如何筛选营养缺陷型微生物

A. 营养缺陷性的定义是什么筛选缺陷型菌株的一般步骤是什么并举例说明如何检出缺陷型

营养缺陷型（auco troph）：因丧失合成某些生活必需物质的能力，不能在基本培养基上生长的，突变型菌株。营养缺陷型auxotroph 指微生物等不能在无机盐类和碳源组成的合成培养基中增殖，必须补充一种或一种以上的营养物质才能生长。一如胸间氮苯缺陷型所表现的那样。另外对这样的性质则称为营养缺陷性（auxotrophy）。营养缺陷型是作为原养型的对应词来使用。

B. 如何得知某微生物是否为哪种氨基酸的异养型微生物

通常称这种微生物为“某氨基酸营养缺陷型菌株”。就是这种微生物不具有(或失去了)合成某种氨基酸的能力，必须从外界吸收这种氨基酸才能生长。
要鉴别这种微生物是否为某种氨基酸的营养缺陷型，一般是用这种氨基酸的结构类似物代替这种氨基酸，添加到培养基中。
氨基酸的结构类似物在结构上与这种氨基酸相似，可使微生物错认为是这种氨基酸并进行肽链合成，但又不具备这种氨基酸的功能，合成的肽链没有其应有的功能，微生物不能正常生长。
如果微生物能够在这种培养基上生长，它就不是该氨基酸的营养缺陷型。如果在这种培养基上不能正常生长，它就有可能是这种氨基酸的营养缺陷型。

C. 微生物筛选营养缺陷型有什么意义

微生物中筛选营养缺陷型一般有两个意义：
1、营养缺陷型有可能是突变体，要筛选基因突变体第一步一般都会从营养缺陷开始。
2、主要应用于筛选转基因受体。

D. 培养营养缺陷型微生物的培养基

答案选B
基本培养基：凡能满足某一菌种野生型和原养型菌株营养要求的最低成分的组合培养基.
完全培养基：在基本培养基中加入一些富含生长因子的物质,以满足该微生物各种营养缺陷型要求.
补充培养基：在基本培养基中有针对性地加上某一种或几种其自身不能合成的成分,以满足相应营养缺陷型生长的培养基.
限量补充培养法：把诱变处理后的细胞接种在含有微量（＜0.01%）蛋白胨的基本培养基平板上,野生型细胞就迅速长成较大的菌落,而营养缺陷型则缓慢生长成小菌落.若需获得某一特定营养缺陷型,可再在基本培养基中加入微量的相应物质.
在基本培养基中加入抗生素,野生型菌株被杀死,营养缺陷型不能在基本培养基中生长而被保留下来.题目是问“常在什么培养基中加入”注意“常”字.其实其他培养基也可以.

E. 微生物筛选营养缺陷型有什么意义

在理论研究中，营养缺陷型不仅被广泛应用于阐明微生物代谢途径上，而且在遗传学的研究中具有特殊的地位。在转化、转导、原生质体融合、质粒和转座因子等遗传学研究中，营养缺陷型是常用的标菌种。此外，营养缺陷型菌株还是研究基因的结构与功能常用的材料。在生产实践中，营养缺陷型可以用来切断代谢途径，以积累中间代谢产物；也可以阻断某一分支代谢途径，从而积累具有共同前体的另一分支代谢产物；营养缺陷型还能解除代谢的反馈调节机制，以积累合成代谢中某一末端产物或者中间产物；也可将营养缺陷型菌株作为生产菌株杂交、重组育种的遗传标记。营养缺陷型菌株广泛应用于核苷酸及氨基酸等产品的生产。1、阻断代谢途径，积累中间代谢产物2、阻断分支代谢，改变代谢方向，积累另一终端代谢产物3、解除反馈抑制，积累代谢产物4、利用渗漏缺陷型进行代谢调控育种.

