痰标本微生物如何培养

1. 痰培养标本怎么留才正确

留痰培养标本：

1、取痰前一天要多喝水，有条件的可以做雾化使痰液稀释，易于排出。

2、在早晨空腹祛痰比较好。先用清水漱一下口，保持口腔卫生，有假牙的需要取下来，然后用力咳嗽，最好是深咳，将呼吸系统深部的痰液吐出来，吐到容器内，容器一定是无菌的干燥的，然后收取痰液后拧紧，立即送到检验科。

3、用气管穿刺法来进行对厌氧菌的培养。

4、痰液留取应立即送去检查，避免污染。在室温下不应该超过两小时，另外如果没有条件立即送检，应在4度的冰箱内保存24小时内处理。

5、当检查结核分枝杆菌时，为了提高阳性率应收集24小时内各时间段的痰液。

(1)痰标本微生物如何培养扩展阅读：

痰培养的临床意义：

该项检查适用于各种不明原因的呼吸道感染疾病。

痰液培养出致病菌后，进行菌种鉴定，可得出相应的病原菌。常见的致病菌有：

1、革兰阳性菌：肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌、放线菌、奴卡菌、厌氧球菌、白喉棒状杆菌等。

2、革兰阴性菌：卡他布兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、假单胞菌、军团菌等。

3、培养分离出一些真菌，有助于真菌性感染的诊断。

4、做病毒分离：可分离到某些病毒，如分离到禽流感病毒H5N1，则可诊断为禽流感。

2. 如何提高临床微生物检验标本的采样正确率

一、 血液标本的采集
1、 皮肤消毒程序： a.75%酒精清洁局部皮肤30s以上。b.待皮肤干后，再用1%-2.%碘酊作用30s或10%碘伏作用90s以上，从穿刺点中心部位向外画圈消毒，范围不应小于3cm（直径），且不能用手指触摸消毒后的皮肤。c.皮肤碘酒干后（约1min），穿刺采集血液，采血量成人10-20ml，婴幼儿1-2ml。儿童3-5ml。d.培养瓶消毒程序：70%酒精擦拭血培养橡皮塞，作用60s；用无菌棉签清除橡皮塞表面残余酒精。用注射器无菌采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。立即送检，切勿冷藏。一般情况下可把血培养瓶放20-22℃。不放冰箱。
2、注意事项：a.怀疑菌血症应尽早采血，体温上升（38.5℃）采血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机。b.对已经使用抗菌药物，而又不能停药者，也应在下次用药前采血。切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本，也不能从静脉导管及动脉插管中取血。c.培养基与血液之比以10:1为宜，以稀释血液中的抗生素，抗体等杀菌物质；有人主张对接受抗菌药物治疗的病人，培养基与采血量之比可为20:1或大于这个比例。d.近年研究表明，将血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。e.每例至少采血两次，间隔0.5-1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。f.疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人，以肘动脉或股动脉采血为宜，除在发热期采血外，并要多次采血（24h3-4次）和增加采血量（可增加10ml）。g采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。h如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。
二、骨髓的采集
1、采集方法：在病灶部位或髂前（后）上脊处严格消毒后抽取骨髓1ml，注入血培养瓶内。
2、注意事项：a.骨髓内含有大量的单核巨噬细胞系统的细胞，因而骨髓培养对伤寒病人的诊断较血培养优越。b.用于怀疑细菌性骨髓炎病人。
三、静脉导管标本的采集
1、采集方法：a.常规导管部位皮肤消毒。b.无菌方法从病人体内拔出静脉导管，剪下导管尖端5cm，放入无菌瓶中。立即（15min内）送检，避免标本干燥。4℃保存不超过2小时。
2、注意事项：a.剪下的导管立即接种血平皿，在血琼脂平板上交叉滚动4次。然后弃之。可提高阳性率。b.肉汤反复冲洗导管腔内，冲洗液做定量培养。
四、呼吸道痰标本
1、采集方法：a.清晨起床后用凉开水漱口多次，以除去口腔内大量杂菌，用力咳出肺深部的脓痰，置于清洁干燥容器中送检。b.痰量极少者可用45℃3%-5%的氯化钠溶液约5ml雾化吸入min,进行导痰。对于咯痰量少的幼儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管，当其咯痰后用无菌棉棒采集标本。c.咳嗽无力或昏迷病人，可用吸痰管经鼻腔或口腔经气管腔内吸引痰液送检。d.气管切开者可以深入透气孔中取痰。e.可用支气管镜直接在病灶部位采集高浓度的病原菌。f.用无菌导管经鼻腔插入气管镜内，缓慢注入无菌蒸馏水5ml，取出导管。留取患者在3h内咳出的痰液，放入无菌容器中送检。
2、注意事项：a.痰标本的采集以晨痰为准，此时患者痰量较多且含菌量也多。b.标本采集后立即送检，若不能及时送检者，可暂存4℃冰箱。若晚1-2h接种，会失去苛氧菌，并使得革兰阴性菌过分生长。c.可接受的标本：痰；支气管灌洗液，支气管刷，支气管活检；肺吸出物和肺活检。不能接受的标本：唾液；24h留的痰（结核杆菌培养除外）；拭子。d.痰标本的质量评价：（用显微镜筛选）在低倍镜下，检查鳞状上皮细胞，至少10个视野，集中在有白细胞处，合格标本为白细胞与鳞状上皮细胞比例大于2:1。
五、鼻咽喉拭子标本
A.用湿的拭子（生理盐水）；需插两个鼻孔；深入3.3cm左右，转动4-5次；以上用于诊断金黄色葡萄球菌暴发时的鼻带菌者。
B.咽拭子、口腔拭子（1）采集方法（到细菌室取专用拭子）a.患者清水漱口后，由检查者将其舌外拉，用棉拭子将咽后壁或悬雍垂的后侧反复擦拭数次；b.化脓性扁桃体炎、口腔念珠菌病时，直接用棉拭子在病灶部位擦拭；c插入运送培养基中立即送检，防止干燥。
(2)注意事项a.棉拭子应避免触及舌、口腔黏膜和唾液;b.采集标本前数小时不可用消毒药物漱口或接触病灶局部。
六、胃肠道
1、粪便a.采集方法选取脓血、黏液粪便2-3g，液体粪便取絮状物1-2ml。盛于灭菌瓶中或蜡纸盒中及时送检。b.注意事项①标本要采集新鲜的，陈旧标本影响阳性检出率；②切忌粪尿混合；③若要分离阿米巴，标本要立即送检并注意保温；④运送培养基可提高阳性率；⑤分离难辨梭菌时需选不成形或水样便；⑥霍乱弧菌、大肠杆菌Ο157感染的腹泻便则为水样便或血性便；⑦标本在病理早期或治疗前采集；⑧一般认为用抗菌药三天后，标本培养病原菌阴性。
2、肛拭子在无法获得粪便的情况下，可用经无菌甘油水或无菌生理盐水湿润的肛拭子插入肛门4-5cm（幼儿2-3cm）处，轻轻旋转擦取直肠表面黏液后取出，置运送培养基中送检。

