分离生物大分子的注意事项有哪些

❶ 分离，纯化生物大分子的依据是什么其相应的方法和原理是什么

生物大分子的分离纯化方法多种多样，主要是利用它们之间特异性的差异，如分子的大小、形状、酸碱性、溶解性、溶解度、极性、电荷和与其他分子的亲和性等。
 各种方法的基本原理可以归纳为两个方面：
 ①利用混合物中几个组分分配系数的差异，把它们分配到两个或几个相中，如盐析、有机溶剂沉淀、层析和结晶等；
 ②将混合物置于某一物相（大多数是液相）中，通过物理力场的作用，使各组分分配于不同的区域，从而达到分离的目的，如电泳、离心、超滤等。
 目前纯化蛋白质等生物大分子的关键技术是电泳、层析和高速与超速离心。

❷ 物质分离纯化的总体思路是什么在进行生物大分子的分离纯化时应该注意什么

酶分离纯化的一般原则是：保证酶的活性正常保持，不失活，避免在极端条件下操作，如有必要还要添加一定的保护剂。
虽然酶大多是蛋白质，但少数具有生物催化功能的分子并非为蛋白质，有一些被称为核酶的RNA分子也具有催化功能。此外，通过人工合成所谓人工酶也具有与酶类似的催化活性，包括人工合成的DNA。 有人认为酶应定义为具有催化功能的生物大分子，即生物催化剂。
酶的催化活性会受其他分子影响：抑制剂是可以降低酶活性的分子；激活剂则是可以增加酶活性的分子。有许多药物和毒药就是酶的抑制剂。酶的活性还可以被温度、化学环境（如pH值）、底物浓度以及电磁波（如微波）等许多因素所影响。

❸ 如何进行生物大分子的分离提纯

用凝胶过滤层析法
是最好的方法之一。
可以分离不同大小的物质例如蛋白质混合物、胶体混合物等等。
大分子物质先出来，小分子物质后出来。

❹ 请问分子生物学实验室一般有哪些注意事项

很多试剂是有毒的
1，进行核酸电泳的地方
有EB，强致癌
2，蛋白电泳的地方
有丙烯酰胺，神经毒剂
两个东西都是通过皮肤吸收
要小心

❺ 提取生物大分子的基本思路是什么对于dna的粗提取而言

提取生物大分子的基本思路是将被分离的生物大分子与其他物质分开，并加以纯化。

在DNA的粗提取实验中，其原理是DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，而蛋白质此时的溶解度高的特点，可以使DNA与蛋白质分离，形成沉淀析出，通过过滤，得到粗提取的滤出物DNA。再利用DNA不溶于酒精，但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点，进一步提取出含杂质较少的DNA。

❻ 拮抗微生物分离纯化的注意事项

拮抗微生物分离纯化的注意事项：注意防止交叉污染。

操作无菌，先粗筛根据不同的微生物对底物的应用，后复筛定量测相应的酶活。无菌操作、纯培养技术、单孢分离技术、细胞染色技术、显微观察技术，这些是微生物分离纯化操作所必须的技术，也是必须注意的问题。

分离技术主要是稀释和选择培养。

稀释是在液体中或在固体表面上高度稀释微生物群体，使单位体积或单位面积仅存留一个单细胞，并使此单细胞增殖为一个新的群体。最常用的为平板划线法。

如果所要分离的微生物在混杂的微生物群体中数量极少或者增殖过慢而难以稀释分离时，需要结合使用选择培养法，即选用仅适合于所要分离的微生物生长繁殖的特殊培养条件来培养混杂菌体，改变群体中各类微生物的比例，以达到分离的目的。

❼ 设计从生物样品中分离纯化生物大分子实验的原则

这个问题比较大
首先你要确认要分离的生物大分子是什么
核酸\蛋白质\多糖\脂类
各种生物大分子的提取和纯化路线不一样,请标明.
蛋白质多采用层析或者聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法来分离，如果说实验条件不理想，也可以采用盐析的办法，但是只能活得粗提取液，层析的办法有很多种，最好的是采用亲和层析，当然前提是你要找到合适的载体和配基，聚丙烯酰胺凝胶电泳可以适合很多种分离方法，如果按照等电点分离，则可采用等电聚焦，如果使用分子量大小进行分离，则可采用SDS-PAGE，当然，也可以采用双向电泳，同时利用等点点和分子量进行分离。