F. 微生物问题：营养缺陷性的筛选方法有什么举例说明。。

营养缺陷型微生 物是 指经过诱变处理,使某一菌株丧失合成某些 必需 的营养物质(氨基酸、维生素和碱基等)的能力,从而必须在培养 基中加人相应 的营养成 分才能 正常生 长 的变异菌株。

分离：
1、青霉素浓缩法。
青霉素 能抑 制细菌 细胞壁 的合 成,因此,用青霉素只能杀死生 长繁殖 中的细 菌,而 不能杀死停 止分裂 的细菌。在 只能使野生 型生长而不 能使 突变型 生长 的选 择性液体 培养 基中加人青霉 素,野生型被 青霉 素杀死,突变 型 则不被 杀死 而得 以 浓缩。

2、菌丝过滤法。
先用 诱变 剂处理 真菌 (如脉 胞菌 ) 的分生抱子,然 后接 种到液体培养基 中,不 断给营养液通 气
,刺激分生抱子生长,并 防止它们相互结合在一起。大约 经过l d 的培养,分生抱子萌发,长 出菌丝。然 后用棉 花把 萌发 了的分生抱子过 滤掉,未萌发的分 生抱 子 (死亡 的、需要 较 长 时间萌 发 的和突变为营养缺 陷型 的分 生抱 子 ) 则仍 留在 培养 液 中,以后 每隔一段时间进行过滤
,连续若 干次后,所剩下 的就都是 缺陷 型的或死亡 的分生抱子。通过补充各种成分 鉴定缺陷型

检出：
影印接种法。采用一种 特制的工具—“印章” ,将 在完全培养基上长 出的菌 落的平 皿上“印”一 下,然 后分 别在 完全培养基和基本培 养基 的相 应位 置上 各 印一下,若 在 完全 培养基上生长,而在基本培养基上 不生 长,即认为是营养缺 陷型

G. 论述获得微生物营养缺陷型菌株的方式

采用辐射，化学试剂等因素处理细菌，以提高其变异几率，关键步骤是进行营养缺陷型微生物的筛选工作，营养缺陷型是指通过诱变产生的，由于发生了丧失某酶合成能力的突变，因而只能在加有该酶合成产物的培养基中才能生长的突变株。营养缺陷型的筛选与鉴定涉及下列几种培养基：基本培养基（MM，符号为[-]）是指仅能满足某微生物的野生型菌株生长所需的最低成分的合成培养基。完全培养基(CM，符号为[+])是指可满足某种微生物的一切营养缺陷型菌株的营养需要的天然或半合成培养基。补充培养基（SM，符号为[A]或[B]等）是指在基本培养基中添加某种营养物质以满足该营养物质缺陷型菌株生长需求的合成或半合成培养基。

营养缺陷型菌株不仅在生产中可直接作发酵生产核苷酸、氨基酸等中间产物的生产菌，而且在科学实验中也是研究代谢途径的好材料和研究杂交、转化、转导、原生质融合等遗传规律必不可少的遗传标记菌种。

营养缺陷型的筛选一般要经过诱变、淘汰野生型、检出和鉴定营养缺陷型四个环节。现分述如下：

第一步，诱变剂处理：与上述一般诱变处理相同。

第二步，淘汰野生型：在诱变后的存活个体中，营养缺陷型的比例一般较低。通过以下的抗生素法或菌丝过滤法就可淘汰为数众多的野生型菌株即浓缩了营养缺陷型。

抗生素法 有青霉素法和制霉菌素法等数种。青霉素法适用于细菌，青霉素能抑制细菌细胞壁的生物合成，杀死正在繁殖的野生型细菌，但无法杀死正处于休止状态的营养缺陷型细菌。制霉菌素法则适合于真菌，制霉菌素可与真菌细胞膜上的甾醇作用，从而引起膜的损伤，也是只能杀死生长繁殖着的酵母菌或霉菌。在基本培养基中加入抗生素，野生型生长被杀死，营养缺陷型不能在基本培养基中生长而被保留下来。

菌丝过滤法 适用于进行丝状生长的真菌和放线菌。其原理是：在基本培养基中，野生型菌株的孢子能发芽成菌丝，而营养缺陷型的孢子则不能。通过过滤就可除去大部分野生型，保留下营养缺陷型。

第三步，检出缺陷型：具体方法很多。用一个培养皿即可检出的，有夹层培养法和限量补充培养法；在不同培养皿上分别进行对照和检出的，有逐个检出法和影印接种法。可根据实验要求和实验室具体条件加以选用。现分别介绍如下：

夹层培养法 先在培养皿底部倒一薄层不含菌的基本培养基，待凝，添加一层混有经诱变剂处理菌液的基本培养基，其上再浇一薄层不含菌的基本培养基，经培养后，对首次出现的菌落用记号笔一一标在皿底。然后再加一层完全培养基，培养后新出现的小菌落多数都是营养缺陷型突变株。

