为什么对实验动物进行微生物控制

‘壹’ 如何保证实验动物出现的变化只能用于实验要探究的因素引起的

环境因素对实验动物机体具有“有利”和“有害”两个方面的作用。一方面环境因素是实验动物生存的必要条件，动物通过新陈代谢同周围环境不断地进行物质和能量交换，同时动物经常接受外界环境刺激产生免疫反应增强体质，促进生长；另一方面环境因素也存在对动物机体有害的各种因素，动物处于有害因素作用下，虽然有一定适应环境变化的能力或产生免疫反应来消除或减轻这些有害因素的作用，但是有害因素作用超过一定水平，就会对动物机体产生直接或间接危害，动物各种功能就会失调，引起各种疾病甚至死亡。环境条件不仅影响实验动物的质量,而且还直接影响动物实验的科学性、动物反应的敏感性和实验结果的可重复性，所以必须严格控制实验动物的环境条件。
实验动物设施是作为饲养和管理实验动物场所中较大的居住因素。因此，在充分考虑到动物的同时，也要注意到从事实验的研究人员及实际操作的饲养技术人员的安全。还应当考虑到设施周围的公共卫生。在建筑施工时，不仅应有防震、防火的安全措施，还应有空调的自动控制和报警等设备。由于存在选址条件和建筑方面的法令制度以及经济方面等种种原因的牵制因素，所以作为从设计阶段作出综合性判断的总设计者，应该反复与有关实验动物方面的技术人员、实验人员、设计人员等进行充分的商讨。
1. 隔离系统(Insulation system) 是以隔离器(Isolator)为主体及其附属装置组成的饲养系统。用作饲养无菌动物和已知菌动物。工作人员通过隔离器上组装的无菌手套进行操作,不直接接触动物。送入隔离器的空气需经超高效过滤，洁净度达到100级，饲料、饮水、垫料、笼具等都应高压高温灭菌。一切物品的移入均需通过灭菌渡舱，并事先包装消毒。

2. 屏障系统(Barrier system) 这是饲养SPF动物的设施。人、实验动物、饲料、饮水、垫料、空气及其它物品均需进行严格的微生物控制。送入的空气需经初、中、高效三级过滤，洁净度达到10000级，饲料、饮水、垫料经灭菌后方可使用。饲养人员进入屏障系统需经充分淋浴，然后穿上无菌工作服、戴口罩和手套。要利用空气压力差防止污染,即清洁区域（如清洁走廊、SPF动物饲养室、清洁消毒用品贮存室等）空气压力要大于污染区域。在屏障设施内一切操作要实行严格的微生物控制，因为屏障系统内要长期饲养SPF动物,保持不被污染，而人员、物品要经常出入,其中人员又不能彻底灭菌,所以人是最大可能的污染源，因此，对人员的要求要特别严格，要有严密的操作细则。

3. 亚屏障系统(Semi-barrier system) 这是饲养目前我国正在推行的清洁级动物的设施。其送入饲养室的空气也必须经过净化处理，经初、中、亚高效过滤，空气洁净度要求达到100000级。对人、动物、物品等出入的管理与屏障系统大致相同。

近年来空气净化技术发展迅速，种种类型的水平或垂直超净层流架及屏障单元，可以代替净化、屏障的饲养室。工作人员不须淋浴只需要消毒手臂,戴灭菌手套即可操作,这样就大大地简化了进入屏障和亚屏障系统建筑内的复杂程序。此外，由于屏障只维持于笼架的小范围，局部空气净化可以达到很高的要求，在这样小范围内饲养SPF 级或清洁级动物是有一定保证的。

4. 开放系统(Open system) 只能饲养普通级实验动物。它是无空气净化装置的饲养系统，但并非不需要进行严格的环境控制和积极的微生物控制，仍需维持对环境条件的基本要求。饲料、饮水和垫料要求不被污染，饲养室内要有防鼠、防昆虫等措施。