3. 痰标本中的病原微生物

简单概括为，晨痰，漱口/刷牙，用力咳出。
最关键的是，每个低倍镜视野，鳞状上皮细胞＜10个，白细胞＞25个（或者鳞/白的比例＜1:2.5），可视为合格标本

4. 痰标本如何接种

痰是诊断某些呼吸道疾病的依据之一。通过观察痰的性状可以大致上辨别疾病的类型,对痰液进行培养还能发现致病微生物以及药物敏感性，对治疗疾病有帮助。查痰如此重要，因此病人应掌握正确的留痰方法，否则将会直接影响痰检结果
正确留取痰标本的方法是：
1.病人留痰标本前用清水漱口，以清除口腔内的食物残渣及部分杂菌
；
2.做深呼吸数次后，收腹用力咳出来自支气管深部的脓样或粘液样痰液，痰量不少于3毫升，避免留取唾液或鼻咽部分泌物；
3.留痰标本要使用专用的痰盒，并及时送实验室检查，以免干燥妨碍检查；
4.在治疗期留痰培养标本时，应在停药48小时后留取
。
5.无痰或少痰者应使用浓盐水刺激排痰；或拍背咳嗽使痰液排出。
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5. 痰培养微生物总在变化是院内感染吗

痰培养的痰标本是否合格？每个低倍镜视野下有多少上皮细胞和白细胞？

6. 痰标本污染率高，敏感细菌容易死亡，为了提高痰标本送检质量，以下哪些是正确的

就目前的微生物学细菌培养现状来说，痰标本微生物学培养的临床意义很低，因为痰标本受到的影响因素非常多，也很容易污染。但是痰标本的送检率很高，因为痰标本相对容易获得。

