A. 涂布平板法的注意事项
微生物的分离平板涂布法和平板划线法分离微生物的区别
由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …），然后分别取不同稀释液少许，与已溶化并冷却至 45 ℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出出菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。 稀释涂布法：
优点：可以计数，可以观察菌落特征。
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。
一般用于平板培养基的回收率计数！！
微生物平板涂布法有以下注意事项：
1、整个过程需要保证在无菌条件下进行。试管、枪头等仪器设备都需要提前经过灭菌环节才可以使用。
2、接种环使用前应当在酒精灯上灼烧至红热，以保证灼烧充分。
3、蘸取少量菌液,先在培养皿上划第一条,注意不要转动接种环。
4、在稀释过程中要充分混匀，，吸取100ul到平板上，然后用烧好的涂布棒均匀涂抹开，各个方向都可以涂布，涂布完灼烧。
5、注意力度大小适宜，不应划破培养基的表面。
6、每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。(1)微生物如何涂板扩展阅读涂抹平板计数法的操作方法是：先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设三个重复）。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。
B. 微生物涂抹法
一样的，但用棉签涂抹后放入的是生理盐水中作为第一稀释度。
C. 生物，稀释涂布平板法和平板划线法
稀释涂布平板法：由于将含菌材料现加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平台法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。
平板划线法：平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表点击此处添加图片说明面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
D. 稀释涂布平板法分离微生物的原理
平板法分离培养的原理就是,平板上的一个单菌落都是由初始的一个微生物繁殖产生的,也就是说,一个单菌落里的所有微生物都是相同的.这样,在划线或稀释涂平板后挑取单菌落,那么就获得了一个纯的微生物群体.
明白否?
划线通过一系列交替或者连续的划线,将接种针上的菌再培养基上划开,这样可以保证有单独的菌来生长出一个单菌落.
单菌落你都不会挑么?板上长出单菌落后挑取到培养液中培养,获得的就是纯的一个系的微生物了.
还不明白?
E. 微生物涂抹怎么做
工作人员手部微生物检测，涂抹法
不能将棉球放到培养基里面培养，这样根本没办法计数。将棉签放入10ml灭菌生理盐水中，混匀，取1 ml到平板中，再到平板(45℃的培养基约15ml)。37℃培养48h，计数。
假如手很脏，细菌很多，则将棉签放入含10ml灭菌生理盐水的采样管后，取1ml到9ml无菌生理盐水中(相当于10倍稀释)，再取1ml该稀释液到灭过菌的平板中，再倒入培养基。
F. 跪求 土壤微生物的测定：涂布平板法 测定细菌、真菌和放线菌的实验步骤（详细）
1. 土壤样品采集
采集一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土1--
2cm，以无菌铲采土充分混匀后用无菌塑料袋分装。
2. 培养基的制备与平板制作
牛肉膏蛋白胨、高氏1号和马铃薯蔗糖琼脂固体培
养基培养基的溶解与平板制作
3、平板的制作
每组准备三套无菌培养皿，在皿底注明稀释液浓度。
融化锥形瓶中的培养基，放在45-50℃ 恒温水浴锅中备用
倒入45-50℃融化的培养基约1/4-1/3培养皿高度。培养皿平放在桌上顺时针、逆时针轻轻转动，混匀皿中物质。培养基冷凝后即成平板。
4、制备稀释液（无菌操作）
(1)制备土壤悬液：
称取土样10g，迅速倒入90mL无菌水三角瓶中，振荡5~10min，使土样充分打散，即成为10-1的土壤悬液。
(2)稀释：
用1mL无菌移液器吸取10-1的土壤悬液1.0mL，放入9.0mL无菌水中即为10-2稀释液，如此重复，可依次制成10-2~10-8的稀释液。注意：操作时每一个稀释度换用一个移液管，以减少稀释中的误差。
5.培养
将接种好的细菌、放线菌、霉菌平板倒置，即皿盖朝下放置，于28~30℃中恒温培养，细菌
培养1~2d，放线菌培养5~7d，霉菌培养3~5d。观察生长的菌落并计数。
G. 环境样品梯度稀释,涂布平板法分离微生物时,如何选择不同稀释梯度样品的涂布顺序 为什么
稀释你肯定知道了，按照10，100，1000，10^4, 10^5 etc 稀释吧。稀释之后的涂布当然是从稀释度最高的开始呀，也就是从单位体积中菌数最少的的，也就是最稀的开始。如10^5是最后一个，就从它开始，然后，10^4，10^3, 100，10. 因为一般都用一根玻璃棒，只有这样，才能不影响结果。
想想你如果有10倍开始涂布，玻璃棒上沾的一点点，会对后边的100倍的影响很大。
H. 微生物镜检涂片步骤
单染色法，以观察菌体形态为主。
1、把泡在酒精中的片子用镊子夹出，放在酒精灯上点燃，去掉片子上的酒精及油脂。
2、片子冷却后，蘸一接种环发酵液，均匀地涂在片子上。
3、涂后的片子，于酒精灯火焰上过几遍，使所涂的细菌固定在片子上，注意，片子温度不易过高，以不烫手背为主，温度过高，会使菌变形，影响观察结果。
4、片子涂菌的位置，滴几滴结晶紫染液，使染液完全覆盖住所涂的菌，染1分钟左右。
5、用水冲洗片子至无紫色水流下后，进行火焰烤干。
6、镜下观察。在涂点处滴1滴香柏油，于油镜下观察菌体形态。
I. 简述如何利用浇注平板法和涂布平板法分离微生物，这两种方法的适用范围分别是什么
两种办法都是先要做好固体培养基的配制，之后灭菌后备用。
1、先将样品按10稀释法进行系列稀释，用的是无菌水即可。根据样品中微生物数目的多少确定用哪三个连续稀释度，一般先10的负6次方到10的负8次方。
2、涂布法，将灭菌的培养基冷却到摄氏50度左右时，倒入无菌的空平板，冷却凝固后备用；将稀释的样品取1毫升放于凝固的固体培养基表面，之后用无菌的玻璃涂棒分布均匀。
3、浇平板法：将1毫升稀释的样品放于空白的无菌培养皿，之后将冷却到45-50度之间的培养基倒入，轻摇混匀、凝固。
4、待完全凝固后倒置培养，即可获得单一菌落。
适用范围：
浇平板法适用于兼性微生物的培养，涂布法适用于好氧微生物的培养。最好是单细胞微生物，或有孢子或芽孢。
J. 微生物实验平板制作方法
（1）培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。分为液体培养基和固体培养基。
制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。
（2）常用消毒方法：煮沸消毒法、紫外线照射、巴氏消毒法和化学药剂消毒。
（3）常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法。
培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌和消毒方法依次：高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法。
（4）平板培养基的制备：计算、称量、融化、灭菌、倒平板。
（5）接种方法：平板划线法和稀释涂布法。
倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管（瓶）塞（也可将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞则不必夹在手中）。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速例入培养基约15mL，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。
平板划线操作：
①挑取他含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种。
②划A区：将平板倒置于煤气（酒精）灯旁,左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯（这时皿盖朝上，仍留在煤气灯旁)，右手拿接种环先在A区划3—4条连续的平行线(线条多少应依挑菌量的多少面定）。划完A区后应立即烧掉环上的残菌，以免因菌过多而影响后面各区的分离效果。在烧接种环时，左手持皿底并将其覆盖在皿盖上方(不要放入皿盖内)，以防止杂菌的污染。