开放系统的各动物室的笼具可以集中洗刷和消毒。经过消毒处理的物品与污染的物品的进出要通过不同路线，并要分开堆放，杜绝交叉。

‘贰’ 实验动物房环境为什么需要严格控制

(1)严格控制实验动物环境可保证动物的健康和标准化。

实验动物标准化由实验动物生产条件的标准化、动物质量的标准化以及动物实验条件的标准化三部分组成。而其中实验动物生产条件和动物实验条件的标准化，就是实验动物环境的标准化。实验动物生产环境不标准，就不能培育出一定质量的实验动物，同样，即使用高质量的实验动物，在不标准的实验动物环境下．也使实验结果产生很大的变化。例如；环境中氨浓度的增高可导致大鼠支原体肺炎的发展率增高：环境的洁净度对人类肿瘤异种移植模型的建立也有一定的影响，隔离环境中饲养的裸鼠异种移植瘤的成活率往往高于层流架的。实验动物环境是实验动物质量标准化的决定因素。因为实验动物环境通过控制微生物。提高微生物学质量；并通过遗传影响因素，保证实验动物遗传学质量。

(2)环境控制可保障实验研究获得正确的结果。

(3)合乎标准的环境．可为实验动物及动物工作者提供适宜的条件，并保障人们身体健康，不受危害因素的伤害。

我们的目的是培育和使用离质量的实验动物，开展生命科学及相关科学研究，同时也应注意在此过程中，潜伏着污染人类环境，危害生命安全的众多因素，例如流行性出血、炭疽、鼠疫、狂犬病等人兽共患传染病．以及应用实验动物进行的感染实验、辐射实验、化学实验等危险性研究，直接威胁着工作人员，甚至周围人群的生命安全。因而我们的研究应以人为本，把“实验动物一环境一人类”的有机体系作为研究对象，保证实验动物科学在安全有效的条件下造福人类。

‘叁’ [急]举例说明生产和加工中控制微生物的手段

在饲养动物的环境中及动物的体表、粘膜和消化道内容物中，均存在着大量种类繁多的微生物和寄生虫，如何控制微生物是特别重要的。一个优良品系的“模型动物”的生产群或实验群，往往由于感染了致病性微生物或寄生虫而全部覆灭并使实验失败的例子是屡见不鲜的。目前,通过微生物学的监察手段,按对微生物控制的净化程度,把实验动物区分为无菌动物、悉生动物和特殊病原体动物和清洁动物四类。

1．无菌动物（Germ free animals）是指机体内外均无任何寄生物（微生物和寄生虫）的动物。此种动物在自然界中并不存在，必须用人为的方法培育出来。其法：一般将临产前的健康动物用麻醉药品或颈椎臼法处死后，立即浸泡在37℃灭菌液中，送进无菌室（或无菌隔离器），按无菌手术进行剖腹，切除带胎子宫（子宫内首先应无菌），将其浸入消毒液里并输送到另一隔离器中，切开子宫取胎，经用灭菌纱布揩拭仔体并断脐（电刀切断）后，放隔离器内人工喂乳或用其它品系的无菌母鼠作保姆供养。象小鼠和大鼠等用人工喂乳非常麻烦，故采用保姆代养较为方便。而象豚鼠因在一定程度上能自力饮乳，故人工哺乳较容易。另外，象禽类、鱼类、昆虫类，因是在卵中无菌的前提下进行的，故用药物将卵周围灭菌后移入无菌隔离器内使其孵化即可，而且，这些动物一般在在出生后能自力采食，故较易育成。

2．悉生动物（Cnotobiotes animals）是指机体内带着已知微生物（动物或植物）的动物。此种动物原是无菌动物，系人为的将指定微生物丛投给其体内，例如使大肠杆菌定居在无菌小鼠体内，在进行微生物检查时，仅能检出大肠杆菌。亦有人工投给二种以上的已知微生物。悉生动物一般分为单菌（Monoxenie）、双菌（Dixenie）、三菌（Trixenie），或多菌（Polyxenie）动物。此种动物同无菌动物一样是放在隔离器内饲育的，但因其带有已知的微生物，故隔离器内有微生物及其代谢产物的污染。例如，人工投给的微生物，除可在饮水中增殖外，还能在隔离器内放出大量的氨气。

3．无特定病原体动物（Specefic pathogen-free animals）是指机体内无特定的微生物和寄生虫存在的动物，简称SPF动物。但非特定的微生物和寄生虫是允许存在的，故其实际上就是指无传染病的健康动物。由于用疫苗和药物进行预防及治疗，或用淘汰带菌动物来作出SPF动物的方法并不实用（既浪费时间，又难保确实除去病原）。故一般大多先培育出无菌动物或悉生动物后，再把其转移到有封闭系统（Barrier System）的设施中饲育繁殖。原则上SPF动物室内是不允许存在病原菌的，但在封闭系统环境中，难免有很多非病原性微生物会逐渐进入动物机体内，故亦有人把这个转移过程称之为通常动物化。SPF动物的祖先是无菌动物，按理来说，无菌动物的子宫内和卵中应该是无菌的，然而，有些病毒实际上是通过亲代传给胎儿的，因此，在作出无菌动物和SPF动物之前，必须充分考虑这个问题。

