⑴ 微生物计数方法有哪些
??测定微生物细胞数目的方法有很多,介绍几种1。血细胞计数法将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数。①此法的缺点是不能区分死菌和活菌。②对压在小方格界线上的细菌,应当取平均值计数。??③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化2。稀释涂布平板法原理:每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。①这一方法常用来统计样品中活菌的数目②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当两个活多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。??因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定。但不适于测定样品中丝状体微生物,例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等。④此法若不培养成菌落,可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上,经固定染色后在显微镜下计数,这样又称涂片计数法。??染色可用台盼蓝,台盼蓝能使死细胞染成蓝色,可分别计数死细胞和活细胞。3。滤膜法滤膜法是当样品中菌数很低时,可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色,并经处理使膜透明,再在显微镜下计算膜上(或一定面积上)的细菌数。??此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数。例如测定饮用水中大肠杆菌的数目:将已知体积的水过滤后,将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色,可根据培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数目。此法也是统计样品中活菌的数目。??4。比浊法原理是在一定范围内,菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大。因此可借助与分光光度计,在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度表示菌量。实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内,否则不准确。??5。显微镜直接计数法在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。”这里说的显微镜直接计数,我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数。再如滤膜法也一样,可以有两种情况。??另外,微生物计数法发展迅速,多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目。
⑵ 微生物计数方法有哪些
测定微生物计数的方法有很多,主要有以下几种:
1.血细胞计数法
将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数.
①此法的缺点是不能区分死菌和活菌.
②对压在小方格界线上的细菌,应当取平均值计数.
③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化
2.稀释涂布平板法
原理:每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落.培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌.
①这一方法常用来统计样品中活菌的数目
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当两个活多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落.因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定.但不适于测定样品中丝状体微生物,例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等.
④此法若不培养成菌落,可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上,经固定染色后在显微镜下计数,这样又称涂片计数法.染色可用台盼蓝,台盼蓝能使死细胞染成蓝色,可分别计数死细胞和活细胞.
3.滤膜法
滤膜法是当样品中菌数很低时,可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器.然后将滤膜干燥、染色,并经处理使膜透明,再在显微镜下计算膜上(或一定面积上)的细菌数.
此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数.例如测定饮用水中大肠杆菌的数目:将已知体积的水过滤后,将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养.在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色,可根据培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数目.
此法也是统计样品中活菌的数目.
4.比浊法
原理是在一定范围内,菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可借助与分光光度计,在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度表示菌量.实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内,否则不准确.
5.显微镜直接计数法
在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法.”这里说的显微镜直接计数,我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数.再如滤膜法也一样,可以有两种情况.
另外,微生物计数法发展迅速,多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目.
⑶ 微生物的快速检测方法有哪些
目前主要普通培养(简称标)般报告要用仪器、核酸检测(PCR)、目前快速检测(主要包括:免疫磁珠、酶联免疫试剂盒、金标检测卡等根据自需求选择
⑷ 测定水中微生物(包括细菌真菌等)数量的方法
器材及培养
材料和试剂
蒸馏水,自来水,取自儿童公园的湖水,牛肉膏蛋白胨琼脂培养基.
仪器或其他用具
灭菌三角烧瓶,灭菌带玻璃塞瓶,灭菌培养皿,灭菌吸管,灭菌量筒.
研究方法
采用平板菌落记数技术测定水中细菌总数.
水样的采取
自来水
先将自来水水龙头用火焰灼烧3min灭菌,再开放水龙头5min后,以灭菌三角烧瓶接取水样,以待分析.
公园的湖水
应取距水面10~15cm的深层水样,先将灭菌的带玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻过来,除去玻璃
塞,水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中取出,最好立即检查,否则需放入冰箱中保存.
细菌总数的测定
自来水
Step1用灭菌吸管吸取1mL水样,注入灭菌培养皿中.共做两个平皿.
Step2分别倾注约15mL已溶化并冷却到45e左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基.并立即在桌上做平面
旋摇,使水样与培养基充分混匀.
Step3另取一个空的灭菌培养皿,倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL,作对照.
Step4培养基凝固后,倒置与37e温箱中,培养24h,进行菌落记数.
公园的湖水
Step1稀释水样,取三个灭菌空试管,分别加入9mL灭菌水.取1mL水样注入第一管9mL灭菌水
内,摇匀,再自第一管取1mL到下一管灭菌水内,如此稀释到第三管,稀释度分别为10-1,10-2,10-3.
Step2自最后三个稀释度的试管中各取1mL稀释水加入空的灭菌培养皿,每一稀释度共做两个培养皿.
