① 微生物到底是什么意思
微生物释义:
形体微小、构造简单的生物的统称。绝大多数个体用显微镜才能看到,广泛分布在自然界中,如细菌、立克次体、支原体、衣原体、病毒、单细胞藻类、原生动物等
人体内有两个基因组,一个是从父母那里遗传来的人基因组,编码大约2.5万个基因;另一个则是出生以后才进入人体、特别是肠道内的多达1000多种的共生微生物,其遗传信息的总和叫“微生物组”,也可称为“宏/元基因组”,它们所编码的基因有100万个以上。
两个基因组相互协调、和谐一致,保证了人体的健康。因此,在研究基因与人体健康关系时,一定不能忽略共生微生物基因的研究。
(1)微生物提取是什么意思扩展阅读:
微生物对水的处理
(1)废水中的脱氮除磷,废水中氮、磷是造成水体富营养化的根源,利用生物脱氮除磷已进行了广泛的研究。生物脱氮中,有反硝化能力的微生物有变形杆菌、微球菌属、假单胞菌属、芽胞杆菌属等。
(2) 废水中有机物的降解,有机物的生物降解中,白腐菌是值得一提的。白腐菌是一类提子真菌,在废水治理中,其降解污染物的范围十分广泛。
(3)废水中重金属的去除,由于藻类对重金属离子具有较强的富集能力,利用其生物吸附作用可从工业污水中去除有毒、放射性金属和回收稀有、贵重金属。除了人工合成的有机汞制剂外,细菌具有合成甲基汞的能力,即生物甲基化,它会使汞的生物毒性大大增强。
而另一些微生物又可使甲基汞降解、还原,降低其毒性。该法具有高效、经济、简便、选择性好等优点,尤其适用于低浓度及一般方法不易去除的金属。
土壤的微生物修复与治理
工业的迅速发展,大量的人造化学物质排放到环境中,对资源和环境构成越来越严重的破坏。化石燃料的开采和使用,工业三废的排放,给我们赖以生存的环境造成难以估量的污染。
土壤中的微生物,包括细菌、真菌、放线菌和藻类等,在它们中有一些具有农药降解功能的种类。我们可以利用其特点,使细菌由于其生化上的多种适应能力和容易诱发突变菌株。
从而在农药降解中占有主要地位,例如假单胞菌对敌敌畏;曲霉菌、镰孢霉菌对敌百虫;芽孢杆菌、曲霉、青霉、假单胞杆菌、瓶型酵母等对甲胺磷。
② 生物发酵工程微生物提取
直接发酵法生产赖氨酸的主要微生物有谷氨酸棒状杆菌、黄色短杆菌、乳糖发酵短杆菌的突变株等 3种
亮氨酸是用谷氨酸棒杆菌发酵,但用蛋白质水解法生产L一亮氨酸较多.
细菌分泌物、代谢产物是对身体有益,能维持和增进健康,这些细菌就是有益菌(益生菌);细菌制造出腐败物、毒素,企图致病、致癌,那么这些细菌就是有害菌;还有一些中间性菌,具有双重性:既有好的生理作用,又有潜在的致病性,称为双向菌.
自然界的细菌都是混杂在一起的
可以用培养基分离
主要方法是平板法
③ 植物、动物、微生物DNA提取有什么不同
主要在细胞破壁那儿有区别,然后在纯化的时候不同材料的去除杂质的侧重不同
④ 生物提取法和微生物发酵法的区别
这区别挺大的。
生物提取法是用物理或/和化学的方法,把生物组织中原先就有的某个或某些成分提取出来。
微生物发酵法是利用微生物中多种酶的作用,把原料中的某些成分转化为另外的成分,然后再提取出来。
就是说,生物提取法中没有化学变化,而微生物发酵法存在化学变化,
⑤ 微生物DNA提取的原理和方法是什么
细菌染色体DNA的抽提
一、 目的
熟练掌握抽提细菌DNA的一般方法
二、原理
要进行重组DNA 实验,就离不开外源基因的纯化,而外源基因主要来源之一就要直接从生物的染色体DNA上制备,所以制备高质量的染色体DNA样品经常为基因工程实验所需要,抽提细菌染色体DNA的方法目前已有许多种,这里所介绍的两种方法:一适用于枯杆菌染色体的抽提;另一种方法则适用于大肠杆菌染色体的制备。
基因工程实验所需要的基因组DNA 通常要求分子量尽可能大,以此增加外源基因获得率,但要获得大片段的DNA 非易事,细菌基因组DNA通常是个很大的环状态DNA,而在抽提过程中,不可避免的机械剪切力必将切断DNA,如果要抽提到大的DNA 分子,就要尽可能地温和操作,减少剪切力,减少切断DNA 分子的可能性;分子热运动也会减少所抽提到的DNA分子量,所以提取过程也要尽可能在低温下进行。另外细胞内及抽提器皿中污染的核酸酶也会降解制备过程中的DNA,所以制备过程要抑制其核酸酶的活性。
另外制备的细菌染色体DNA 必须是高纯度的,以满足基因工程中各种酶反应的需要,制备的样品必须没有蛋白污染,没有RNA,各种离子浓度应符合要求,这些在染色体制备时都应考虑到。
