如何给生物染色

⑴ 常用微生物染色的方法

检验常用染色法包括 1）革兰氏染色法 2）抗酸染色法 3）美兰染色法 4）异染颗粒染色法 5）细菌鞭毛染色法 6）荚膜染色法芽孢染色法 7)布氏杆菌科兹洛夫斯基染色法 8)结核杆菌荧光染色法等主要染色法 革兰氏染色法染液配制 1。结晶紫染液：称取结晶紫（龙胆紫）14g，溶于95%酒精100ml中，配成饱和液，再取饱和液20ml与1%草酸铵溶液（1g草酸铵溶于100ml蒸馏水溶解即成）80ml混匀即成2。卢戈氏碘液：碘化钾2g于10ml蒸馏水中，再加碘1g，待碘全部溶解后（时间较长）加蒸馏水200ml即成3。95%酒精4。（1）石碳酸复红液：称取碱性复红（碱性品红）4g溶于95%酒精100ml中成饱和液，再取饱和液10ml与5%石碳酸溶液（5ml石碳酸溶于100ml蒸馏水）90ml混匀即成，（2）稀释石碳酸复红液：取石碳酸复红液10ml加入蒸馏水90ml即成染色方法：1。涂片 将菌液直接涂在载玻片上，经培养的菌落要加生理盐水混匀涂片，等待干燥（固定）2。将结晶紫染液滴加在已固定的涂片上，染色1分钟后用水冲去剩余燃料3。滴加卢戈氏碘液1分钟后水洗，在滴加95%酒精脱色，摇动玻片至紫色不在脱色为止（约需1分钟），水洗4。用稀释石碳酸复红液复染30秒至1分钟5。水洗待干，镜检6。革兰氏阳性菌染成紫色，革兰氏阴性菌染成红色

⑵ 微生物染色的革兰氏染色法具体操作方法

1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）自来水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。
7）蕃红梁色液（稀）染10秒钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。
染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

⑶ 微生物染色的染色方法

微生物染色方法一般分为单染色法和复染色法两种。前者用一种染料使微生物染色，但不能鉴别微生物。复染色法是用两种或两种以上染料，有协助鉴别微生物的作用。故亦称鉴别染色法。常用的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法，此外还有鉴别细胞各部分结构的（如芽胞、鞭毛、细胞核等）特殊染色法。食品微生物检验中常用的是单染色法和革兰氏染色法。
用一种染色剂对涂片进行染色，简便易行，适于进行微生物的形态观察。在一般情况下，细菌菌体多带负电荷，易于和带正电荷的碱性染料结合而被染色。因此，常用碱性染料进行单染色，如美兰、孔雀绿、碱性复红、结晶紫和中性红等。若使用酸性染料，多用刚果红、伊红、藻红和酸性品红等。使用酸性染料时，必须降低染液的PH值，使其呈现强酸性（低于细菌菌体等电点），让菌体带正电荷，才易于被酸性染料染色。
单染色一般要经过涂片、固定、染色、水洗和干燥五个步骤。
染色结果依染料不同而不同：
石碳酸复红染色液：着色快，时间短，菌体呈红色。
美兰染色液：着色慢，时间长，效果清晰，菌体呈蓝色。
草酸铵结晶染色液：染色迅速，着色深，菌体呈紫色。
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。
细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。
另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。

⑷ 如何对植物细胞染色

活体染色是利用某种对植物无害的染料溶液对活细胞进行染色的技术。中性红是常用的活体染料之一，它是一种弱碱性pH指示剂，变色范围在pH6.4-8.0之间（由红变黄）。
在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况下呈酸性反应。因此，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固，胞液不能维持在液泡内。因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现象。相反，中性红的阳离子，却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。

⑸ 给细菌染色的方法都有几种，怎么操作，都用复红染色吗麻烦一一讲来，详细点，本人初学者.

细菌染色分为活菌染色跟死菌染色两种。其中死菌染色分为正染色跟负染色。正染色又包括普通染色与特殊染色两种。普通染色有简单染色法、革兰氏染色法和抗酸染色法；特殊染色分为芽孢染色法、荚膜染色法和细胞壁染色法。一般都只用革兰氏染色法跟抗酸染色法。

革兰氏染色法(Gram's stain)是最常用的细菌染色法。细菌经结晶紫初染染成蓝色。革兰氏染色阳性菌（G+）细胞壁肽聚糖层数多，且肽聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密，染料复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而革兰氏染色阴性菌（G-）细胞壁脂类含量多，肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解，使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色为无色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。
①将结晶紫染液加于涂膜上，染色（初染）1min。②水洗后加芦戈氏碘液处理(媒染)1min。③水洗后用95％酒精脱色，脱色时频频摇动玻片，直至流下的液体无色为止(约需0.5min)。④水洗后加石炭酸复红稀释液染色(复染)0.5min。⑤水洗，用滤纸轻轻吸干，待标本充分干燥后进行镜检。染色过程中，水洗要用自来水的细流徐徐冲洗，冲洗涂膜的背面，勿使强水流直接冲到涂膜上。