4．清洁普通动物（Clean conventional animal,CCV）（亦称最低限度疾病动物MOA）或称清洁动物（Clean animal,CL）

来自屏障系统的SPF动物，饲养在设有两条走廊的，温湿度恒定的普通设施中的动物。垫料、饲料、用具等均应经过高压消毒。饮水pH为2.5～2.8，鼠盒上带过滤帽，空气亦应经过一定的过滤，工作人员穿干净服装操作，此类动物的微生物控制标准基本与SPF相同，不同之处为血清病毒抗体检查（脑脊髓炎病毒、鼠肝炎病毒……）经常可检出一定滴度的抗体，但不允许出现临床症状和脏器的病理变化和自然死亡。

普通动物（Conventioal animals）是未经积极的微生物学控制，普遍地饲养在开放卫生环境里的动物。垫料和食物不经高压消毒，饮水为自来水，不喂青饲料。鼠应排除肺炎病毒，沙门氏菌和链球菌，地鼠不应有蛲虫。普遍动物只能供教养和一般性实验，不适用于研究实验。

鲜切蔬菜褐变及微生物的控制
一、褐变的控制：
在鲜切蔬菜加工中，热处理会对组织产生伤害，从而加速产品的败坏。而采用亚硫酸盐处理，又会造成二氧化硫的残留，对人体产生一些不良的影响。因此，在鲜切蔬菜加工中，必须采用其他的方法来抑制酶褐变的发生。
1.化学方法。有望取代亚硫酸盐抑制酶褐变的化学药剂，主要有柠檬酸、抗坏血酸、半胱氨酸、4-已基间苯二酚等。如对去皮切片马铃薯，用0.5%半胱氨酸加2%柠檬酸浸泡3分钟，可爱效控制褐变的发生。采用PH值为5.5的抗坏血酸钠、半胱氨酸及乙二胺四乙酸（EDTA）混合液处理，可有效控制蘑菇的褐变。鲜切茎用莴苣圆片，用1%-5%醋酸溶液或用醋酸含量为6%的食醋处理，都可有效地抑制产品在冷藏和流通期间褐变的发生。
一般防褐变的化学处理，都要包装前进行，并且以几种药剂混合浸渍处理的效果比较好。用防褐变药剂结合可食性涂膜处理，则能取得更好的效果，如鲜蘑菇切片用含1%抗坏血酸和0.2%EDTA的可食膜处理，比单独使用化学防褐变剂或可食性膜包装，都能更有效控制酶褐变的发生。
2.物理方法。鲜切蔬菜采用低氧和高二氧化碳气调包装，可有效控制产品贮藏期间酶褐变的发生。一般适宜的氧气浓度为2%-10%，二氧化碳浓度为10%-20%。如切片马铃薯用20%的二氧化碳加80%的氮气进行气调包装，可有效地控制贮藏期间褐变的发生。
3.酶法。这种方法，是利用蛋白酶对多酚氧化酶的水解作用，从而抑制其活性和酶褐变的发生。目前已分别从无花果、番木瓜和菠萝占提取得到三种蛋白酶，即ficin、papain和bromelain，它们都能有效控制酶褐变的发生。如用ficin抑制马铃薯的褐变，其作用与亚硫酸盐相当。因为菠萝中含有蛋白酶，故使用菠萝汁处理鲜切苹果片，也可有效抑制产品的褐变。
二、微生物生长的控制：
生产上控制微生物的生长的方法主要有以下几种：
1.创造低温条件。造成低温环境，可有效抑制微生物的生长，从而达到保持品质，延长货架期的目的。因此，在鲜切蔬菜的加工、贮存和流通过程中，应尽可能创造适宜的低温条件，一般为0-5℃。
2.使用化学防腐剂。醋酸、苯甲酸、山梨酸及其盐类，可有铲地抑制微生物的生长繁殖。这对那些在低温下仍能生长的腐败菌和致病菌，是一个很有效的控制措施。
3.实行气调包装：采用适当的低氧和高二氧化碳气调包装，能抑制好气性微生物的生长。但是，必须注意避免缺氧环境，防止厌氧微生物的生长和产品本身的无氧酵解而产生异鼓掌。
4.降低PH值。鲜切蔬菜组织的PH值一般为4.5-7.0，正适合于各种腐败菌和致病菌的生长。在鲜切蔬菜中加入适当的醋酸、柠檬酸和乳酸等，可降低蔬菜组织的PH值，抑制微生物的生长繁殖。但一定要掌握好用量。否则，过多的酸会破坏新鲜蔬菜本身的风味。
5.应用生物防腐剂。生物防腐剂，是指来自植物、动物及微生物中的一类抗菌物质。由于鲜发蔬菜为即食产品，化学防腐剂的应用受到一定限制，因此来自生物的天然防腐剂的研究和应用，便日益受到重视。现已发现，乳酸菌的代谢物细菌素或类细菌素，能有效地抑制鲜切蔬菜中嗜水气单胞菌和单核李氏杆菌等有害微生物的生长。