限量补充培养法 把诱变处理后的细胞接种在含有微量（＜0.01%）蛋白胨的基本培养基平板上，野生型细胞就迅速长成较大的菌落，而营养缺陷型则缓慢生长成小菌落。若需获得某一特定营养缺陷型，可再在基本培养基中加入微量的相应物质。

逐个检出法 把经诱变处理的细胞群涂布在完全培养基的琼脂平板上，待长成单个菌落后，用接种针或灭过菌的牙签把这些单个菌落逐个整齐地分别接种到基本培养基平板和另一完全培养基平板上，使两个平板上的菌落位置严格对应。经培养后，如果在完全培养基平板的某一部位上长出菌落，而在基本培养基的相应位置上却不长，说明此乃营养缺陷型。

影印平板法 将诱变剂处理后的细胞群涂布在一完全培养基平板上，经培养长出许多菌落。用特殊工具——“印章”把此平板上的全部菌落转印到另一基本培养基平板上。经培养后，比较前后两个平板上长出的菌落。如果发现在前一培养基平板上的某一部位长有菌落，而在后一平板上的相应部位却呈空白，说明这就是一个营养缺陷型突变株。

第四步，鉴定缺陷型：可借生长谱法进行。生长谱法是指在混有供试菌的平板表面点加微量营养物，视某营养物的周围有否长菌来确定该供试菌的营养要求的一种快速、直观的方法。用此法鉴定营养缺陷型的操作是：把生长在完全培养液里的营养缺陷型细胞经离心和无菌水清洗后，配成适当浓度的悬液（如107～108个／ml），取0.1ml与基本培养基均匀混合后，倾注在培养皿内，待凝固、表面干燥后，在皿背划几个区，然后在平板上按区加上微量待鉴定缺陷型所需的营养物粉末（用滤纸片法也可），例如氨基酸、维生素、嘌呤或嘧啶碱基等。经培养后，如发现某一营养物的周围有生长圈，就说明此菌就是该营养物的缺陷型突变株。用类似方法还可测定双重或多重营养缺陷型。

H. 微生物筛选营养缺陷型有什么意义 如题 重点说科研方面的意义 谢谢

微生物中筛选营养缺陷型一般有两个意义：
1、营养缺陷型有可能是突变体,要筛选基因突变体第一步一般都会从营养缺陷开始.
2、主要应用于筛选转基因受体.

I. 营养缺陷型菌株的获得

营养缺陷型是一种生化突变菌株，它的出现是由基因突变引起的。遗传信息的载体是一系列为酶蛋白编码的核酸系列，如果核酸系列中某碱基发生突变，由该基因所控制的酶合成受阻，该菌株也因此不能合成某种营养因子，使正常代谢失去平衡。
营养缺陷型菌株的筛选一般包括诱发突变、后培养、淘汰野生型、检出缺陷型和鉴别缺陷型、生产能力测试等主要步骤。
在筛选营养缺陷型突变株的工作中，常用三种培养基：一是基本培养基，它是仅能满足微生物野生型菌株生长要求的培养基。第二种是完全培养基，它是能满足某微生物所有营养缺陷型菌株营养要求的天然或半合成培养基。第三种是补充培养基，凡是只能满足某种营养缺陷型生长需要的合成培养基么就称为补充培养基。
1.用于诱发营养缺陷型的诱变剂有亚硝基胍,紫外线,亚硝酸等,其中亚硝基胍的诱发突变率极高,一般可达10%以上,另外,随着诱变剂量的提高突变频率也增加.
2.在诱变之后存活的菌体中,存活的营养缺陷型菌株的数量很少,而野生型细胞却大量存在,所以常采用抗生素法和菌丝过滤法来筛选营养缺陷型菌株.
3.经过第二步,野生型的细胞和营养缺陷型细胞数量比例发生很大变化,但是终究还是混合体,要设法把缺陷型菌株从群体分离检出,可用点植对照法,影印法,夹层法,限量补充培养法来分离.
4.缺陷型菌株的鉴定,实际是测定营养缺陷型菌株所需的生长因子种类.鉴定的方法可分为两大类:一种方法是在一个平皿中加入一种营养物质以测定多株缺陷型菌株(10-50)对该生长因子的需求情况.第二种方法是在同一个平皿上测定一种缺陷型菌株对许多生长因子的需求情况,成为生长谱法.