抗酸染色法（acid-fast stain）对分枝杆菌属等一般染色法不易着色的抗酸性细菌染色。要注意：1）涂片要略厚；2）加温染色或延长染色时间，加温时随时补加染色液；3）分枝杆菌呈红色（+），其他细菌和背景为蓝色。
①石碳酸复红加温染色8~10分钟。②3%的盐酸酒精脱色约1~2分钟，脱色是轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止。③水洗后，用碱性美蓝复染1分钟。④再次水洗，印干。

芽孢染色法是专门给细菌芽孢染色的。要注意：1）芽孢染色用的菌种应控制菌龄，使大部分芽孢仍保留在菌体上为宜；2）染色加热过程要及时补充染液，切勿让涂片干涸。
①孔雀绿加热染色5分钟。②水洗。③番红染色2~3分钟。④水洗，干燥。

荚膜染色法是专门给与染料亲和性弱的细菌荚膜染色。由于荚膜很薄，且含水量高（90%以上），易变形，所以制片和染色时一般不用热固定。这个包括黑素负染色法、Leifson染色法跟Tyler染色法。
黑素负染色法：
1.制菌液：在洁净载破片一端加一滴蒸馏水，按无菌操作要求，用接种环取少量斜面试管培养物于蒸馏水中，轻轻混匀。
2.涂片（推片法）：取另一块边缘光滑的载玻片，使之一端与菌液接触，然后迅速均匀地将菌液推向玻片的另一端，使菌液涂成一薄层。置空气中自然干燥。注意：勿热固定。
3.复红染色：滴加石炭酸复红染色液覆盖涂布面，染色4~5分钟后，除去多余染液（勿用水洗）。干燥时间不要太长，防荚膜脱水。
4.黑素染色：在玻片一端加一滴1%黑素液，再取一块边缘光滑的裁玻片，当边缘与黑素液接触后，迅速均匀地推向玻片另一端，使成一薄层。置空气中自然干燥。
5. 镜检（油镜）：菌体呈红色，背景呈黑色，荚膜无色。
注意事项：滴黑色素要量少；取菌要适量。
Leifson染色法
1.制备涂片同前，自然干燥。
2.滴加Leifson’s染色液覆盖涂布面，染色10分钟，倾去多余染料（勿用水洗）。
3.滴加硼酸钠美蓝染色液，染色5分钟，轻轻用水冲洗，置空气中自然干燥。
4.油镜下镜检，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。
Tyler染色法
1.制备涂片同前，自然干燥。
2.滴加结晶紫冰醋酸染色液覆盖涂布面，染色5~7分钟。倾去多余染料（勿用水洗）。
3.用20%CuS04水溶液轻轻冲去染料，用吸水纸印干后，置空气中自然干燥。
4.油镜下检查，菌体呈紫色，荚膜呈浅紫色或浅蓝色。

细胞壁染色法是观察细菌细胞壁时采用的染色法。细菌细胞壁很薄，它与染料结合的能力差，不易着色，在细菌的染色过程中，一般情况染料都是通过细胞壁的渗透、扩散等作用而进入细胞，细胞壁本身并未染色，因此，欲通过染色来观察细胞壁，必须设法使细胞壁能着色，而细胞质则不易着色，常用的方法有单宁酸法和磷钼酸法。单宁酸和磷钼酸都是起媒染作用，它们使细胞壁形成可着色的复合物，而使细胞质不易被着色，经结晶紫或甲基绿染色后，便可在普通光学显微镜下观察到细胞壁。
根据细菌细胞在高渗溶液中或用乙醚蒸气处理后，会产生质壁分离这一现象，经染色后也可在普通光学显微镜下区分细胞壁和细胞质膜。
1．单宁酸法
(1)将培养16—18小时的巨大芽孢杆菌按常法制成涂片。
(2)用5％单宁酸染5分钟后，水洗。
(3)用0．2％结晶紫染3—5分钟，水洗，吹干。用油镜观察，细胞壁呈紫色，细胞质呈淡紫色。
2．磷钼酸法
(1)制备浓厚的涂片，在未干时浸入1％磷钼酸水溶液3—5分钟。
(2)用1％甲基绿水溶液染3—5分钟。
(3)水洗后，吹干，用油镜观察。细胞壁为绿色，细胞质无色。
3．区分细胞壁与细胞质膜
(1)乙醚蒸气法
(a)将巨大芽孢杆菌涂布于盖玻片上，翻转盖玻片使其放在乙醚蒸气瓶的瓶口上蒸3分钟。
(b)取下盖玻片置Bouin氏固定液中30分钟后取出，水洗。
(c)用硫堇染色30秒钟。
(d)水洗，水封，置油镜下观察。
(2)NaCl法
(a)取一滴25％NaCl溶液于洁净的载玻片上。
(b)挑一小环培养6小时的枯草芽孢杆菌，在25％NaCl水滴中涂布均匀，待自然干燥。
(c)滴加0．01％结晶紫于其上，使盖满有菌部分，30秒钟后水洗，干燥，用油镜观察结果。