Step3各倾注15mL已溶化并冷却到45e左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基并立即在桌上摇匀.
Step4凝固后倒置于37e恒温恒湿培养箱中培养24h.
菌落记数方法
1)计算相同稀释度的平均菌落数.若有大片菌苔生长时,弃用;以无片菌苔生长的培养皿记数.若片状菌
苔大小不到培养皿的一半,其余一半分布均匀,将此一半计数@2.
2)选择平均菌落数在30~300之间的平板.只有一个符合此范围时,以该平均菌落数@稀释倍数.有两
个在30~300之间时,按两者菌落总数比值决定,比值小于2,取平均;比值大于2,取较小的菌落数.
3)若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数@稀释倍数.
4)若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则按稀释度的平均数@倍数.
5)若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,则以最近30或300的平均菌落数@稀释倍数.
微生物的含量能否反应水的营养化程度?
能
欢迎采纳希望帮到你
⑸ 如何采用简易定量测定法检验空气中的微生物
你好!
测环境中的沉降菌,对角型摆放培养基平板,20分钟左右,置于恒温培养箱里面培养3至7天,取出后计数,就能得到空气中微生物总量了
如有疑问,请追问。
⑹ “便携式微生物快速定量检测仪”使用简单、便捷可随时随地使用检测,无需专业培训,可直接现场出数据。
现在比较流行的,微生物快速检测系统RVLM快速定量检测多种微生物,主要由摇摇箱和摇摇瓶组成,可以对空气,液体水,固体食物中的微生物种类和含量进行定性和定量检测,主要是通过微生物在摇摇瓶中不同颜色来区别微生物种类和个数,最少可以检测出一个微生物的含量。详细情况可以咨询 http://www.byxy.com.cn
⑺ 我们有什么办法测量微生物生物量
1.直接计数测定 根据微生物种类,有血球计数板和细菌计数板;或者用电子计数器计数
2.比浊法 根据菌悬液的浓度在一定范围内与光密度成正比,可以用分光光度计测OD值,用OD值表示样品菌液浓度
3.核酸计数法 荧光定量PCR技术
4.活菌计数法 MPN和平板计数法
由于测定方法的限制,前几种计数结果不太准确,目前应用广泛的是第四种
对粪大肠菌群和光合细菌可用MPN,对其他微生物可用平板计数法
⑻ 常用测定微生物生长量的方法有几种
v常用测定微生物生长的方法有:1)称干重法。可用离心法或过滤法测定。优点:可适用于一切微生物,缺点:无法区别死菌和活菌。2)比浊法。原理:由于微生物在液体培养时,原生质的增加导致混浊度的增加,可用分光光度计测定。优点:比较准确。3)测含氮量,大多数微生物的含氮量占干重的比例较一致,根据含氮量再乘以6.25即可测得其粗蛋白的含量。4)血球计数板法。优点:简便、快速、直观。缺点:结果包括死菌和活菌。5)液体稀释法。对未知菌样作连续的10倍系列稀释,经培养后,记录每个稀释度出现生长的试管数,然后查mpn表,再根据样品的稀释倍数就可计算其中的活菌含量。优点:可计算活菌数,较准确。缺点:比较繁琐。6)平板菌落计数法。取一定体积的稀释菌液涂布在合适的固体培养基,经培养后计算原菌液的含菌数。优点,可以获得活菌的信息。缺点:操作繁琐,需要培养一定时间才能获得,测定结果受多种因素的影响。
⑼ 纯净水微生物检测方法
电导率越低,水越纯。电导率很低是不是说明水中的微生物也不存在了呢?微生物检测等很长时间才出结果,要是能够通过这样的方法检测纯净水的话,那就可以省了很多微生物检测步骤.