❽ 在微生物实验中分离纯化操作过程中注意哪些问题

无菌操作、纯培养技术、单孢分离技术、细胞染色技术、显微观察技术，这些是微生物分离纯化操作所必须的技术，也是必须注意的问题。

❾ 分子生物学实验室一般有哪些注意事项

目前，分子生物学飞速发展，分子生物学相关的理论和技术已深入到生命科学的各个领域，一些常用的技术，如基因组DNA的分离纯化，质粒DNA的抽提及纯化，RNA的提取，PCR扩增，Southern blot等成为分子生物学研究的强有力工具，为分子生物学的发展起了巨大的推动作用，然后，这些实验操作技术都涉及到氯仿、DEPC、同位素等有毒有害或具放射性的物质，对环境和人身安全也造成巨大的威胁。因此，弄清这些有害有毒物质的作用，加强实验室安全管理，建立良好的制度和处理，保证分子生物学实验室成为真正的科研阵地。
放射性物质的处理：放射性同位素技术具有灵敏、简便和廉价等优点，在分子生物学实验室应用普遍，但由于放射性同位素的辐射会给人体造成损伤，如果使用不当或操作不规范，会造成环境污染，甚至损伤人员。在进行同位素操作时一定要注意个人防护，包括使用隔离、专用衣帽手套及防护背心、挡板等。对放射性同位素的污染进行安全性教育，实行责任到人的做法，对放射性物质统一保管、集中存放、集中处理的做法。在定购同位素时，根据需要量进行订购。α-31p半衰期为14.5天，在southern blotting应用较广，是危害较大的放射性物质。DNA杂交时，在探针标记、洗膜等几个阶段都涉及同位素。对含α-31p固体废物，放入铁皮箱10个半衰期(约半年)后埋到指定的地点：对于含α-31p浓度较高的液体废物(如首次洗膜液)，在厚实的朔料桶放置8个半衰期后倒入专用的下水道；含α-31p浓度较低的液体废物(如二、三次洗膜液)，则直接倒入专用的下水道。

4.3常见的有毒物质的处理：溴化乙锭、Trizol、丙烯酰氨、DEPC、甲酰氨等毒性高、环境危害大的物质，分类收集后统一处理。

4.3.1 EB(Ethidiunl bromide，溴化乙锭)：EB是一种强烈诱变剂并有中度毒性，应戴手套操作，对于含有EB的溶液也不应直接倒下水道，用后妥善净化处理：EB含量大干0.5μg/ml溶液先用水将EB浓度稀释至0.5μg/ml以下，每100ml溶液加入100mg活性碳。不时轻轻摇荡混匀，室温放置1小时，滤纸过滤将活性碳与滤纸密封在塑料袋中作为有害废物丢弃。或用专用一次性染料清除袋(Gene有限公司)吸附过夜，再焚烧袋子即可。EB接触物，如抹布、枪头等埋入地下。

4.3.2 Trizol：提取组织和细胞RNA的一种重要试剂，在提取RNA时一定要在通风进行。如皮肤接触Trizol，请立即用大量去垢剂和水冲洗，废液埋入地下。

4.3.3 DEPC(Diethylprocarbonate，二乙基焦碳酸酯)：RNA酶的强抑制剂，一种潜在的致癌物质。操作时戴口罩。在通风橱中进行。沾到手上立即冲洗，废液通过废液道排泄。

4.3.4 CHCl3(ChIoroform，氯仿)：常用于DNA和RNA提取，对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有强烈的刺激作用和腐蚀性，易损害肝和肾。操作时戴手套在通风橱里进行，废液收集后埋入地下。

4.3.5 Acrylamide(丙烯酰胺)：DNA测序、SSR及蛋白质分离等技术中作电泳支持物，具神经毒性，聚合后毒性消失。操作时戴手套在通风橱内进行，聚合后的聚丙烯酰胺凝胶没有毒性，可随普通垃圾一起扔掉，千万不要倒入下水道。

❿ 生物大分子的制备前要做好哪些准备工作

生物大分子的制备前要做好哪些准备工作
生物大分子的制备通常可按以下步骤进行：
①确定要制备的生物大分子的目的和要求,是进行科研、开发还是要发现新的物质.
②建立相应的可靠的分析测定方法.主要有两类：即生物学和物理、化学的测定方法.生物学的测定法主要有酶的各种测活方法、蛋白质含量的各种测定法、免疫化 学方法、放射性同位素示踪法等；物理、化学方法主要有比色法、气相色谱和液相色谱法、光谱法、电泳法、以及核磁共振等.
③通过文献调研和预备性实验,掌握生物大分子目的产物的物理化学性质.
④生物材料的破碎和预处理.
⑤分离纯化方案的选择和探索,这是最困难的过程.制备生物大分子的分离纯化方法多种多样,如盐析、有机溶剂沉淀、层析和结晶、电泳、离心、超滤等.目前纯 化蛋白质等生物大分子的关键技术是电泳、层析和高速与超速离心.在实际工作中往往要综合运用多种方法,才能制备出高纯度的生物大分子.
⑥生物大分子制备物的均一性（即纯度）的鉴定.蛋白质和酶制成品纯度的鉴定最常用的方法是：SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦电泳,如能再用高效液相 色谱（HPLC）和毛细管电泳（CE）进行联合鉴定则更为理想,必要时再做N－末端氨基酸残基的分析鉴定.核酸的纯度鉴定通常采用琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯 酰胺凝胶电泳,但最方便的还是紫外吸收法,即测定样品在pH 7.0时260nm与280nm的吸光度（A260和A280）,从A260/A280的比值即可判断核酸样品的纯度.
⑦产物的浓缩,干燥和保存.