7. 痰培养样本要求是什么

痰培养的采集及要求

痰培养操作流程

样本接收
1、标本识别与病人基本信息
2、 申请单内容与标本类型核对
3、标本外观与容器密闭性检查
肉眼筛选
1、合格标本(脓性)：黄色、灰色、血性、铁锈色，浑浊、稠厚，呈现团块状的标本；
2、不合格标本(唾液性)：无色、白色、有黑色小点，清稀，呈现泡沫状，或者是有明显食物渣滓、纸屑灰尘、泥土的标本；
3、混合性标本：既有脓性成分又有唾液成分的痰标本。
镜下筛选
混合性标本：1、先进行洗涤，分离出脓性成分，再镜检；2、脓细胞>25个/HP且复层鳞状上皮<10个/LP的标本为合格标本，可进入下一步程序；而脓细胞<10个/HP或复层鳞上皮>25个/LP的标本为不合格标本，应拒收。
儿科痰标本：直接镜检做细胞学筛查。
显微镜检验
镜检原理：免疫学原理
镜检方法：先低倍镜再油镜，收寻20~30个视野中脓细胞聚集处，集中而不稠密，且周围无鳞状上皮细胞或无大量成团状分布的细菌球的区域为读片区。
镜检内容：认真收寻脓细胞胞浆中有无吞噬的细菌，或者结节状脓细胞团块中有无菌丝的包裹，记录细菌的染色排列特征，菌体特征（如粗细、长短、扭曲）。
注意区分粘附与吞噬
注意辨认经抗生素治疗后形态变异了的细菌（小球体、巨球体、丝状体、斑驳染色）
镜检的免疫学原理
人体生理腔道粘膜中、粘膜下，以及无菌部位分布的免疫细胞膜上的Toll样受体种类及分子多态性程度不同。
粘膜中，由于菌群建立过程，伴随着免疫耐受过程的形成，这些部位Toll样受体种类相对单一，分子多态性程度低，可识别的异源性分子种类少，因而对多数正常菌群产生免疫耐受，表现为无应答。
当机体被微生物感染时，就会激发机体的免疫系统，从而产生免疫应答。在细菌和真菌的感染中，侵袭性感染是最主要的感染类型。人体对侵袭性感染的主要免疫机制就是细胞渗出——包括早期的固有免疫（中性粒细胞的浸润）和后期的适应性免疫（免疫调理和细胞毒作用）。整个过程都始终贯穿着白细胞的趋化、包裹、吞噬、消化等过程和胞内吞噬、多细胞包裹是易于辨认的具有重要意义的免疫现象。只要观察白细胞与微生物之间的“斗争”，我们就能正确区分“敌我双方”关系。
因而，具有吞噬和包裹现象的微生物就是感染菌。无吞噬现象的则可能为定植菌，也可能为感染菌（例如感染早期产生荚膜的细菌具有抗吞噬作用）。
痰液的接种
培养基基本组合：血平板、巧克力培养基（含万古霉素）、麦康凯
特殊补充
怀疑为军团菌的加种BCYE-а培养基
怀疑为百日咳的加种Boudet-Gengou培养基
怀疑为肺炎支原体感染的加种Hayflick双相培养基
怀疑为结核的接种L-J培养基或Middlebrook7H-10
痰培养环境
苛养菌：35℃，5%CO2环境，相对湿度＞70%
普通细菌：35℃，普通大气环境，相对湿度＞70%
丝状真菌: 28℃，普通大气环境，相对湿度＞80%
读碟：目标菌落选取
结合镜下特征与菌落特征综合分析，并挑选菌体特征与菌落特征一致的细菌作为目标菌，作传代纯培养和进一步的鉴定药敏。
鉴定方法选择
1、手工试验：微量生化管、API系列
2、半自动：ATB（32种）、Autoscan、国产鉴定系统（上海复兴、珠海迪尔、珠海美华、山东新科、合肥恒星、温州康泰、杭州天和等15~30种）
3、全自动：梅里埃V2C（60种）BD phoenix100（45种）西门子MicroscanwalkAway-96（30种）
药敏试验
1、手工：纸片扩散法、MIC法、E-test法、 琼脂稀释法
2、半自动与全自动：简化双浓度折点法、ATB药敏简化、浓度分布MIC法、Phoenix100、Microscan、Autoscan、
3、动力学计算MIC法：VITEK2药敏
综合报告
1、未染色标本直接涂片结果：有无脓细胞、脓细胞数量、上皮细胞数量、二者比例、有无真菌孢子／菌丝、有无寄生虫等；
2、Gram染色镜检结果：包括脓细胞数量、上皮细胞与胞外正常菌群数量与污染程度、脓细胞胞内吞噬细菌／真菌孢子的情况，炎性包裹物内细菌和真菌的存在情况、脓细胞和炎性包裹物内的细菌／真菌的染色特征、形态特征和排列特征；
3、细菌鉴定结果、特殊耐药机制、药敏试验测试结果；
4、检验结果与临床诊断和治疗相关性的评述与建议。
关于痰培养的阴性报告
1、不合格标本：退回，或直接涂片：鳞状上皮＞25/LP，白细胞＜10/LP，提示标本为唾液；
2、涂片染色：白细胞内未见明显细菌吞噬；
3、细菌培养：未分离出致病菌；
4、合格但未见吞噬标本；
5、直接涂片：可见较多/大量白细胞。