大肠杆菌染色体DNA 抽提首先收集对数生长期的细胞,然后用离子型表面活性剂十二烷基磺酸钠(SDS)破裂细胞,SDS 具有的主要功能是:(1)溶解细胞膜上的脂类和蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜;(2)解聚细胞膜上的脂类和蛋白质,有助于消除染色体DNA上的蛋白质;(3)SDS 能与蛋白质结合成为R1—0—SO3R2—蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS 能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它除干净。以免影响下一步RNase的作用。破细胞后RNA经RNase消化除去,蛋白质经苯酚、氯仿:异戊醇抽提除去经洒精沉淀回收DNA。枯草杆菌染色体制备与上类似,但略加修改的方法要适合教学要求。枯草杆菌是格兰氏阳性菌,所以在SDS 处理前需要使用溶菌酶裂解细胞壁。溶菌酶是一种糖苷水解酶,它能水解菌体细胞壁的主要化学成份肽聚糖中的β—1,4 糖苷键,有助于细胞壁破裂,破裂的细胞壁在SDS 的作用下溶菌,同时用蛋白酶K 消化蛋白质,能解离缠绕在染色体DNA上的蛋白质,然后加入一定量的醋酸钾,使蛋白质变性,通常离心除去,在这期间可加入核糖酸酶消化RNA,最后用乙醇回收DNA。
此二种方法抽提的细菌染色体DNA,无RNA和蛋白质污染,可用于限制性内切酶消化,分子再克隆等。但在下一步实验前,要测定其DNA的浓度,常用测定DNA 浓度的方法,是溴化乙锭电泳法;当DNA 样品在琼脂糖凝胶中电泳时,加入的EB 会增强发射的荧光。而荧光的强度正比于DNA 的含量,如将已知浓度的标准样品作电泳对照,就可估计出待样品的浓度。
三、材料
(一)菌株
大肠杆菌C600、枯草杆菌BR151。
(二)仪器
电泳设备、恒温水浴锅、低速离心机、恒温振荡器、紫外检测仪。
(三)器皿
玻璃离心管(10 毫升)、移液管(10毫升、5毫升)、微量取样器、烧杯、玻璃棒、试管、三角瓶
(四)试剂
(1)LB 完全肉汤培养液:1%蛋白胨 0.5%酵母粉 0.5%NaCl pH7.5。
(2)BY 培养液:1%蛋白胨 0.5%牛肉膏 0.5%酵母粉 0.5%葡萄糖 0.5%NaClpH7.5
(3)SET 溶液:20%蔗糖;50mmol/L Tris—HCl(pH7.6) 50mmol/L EDTA。
(4)20%SDS
(5)饱和酚
(6)氯仿:异戊醇(24:1 V:V)
(7)预冷无水酒精
(8)TE 溶液
(9)RNase溶液
(10)5mol/L 醋酸钾
(11)蛋白酶K 20mg/ml
四、实验步骤
1、取大肠杆菌C600单菌落于5 毫升LB培养液中,37℃振荡培养过液。
2、将上述菌液1%接种量接种于20 毫升LB 培养液中,37℃摇床振荡培养过夜。
3、已培养好的菌液,收集于10毫升的离心管中,在低速离心机上4000r/min离心10分钟,去上清,留沉淀菌体。
4、用5 毫升的SET 溶液悬浮细胞,加入20% SDS 1毫升,37℃下轻摇过夜,使细胞裂解。
5、加入等体积的饱和酚,上下轻轻摇匀,放置5 分钟后,在低速离心机上3500r/min离心10 分钟。
6、取上相,加入1/2 体积的饱和酚,1/2体积的氯仿异:戊醇,上下翻转均匀,3500r/min离心10 分钟。
7、取上相,加入等体积的氯仿:异戊醇,如第6步,离心。
8、取上相于一干净离心管中,另在一个50 毫升的烧杯中加入15毫升预冷无水酒精,把上述的上相液沿着玻棒慢慢倒入酒精中,并温和地搅拌以使DNA 附着于玻棒上。
9、挑起DNA,再放于干净的酒精中洗涤,然后把DNA溶于50 毫升TE 中,待测浓度。
(二)枯草杆菌染色体DNA 的抽提
1、在BY 斜面上划线活化枯草杆菌BR151。
2、挑一环已活化的BR151 菌株于20 毫升的BY培养液中,37℃摇床振荡培养过液。
3、过夜培养物,收集10 毫升于离心管内,在低速离心机上3500r/min离心10 分钟。
4、沉淀菌体加入0.75 毫升溶菌酶液(8 毫克溶菌酶/1毫升SET),振荡器上悬浮细胞,悬浮液移入1.5 毫升离心管,室温30 分钟。
5、在反应液中加入0.15毫升SDS溶液,蛋白酶K 溶液5 微升,37℃水浴10 分钟后转入75℃水浴5 分钟。
6、加入5mol/L 醋酸钾0.3 毫升,上下翻转均匀,置于冰上30 分钟,期间不时摇动。
于台式高速离心机离10000r/min10 分钟。
7、上清液移入另一离心管,弃沉淀。重复第六步。
8、上清液移入5 毫升的离心管内,缓慢加入2倍体积的无水酒精,DNA呈絮状沉淀。用一灭菌牙签,挑起DNA 沉淀,溶于50微升TE中。待检查浓度。
9、若无絮状沉,则把其置-20℃冷冻3 小时(或-70℃冷冻30 分钟),取出离心10 分钟(10000rPm),去上清,晾干,加入50ul TE溶解(取20ul 点样测定)。
(三)染色体DNA 制备样品浓度测定
1、按实验一方法制备琼脂糖凝胶(0.6%)
2、分别取标准浓度的λDNA 0.05ug、0.1ug、0.15ug、0.2ug,加相应的加样缓冲液混合好,点样。
