配制后，应装在密闭的暗色瓶内储存。如因储存不当，部分碘将被挥发或被还原，试液由原来的红棕色变为淡黄色，以至影响固定甲紫的作用，故不宜再用。
5、 革兰氏染色能否获得满意的结果，与操作者的经验有很大关系。操作没有把握或对染液有怀疑时，应以对照菌同时染色。

7. 细菌中革兰氏染色法的过程是怎样的

微生物的染色方法很多,各种方法应用的染料也不尽相同,但是一般染色都要通过制片及一套染色操作程序.
1、制片
在干净的载玻片上滴上一滴蒸馏水,用接种环进行无菌操作,挑取培养物少许,置载玻片的水滴中,与水混合做成悬液并涂成直径约1厘米的薄层,为避免因菌数过多聚成集团,不利观察个体形态,可在载玻片之一侧再加一滴水,从已涂布的菌液中再取一环于此水滴中进行稀释,涂布成薄层,若材料为液体培养物或固体培养物中洗下制备的菌液,则直接涂布于载玻片上即可.
2、自然干燥
涂片最好在室温下使其自然干燥,有时为了使之干得更快些,可将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形.
3、固定
标本干燥后即进行固定,固定的目的有三个：
1）杀死微生物,固定细胞结构.
2）保证菌体能更牢的粘附在载玻片上,防止标本被水冲洗掉.
3）改变染料对细胞的通透性,因为死的原生质比活的原生质易于染色.
固定常常利用高温,手执载玻片的一端（涂有标本的远端）,标本向上,在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3—4次,共约2—3秒钟,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜（不超过60℃）,放置待冷后,进行染色.
以上这种固定法在微生物实验室中虽然应用较多普遍,但是应当指出,在研究微生物细胞结构时不适用,应采用化学固定法.化学固定法最常用的固定剂有：酒精（95%）,酒精和醚各半的混合物,丙酮,1—2%的饿酸等.饿酸能很快固定细胞但不改变其结构,故较常用.应用饿酸固定细胞的技术如下：在培养皿中放一玻璃,在玻璃上放置玻璃毛细管,在毛细管中注入少量的1—2%饿酸溶液,同时在玻璃上再放置湿标本涂片的载玻片,然后把培养皿盖上,经过1—2分钟后把标本从培养皿中取出,并使之干燥.
4、染色
标本固定后,滴加染色液.染色的时间各不相同,视标本与染料的性质而定,有时染色时还要加热.染料作用标本的时间平均约1—3分钟,而所有的染色时间内,整个涂片（或有标本的部分）应该浸在染料之中.
若作复合染色,在媒染处理时,媒染剂与染料形成不溶性化合物,可增加染料和细菌的亲和力.一般固定后媒染,但也可以结合固定或染色同时进行.
5、脱色
用醇类或酸类处理染色的细胞,使之脱色.可检查染料与细胞结合的稳定程度,鉴别不同种类的细菌.常用的脱色剂是95%酒精和3%盐酸溶液.
6、复染
脱色后再用一种染色剂进行染色,与不被脱色部位形成鲜明的对照,便于观察.革氏染色在酒精脱色后用番红,石碳酸复红最后进行染色,就是复染.
7、水洗
染色到一定的时候,用细小的水流从标本的背面把多余的染料冲洗掉,被菌体吸附的染料则保留.
8、干燥
着色标本洗净后,将标本晾干,或用吸水纸把多余的水吸去,然后晾干或微热烘干,用吸水纸时,切勿使载玻片翻转,以免将菌体擦掉.
9、镜检
干燥后的标本可用显微镜观察.
综上所述,染色的基本程序如下：
制片→固定→媒染→染色→脱色→复染→水洗→干燥→镜检.

8. 微生物染色的革兰氏染色要点

1、 待检菌菌龄应为18-24小时。一般情况下，革兰氏阴性菌的染色反应较为稳定，不易受菌龄的长短影响；而革兰氏阳性菌，有的在幼龄时呈阳性，超过24小时可变为阴性。故培养物越陈旧，菌细胞衰老、死亡，则染色常为阴性，造成错判。
2、 涂片以匀薄为佳，切不可浓厚。过于密集的菌体，因洗脱不匀常呈假阳性。镜检革兰氏染色反应时，要以分散开的细菌着色为准。涂片后不宜用火焰烤干，宜自然干燥；若经火焰固定时，应以不烫手为度，以免菌体受损，致使染色反应不准。
3、 革兰染色操作的关键步骤是对脱色的掌握，脱色时间不足，革兰氏阴性菌可染成阳性菌；脱色过度，革兰阳性菌会染成阴性菌。故应注意掌握，以无紫色脱出时立即水洗。脱色时间按涂沫厚薄、涂片含水量多少适当掌握，涂沫厚、涂片含水少（水洗后沥干水分）时，脱色时间稍长；涂沫薄、涂片含水量多（未沥干）时，脱色时间稍短，在20-30秒内调整。
4、 碘液配制后，应装在密闭的暗色瓶内储存。如因储存不当，部分碘将被挥发或被还原，试液由原来的红棕色变为淡黄色，以至影响固定甲紫的作用，故不宜再用。
5、 革兰氏染色能否获得满意的结果，与操作者的经验有很大关系。操作没有把握或对染液有怀疑时，应以对照菌同时染色。

9. 微生物染色的微生物染色的基本原理

微生物染色的基本原理，是借助物理因素和化学因素的作用而进行的。物理因素如细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。化学因素则是根据细胞物质和染料的不同性质而发生地各种化学反应。酸性物质对于碱性染料较易吸附，且吸附作用稳固；同样，碱性物质对酸性染料较易于吸附。如酸性物质细胞核对于碱性染料就有化学亲和力，易于吸附。但是，要使酸性物质染上酸性材料，必须把它们的物理形式加以改变（如改变pH值），才利于吸附作用的发生。相反，碱性物质（如细胞质）通常仅能染上酸性染料，若把它们变为适宜的物理形式，也同样能与碱性染料发生吸附作用。