8. 微生物培养方法

微生物培养法是在人为条件下繁殖微生物的方法。根据微生物的种类以及对养料、温度、氧气、水分、酸碱度等环境条件的要求不同，并联系生产和实验上的具体要求，可有不同的培养方法。可分好气培养法和厌气培养法两类。中海生物技术的培养基一是好气微生物培养法，常用：①摇床培养法，即将微生物接种于盛有液体培养基的三角瓶后，放在恒温培养室中的摇床上作有节奏的振荡，使空气不断进入培养液中，促其良好生长;②浅盘培养法，又称表面培养法，在盘内放一浅层培养基，使微生物能够充分接触空气，而有利于生长繁殖，但此法所需空间大，并且容易污染杂菌;③深层培养法，适用于好气微生物的大规模发酵培养，在大容积的液体培养基中，通入无菌空气，并不断搅拌，可使微生物充分接触空气，迅速繁殖并积累代谢产物。二是厌气微生物培养法，实验室常用化学还原剂或抽气机吸除培养基中的分子氧，也有用静止状态的深层培养法。在生产中常用密封式发酵罐或不通风的固体发酵法。

9. 如何正确留取痰标本

痰是诊断某些呼吸道疾病的依据之一。通过观察痰的性状可以大致上辨别疾病的类型,对痰液进行培养还能发现致病微生物以及药物敏感性，对治疗疾病有帮助。查痰如此重要，因此病人应掌握正确的留痰方法，否则将会直接影响痰检结果 正确留取痰标本的方法是： 1.病人留痰标本前用清水漱口，以清除口腔内的食物残渣及部分杂菌 ； 2.做深呼吸数次后，收腹用力咳出来自支气管深部的脓样或粘液样痰液，痰量不少于３毫升，避免留取唾液或鼻咽部分泌物； 3.留痰标本要使用专用的痰盒，并及时送实验室检查，以免干燥妨碍检查； 4.在治疗期留痰培养标本时，应在停药48小时后留取 。 5.无痰或少痰者应使用浓盐水刺激排痰；或拍背咳嗽使痰液排出。 分享到: 相关新闻最新科普知识睡眠呼吸暂停有哪些危害？睡眠呼吸暂停有什么症状？阻塞性睡眠呼吸暂停有哪些病因？什么是睡眠呼吸暂停？如何防范秋季呼吸道疾病

10. 如何采集痰标本其注意事项是什么

痰标本的采集：
1.痰标本的来源：下呼吸道痰、气管抽吸物（TA）、支气管肺灌洗吸出液、支气管刷子、气管内管、肺穿刺或活组织等。
2. 使用容器：用洁净、广口、无菌、加盖、密封、防渗漏，一次性使用，可向检验科索取。
3. 采集方法：清晨痰量多，含菌量亦大，可先用洁口液，再用凉开水或生理盐水漱口，以除去口腔中细菌，深吸气后用力咳出1－2口痰于广口无菌瓶中，痰量极少可用45℃10%氯化钠溶液雾化吸入导痰。
已经建立人工气道，如气管切开或气管插管者，应戴无菌手套或用无菌镊子取一次性无菌专用吸痰管，一头缓慢插入气管致隆突（叶支气管）水平，一头接电动吸引器，螺旋式抽吸，吸引痰液。

注意事项：
当疑为呼吸道感染性疾病时，应让患者取晨痰送检。取痰前用清水反复漱口后用力自气管咳出第一口痰于灭菌容器内，立即送检。对于痰量少或无痰的患者可采用支气管镜或气管穿刺法取得医学教`育网搜集整理。为了避免污染菌的干扰，最好连查3次。注意事项：
①采集标本以清晨为佳，为减少口腔正常菌群污染标本，采集前应充分漱口。
②取痰标本应是深部的痰液而不是唾液，否则会影响检查结果。
③作结核分枝杆菌检查，痰量要多或留取24小时痰液，婴儿肺结核要用胃管取痰。
④约有1/4～1/2肺部感染患者可能发生菌血症，应同时作血培养。
⑤ 对一些特殊患者可采用支气管镜采集法及气管穿刺法取痰。