3、取2 微升染色体DNA 样品点样(冷冻离心获取的DNA样品取50 微升点样),打开电泳仪电泳,待溴酚兰进入凝胶2 厘米后,停止电泳,紫外灯下观察,估计样品DNA浓度。
五、结果讨论与问题
紫外光下观察DNA 样品纯度,计算出制备的DNA总量和浓度。
1、SDS 在抽提DNA 过程有哪几个作用?
2、在本实验中未加入RNase,那么样品中应出现什么情况?
⑥ 瘤胃微生物的提取方法简介和预处理
瘤胃微生物一般提取是平板划线法分离,然后挑取菌落纯化。
预处理你可以离心瘤胃液或者纱布过滤。我就做这方面的,有问题可以再问。
⑦ 微生物代谢产物的提取浓缩和鉴定
提取?有什么现有设备吗?比如说FAST之类的…大概过程就是提取,然后旋转蒸发仪浓缩,最后定容下,最后HPLC就行了…我觉得GC不好用,如果不易气化根本不可性…
⑧ 微生物DNA提取的方法有哪些
一、试剂准备
1.溶液Ⅰ:50mM葡萄糖,25mM Tris-HCl(pH 8.0),10mM EDTA(pH 8.0).1M Tris-HCl(pH 8.0)12.5ml,0.5M EDTA(pH 8.0)10ml,葡萄糖4.730g,加ddH2O至500ml.在10 lbf/in2高压灭菌15min ,贮存于4℃.
2.溶液Ⅱ:0.2N NaOH,1% SDS.2N NaOH 1ml,10%SDS 1ml,加ddH2O至10ml.使用前临时配置.
3.溶液Ⅲ:醋酸钾(KAc)缓冲液,pH 4.8.5M KAc 300ml,冰醋酸 57.5ml,加ddH2O至500ml.4℃保存备用.
4.TE:10mM Tris-HCl(pH 8.0),1mM EDTA(pH 8.0).1M Tris-HCl(pH 8.0)1ml,0.5M EDTA(pH 8.0)0.2ml,加ddH2O至100ml.15 lbf/in2高压湿热灭菌20min,4℃保存备用.
5.苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)
6.乙醇(无水乙醇、70%乙醇)
7.5×TBE:Tris 碱54g,硼酸27.5g,EDTA-Na2·2H2O 4.65g,加ddH2O 至1000ml.15 lbf/in2高压湿热灭菌20min,4℃保存备用.
8.溴化乙锭(EB):10mg/ml
9.RNase A(RNA酶A):不含DNA酶(DNase-free) RNase A的10mg/ml,TE配制,沸水加热15min,分装后贮存于-20℃.
10.6×loading buffer(上样缓冲液):0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯青FF,40%(W/V)蔗糖水溶液.
11.1% 琼脂糖凝胶:称取1g琼脂糖于三角烧瓶中,加100ml 0.5×TBE,微波炉加热至完全溶化,冷却至60℃左右,加EB母液(10mg/ml)至终浓度0.5μg/ml(注意:EB为强诱变剂,操作时带手套),轻轻摇匀.缓缓倒入架有梳子的电泳胶板中,勿使有气泡,静置冷却30min以上,轻轻拔出梳子,放入电泳槽中(电泳缓冲液0.5×TBE),即可上样.
⑨ 植物,动物,微生物DNA提取有什么不同
从提取的角度来说
1、样本状态不同,植物一般是叶片、种子;动物一般是组织、血液;微生物就各种各样的都有
2、提取所用的试剂不同,不同样本要用不同的试剂配方
3、提取步骤不同
可以考虑用DNA提取试剂盒,我们实验室主要用吉恩特系列的,效果挺稳定
⑩ 提取DNA的方法在不同微生物间有何区别请具体举例说明
DNA提取的几种方法
(1).浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离.在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.
(2).阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.
(3).苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相.离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA .此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出.此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .
( 4).水抽提法:
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.