微生物染色 - 染料的种类和选择

染料分为天然染料和人工染料两种。天然染料有胭脂虫红、地衣素、石蕊和苏木素等，它们多从植物体中提取得到，其成分复杂，有些至今还未搞清楚。目前主要采用人工染料，也称煤焦油染料，多从煤焦油中提取获得，是苯的衍生物。多数染料为带色的有机酸或碱类，难溶于水，而易溶于有机溶剂中。为使它们易溶于水，通常制成盐类。
微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质以及其他化合物组成。所以，微生物细胞表现出两性电解质的性质。两性电解质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带正电，在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。[1]染料可按其电离后染料离子所带电荷的性质，分为酸性染料、碱性染料、中性（复合）染料和单纯染料四大类。
1、酸性染料
这类染料电离后染料离子带负电，如伊红、刚果红、藻红、苯胺黑、苦味酸和酸性复红等，可与碱性物质结合成盐。当培养基因糖类分解产酸使pH值下降时，细菌所带的正电荷增加，这时选择酸性染料，易被染色。
2、碱性染料
这类染料电离后染料离子带正电，可与酸性物质结合成盐。微生物实验室一般常用的碱性染料有美兰、甲基紫、结晶紫、碱性复红、中性红、孔雀绿和蕃红等，在一般的情况下，细菌易被碱性染料染色。
3、中性（复合）染料
酸性染料与碱性染料的结合物叫做中性（复合）染料，如瑞脱氏（Wright）染料和基姆萨氏（Gimsa）染料等，后者常用于细胞核的染色。
4、单纯染料
这类染料的化学亲和力低，不能和被染的物质生成盐，其染色能力视其是否溶于被染物而定，因为它们大多数都属于偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如紫丹类（Sudanb）的染料。

10. 革兰染色时应选择细菌生长的什么时期

革兰氏染色的原理

细菌细胞通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

革兰氏染色的步骤

涂片、晾干、固定、染色、水洗、媒染、脱色、复染。具体操作请点击

影响革兰氏染色结果准确性的关键因素

试剂影响

我们使用的试剂必须是有效的。实验室应当建立有效的试剂管理程序，从试剂的验收到存放、使用、过期后的废弃处理都应有严格规定，确保我们使用的试剂是有效的。

染色菌的选择

菌龄对革兰氏染色结果的影响是十分大的。我们染色过程中选择的菌应该是处于活跃生长期，这样的细菌活性强，生理特征明显，所以染色的结果准确度高，一般情况下不会出现误差。培养时间较长的革兰氏阳性菌，由于细胞老化，甚至有部分菌在染色之前就已经死亡或者自行溶解了，造成细胞壁通透性增加，就会呈现出假阴性。以金黄色葡萄球菌为例，金葡是典型的革兰氏阳性菌，有人曾经统计过培养至不同时间的金葡的革兰氏染色结果，结果表明，在金葡活跃期的22h-26h之间，染色结果的准确率基本可以达到100%，而超过26h之后，准确率就开始下降，培养至36h时，准确率大概会下降30%左右。所以我们在染色时，一定要选择处于活跃期、活性较强的菌落，在检测过程中一定要严格的在国标要求的时间段内进行染色试验，不能提前或者延后。

涂菌的状态

在染色最初的涂布中，在挑取菌体后应该在无菌水上涂成薄薄的菌膜。而在涂布过程中，若是菌体堆积，也会极大影响染色结果的准确性。菌落堆积过多，往往菌体之间变得毫无缝隙，而其细胞壁的成分影响造成了脱色的情况不佳，容易产生假阳性的结果。同时，在初染、媒染及复染的过程中，应将染液覆盖整个菌膜，避免一部分菌染色而另一部分菌没有染色。因此在涂片过程一定要将菌膜涂得少而均匀，这样能达到最佳效果。

媒染时间

媒染时间对革兰氏阴性菌的染色结果有很大影响。由于媒染时间过长，结晶紫在碘液长时间作用下过分牢固结合在菌体细胞壁上，影响了酒精的脱色效果，从而会导致这种假阳性的效果。以典型的革兰氏阴性菌大肠埃希氏菌为例，有人做过统计，媒染时间严格控制在40s-60s之内，染色结果准确率基本可达到100%，而超过60s准确率会有一定的降低，若媒染超过100s，准确率甚至可降低接近20%左右。因此在媒染过程中一定要注意媒染时间，控制在50-60s为宜。

酒精脱色

酒精脱色也是一个对结果影响较大的操作过程。革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌最主要的差异是细胞壁肽聚糖层厚度和结构，革兰氏阴性菌细胞壁肽聚糖层很薄，脂多糖含量高因此在酒精脱色时，细菌细胞壁的多糖成分会被酒精溶解，增大了细胞壁的通透性，结晶紫及碘复合物就很快被酒精洗脱，之后就会被沙黄复染呈红色；而阳性菌肽聚糖层厚，脂多糖少，酒精只能起到脱水效果而无法进入，这样结晶紫和复合物就无法洗脱出来使细胞呈紫色。因此，酒精脱色时间短，脱色效果不佳，会导致阴性菌菌体内的结晶紫和复合物不能有效的全部洗脱出来，就会出现明显的误差，使阴性菌出现假阳性。而洗脱时间过长，也会导致阳性菌的细胞壁被酒精破坏，导致细胞内的紫色被洗脱，呈现假阴性。因此洗脱时间也是革兰氏染色的关键环节。洗脱时间应当严格控制在20s-30s之间，同时保证洗脱效果。