在孵化生产过程中加强对病原微生物的控制
各种病原微生物遇到适宜的环境条件就会迅速而大量地繁殖， 孵化场适宜的孵化温度和湿度为微生物的繁殖提供了良好的条件， 而病原微生物一旦感染了胚胎或雏鸡，就会造成胚胎的早期死亡及雏鸡产品质量的低劣， 轻者造成经济效益的下降，重者威胁孵化场的生存。 可见加强孵化生产过程中的病原微生物控制，已成为孵化场管理工作中最重要的内容。
一、严格控制病原微生物的来源
1.种蛋种蛋要求来自无疫情的健康鸡群所提供， 但在种蛋产出过程中仍有可能被病原微生物污染，除了要求种蛋在种鸡场经过消毒外， 运至孵化场后必须以3倍量的甲醛、高锰酸钾熏蒸消毒1次，经化验总菌数小于20个， 其中主要致病菌，如大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌含量为0，方可放入蛋库贮存。种蛋入孵后，每周对种蛋进行1倍量的甲醛、高锰酸钾熏蒸消毒，以控制细菌的生长。
2.人体人体是病原微生物的主要载体之一， 要求外来人员一律拒绝进入孵化场生产区，本场工人每天入车间要求消毒、淋浴，更换清洗消毒后的工作服、帽子、口罩、拖鞋，出车间也要求淋浴。车间的脏、净区不能串岗， 特殊情况由脏区到洁净区需要淋浴更衣。在接触种蛋、雏鸡前，要先洗手消毒才能操作，无论工作或休息时，严禁对种蛋、雏鸡咳嗽、打喷嚏、吐痰， 以减免细菌的传
播。
3.车辆严禁外来车辆进入场区，本场运蛋车入场要求喷洒消毒， 司机下车通过消毒通道方可进入场区，在卸种蛋过程中，司机不许下车。 运蛋车不准许运输除种蛋之外的其他物品，车厢要求每周至少熏蒸消毒1次。
4.用具孵化场所有用具，如蛋筐、蛋盘、拖布、扫帚等物品， 一经外界进入场区都要消毒后方可使用，以控制由于用具不洁造成病原微生物的传播。
5.包装材料孵化场所用的主要包装材料为雏鸡盒，入场区后要先放入距生产区50米远的库房中先进行薰蒸消毒后才可使用， 严禁任何未经消毒的包装物品进入生产区域。
6.空气空气携带病原微生物更有其随意性， 所检测的大部分病原微生物都是由空气带入的，由于蛋库、孵化厅特定的环境要求有大量的空气流通， 此环节的控制往往成为难点。在管理中，要求对进气孔、过滤网每周不少于3次的卫生清理，尤其对孵化、出雏器的进、出风口要时常保持清洁， 以防细菌循环传播。
二、控制病原微生物的繁殖
由于孵化场特定的温室、湿度等条件， 为细菌繁殖提供了较理想的场所，这就要求管理者从孵化过程的各个环节入手，及时检测细菌的生存状态， 采取各种有效措施切断病原微生物的传播渠道。除了以上所述， 从种蛋入场区严格控制开始，还要注意保持孵化器的清洁卫生，每周不少于2次进行彻底擦拭，尤其进、出风口处，不允许有灰尘。孵化、出雏厅的四周墙壁、地面， 每周不少于3次彻底用消毒液清理，要求所检测的细菌总数不超过32个。出雏后要认真冲洗出雏器，不允许留有异物，消毒要完全彻底，出雏盘要冲洗干净，消毒彻底，以防病原微生物污染下批鸡雏。每次出雏后，要对出雏场地进行彻底清洗、 消毒。由于孵化生产过程有其循环性，因此，要求鸡蛋、入孵、冲洗、 出雏任何一个环节的卫生消毒工作都要做得全面、彻底， 才能从整体上切断病原微生物的传播途径，降低其生存数量，最终达到提高雏鸡质量、增加经济效益的目的。