在现代食品安全速测技术中确实有利用电导变化原理来测量微生物含量的方法,叫做:Bactometer系统,是一种用于估计微生物数量的新方法
比较快速的方法是有的,设备也比较先进,可能用的并不多
例如:直接外荧光滤过技术(DEFT)
即用胶系统(SimPlate)
Bactometer系统
Malthus微生物快速测试仪
ATP生物发光技术(BL)
微量量热法
接触酶测定仪
放射测量法
奥地利Sy-Lab公司的BacTrac4300和BioTrac4200自动微生物快速检测系统可以根据微生物在生长过程中利用低电导率的大分子物质(如蛋白质,多肽及碳水化合物等)进行新陈代谢,生成低分子带电荷的分解物,使电导率发生变化,电信号经放大后显示并记录,检测系统每10分钟检测一次电导率的变化,由计算机实时监控并自动给出结果。因此,只要先用标准方法对比做出标准曲线,就可以达到快速定量检测菌数的目的。对于致病菌或某些特殊应用场合,则不需要做标准曲线,如有电导率显着突变,则可以判断为初筛阳性,用标准方法进一步确认。
其特点是:
1。采用独创的测量培养基电导(M值)和电极电导(E值)结合的方法,测量相对电导率变化,使灵敏度大大提高,E值测量法尤其适用于一些高盐分(高电导率)的选择性增菌培养基,使电导率法用于致病菌快速初筛成为可能。
2。对于难以测量电导变化的微生物,如酵母和霉菌,直接电导测量经常会出现假阴性。Sylab公司采用测间接电导率的方法,通过测量KOH吸收微生物代谢产生CO2后电导率的变化反映微生物的生长情况,检测灵敏度大大提高,杜绝假阴性可能。
3。灵敏度高。最低可检测出0.2-1个/mL(克)样品。
4。可检测样品种类广。可检测常见的各种食品、化妆品、药品、环境拭子等,还可用于微生物代谢、防腐及消毒效果研究等。
5。检测的微生物项目多。可检测常规微生物项目(菌落总数、大肠菌群、酵母和霉菌总数)及致病微生物(沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌等)。
6。检测速度快。样品含菌量越高,出结果越快,只需4-24小时即给出结果。大肠菌群最长12小时出结果。
7。检测步骤简单。厂家提供特殊配方的培养基,您只需制备好培养基,将样品加入培养基中,放入仪器,然后启动程序即可自动出结果。对于液体样品无需复杂前处理,固体样品只需进行必要的均质和稀释即可。不需要将样品进行梯度稀释,不需要人工计数,轻松完成每天繁琐的微生物检测工作,省时省力。
8。针对中国市场,厂家可以只提供干燥培养基,单次检测成本低廉,特别适合中国国情。
9。基于Windows系统的智能化软件,可对单个检测瓶进行控制,特别适合HACCP企业进行风险评估分析。
10。与标准方法相比,符合率达到90-97%,完全能满足检测机构和企业对快速检测的需要。
11。该方法通过欧洲各国的认证。
⑽ 高中测定微生物数量的方法
1、计数器测定法:
即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内,用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3),因而根据计数器刻度内的细菌数,可计算样品中的含菌数。本法简便易行,可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数,也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:
电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化,小孔仅能通过一个细胞,当一个细胞通过这个小孔时,电阻明显增加,形成一个脉冲,自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确,但它只识别颗粒大小,而不能区分是否为细菌。因此,要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法
常用的有平板菌落计数法,是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液,作一系列的倍比稀释,然后将定量的稀释液进行平板培养,根据培养出的菌落数,可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高,是一种检测污染活菌数的方法,也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意:①一般选取菌落数在30~300之间的平板进行计数,过多或过少均不准确;②为了防止菌落蔓延,影响计数,可在培养基中加入O.001%2,3,5一氯化三苯基四氮唑(TTC);③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验,是最常用的活菌计数法。
4、比浊法
比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比,与光密度成正比,所以,可用光电比色计测定菌液,用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷,但只能检测含有大量细菌的悬浮液,得出相对的细菌数目,对颜色太深的样品,不能用此法测定。
5、测定细胞重量法
此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重;干重法系单位体积培养物经离心后,以清水洗净放人干燥器加热烘干,使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品,是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
6、测定细胞总氮量或总碳量
氮、碳是细胞的主要成分,含量较稳定,测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。此法适于细胞浓度较高的样品。
7、颜色改变单位法(colour change unit,简称CCU)
这种方法通常用于很小,用一般的比浊法无法计数的微生物,比如支原体等,因为支原体的液体培养物是完全透明的,呈现为清亮透明红色,因此无法用比浊法来计数,由于支原体固体培养很困难,用cfu法也不容易计数,因此需要用特殊的计数方法,即CCU法。它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标,来计数微生物的相对含量的,下面以解脲脲原体为例,简单介绍其操作:
(1).取12只无菌试管,每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。
(2).在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液,充分混匀,从中吸取0.2ml加入第二管,依次类推,10倍梯度稀释,一直到最末一管
(3).于37度培养,以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU,也就是支原体的最大代谢活力,比如第六管出现颜色改变,他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.
一般来说,比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数,但是对支原体这样比较特殊的微生物,用CCU法比较合适。
测定微生物生长的方法很多,各种方法均有其优缺点,也不是在任何情况下都适用。在微生物学工作中一般常用的是平皿菌落计数法、计数器法和比浊法。至于哪种方法比较适合你,得根据你的具体条件而定。