其他信息参考
http://www..com/s?wd=%CE%A2%C9%FA%CE%EF%B5%C4%BF%D8%D6%C6&lm=0&si=&rn=10&ie=gb2312&ct=0&cl=3&f=1&rsp=1

‘肆’ 实验动物遗传学和微生物学的质量标准化应如何控制

环境质量标准化控制主要是通过环境设施来控制，实验动物设施通过严格控制人流、物流和气流，使得动物所在的环境保持温度、湿度、气流、空气颗粒数、噪音等保持恒定。所以说一个好的实验动物设施对实验动物微生物标准的控制起到至关重要的作用。

遗传质量的控制首要是要保证你有质量合格的种子，然后是要通过人为日常操作时要做好动物的繁殖记录，不要造成遗产污染。

‘伍’ 如何对实验动物进行微生物学控制

按微生物学质量控制的程度或根据微生物净化程度分类,可分为五类：
（1）普通动物（conventional animals）：亦称一级动物,在微生物学控制上要求最低的动物,它要求不携带人畜共患病和动物烈性传染病的病原.因价格低,故教学实验中常用之.
（2）清洁动物（clean animals）：亦称二级动物,除普通动物应排除的病原外,不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原.
（3）无特殊病原体动物（specific pathogen free animals）：亦称三级动物,是指动物体内无特定的微生物和寄生虫存在,但带有非特定的微生物和寄生虫的动物.此类动物应排除一、二级动物所排除的病原外,不携带主要潜在感染或条件致病和对科研实验干扰大的病原.
（4）无菌动物（germ free animals）：是指在动物体内外的任何部位都检不出一切生命体的动物.这类动物系在无菌条件下剖宫产出,又饲养在无菌、恒温、恒湿的条件下,食品饮料等全部无菌.
（5）悉生动物 （gnotobiotes animals）：是指机体内带着已知微生物的动物.此种动物原是无菌动物,系人为将指定微生物丛投给其体内,例如使大肠杆菌定居在无菌小鼠体内,在进行微生物检查时仅能检出大肠杆菌.
依据GB14922-2001《实验动物微生物学等级及监测》划分的实验动物等级,并与寄生虫学等级对应,将实验小鼠和大鼠的微生物等级分为清洁级、无特定病原体级（SPF）和无菌级三个级别,普通级的实验小鼠和大鼠原则上不再使用；豚鼠、地鼠和兔分为普通级、清洁级、SPF级和无菌级四个级别.犬和猴分为普通级和SPF级二个级别.
…………更多内容参见on http://doc.bio1000.com/list-16.html 微生物学技术,病毒分离,病毒图片,真菌培养,真菌繁殖,酵母培养,培养基配制方法

‘陆’ 实验动物遗传学和微生物质量的标准化在实验动物设计有什么意义

实现实验动物标准化（质量控制）应从控制实验动物的遗传、微生物和寄生虫、营养、环境等四方面着手。
实验动物按遗传学控制分类可分为近交系动物、杂交群动物、封闭群动物。实验动物具有明确遗传背景并严格遗传控制的动物，遗传因素会对实验结果进行干扰，甚至通过改变实验动物的遗传结构，使某些特定实验能顺利开展。很多生命科学的研究，要求实验动物的遗传结构有较高的同一性、稳定性和纯合度。
实验动物按微生物控制可分为无菌动物（悉生动物）、无特定病原体（SPF）动物、清洁动物和普通动物。微生物感染对人、动物和实验的影响：（1）引起人畜共患病，影响工作人员的身体健康。（2）引起动物传染病，影响均衡生产，影响动物健康和质量。（3）严重干扰实验结果的可靠性、准确性、重复性。（4）污染环境
实验动物在实验设计的过程中，要对实验动物的遗传学和微生物学进行严格控制，清楚所采用的实验动物遗传学和微生物学特性，有针对性的进行实验设计，保证实验结果的准确性、精确性、可重复性。