⑴ 如何用光敏生物素标记质粒
如何用光敏生物素标记质粒
常将放射性同位素如32 P连接到某种脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）上做为标记物，然后通过切口平移法标记探针。
切口平移法（nick translation）是利用大肠杆菌DNA聚合酶I (E.coli DNA polymerase I) 的多种酶促活性将标记的dNTP掺入到新形成的DNA链中去，形成均匀标记的高比活DNA探针。其操作方法如下：
⑴取1?g DNA溶于少量无菌双蒸水中，加入5?l距离大约10×切口平移缓冲液 (0.5mol/L Tris－HCl，PH7.2；0.1 mol/L MgSO4 ；1mmol/L二硫苏糖醇；500?g/mL牛血清白蛋白），加入除标记物（如?-32 p-dATP）外的其它三种dNTP（如dCTP，dGTP，dTTP）溶液，20mmol/L溶液各1?l。
⑵加入100?ci（10?l）标记物溶液，加入无菌双蒸水至终体积为46.5?l，混匀，加入0.5?l稀释的DNaseI溶液，混匀；加入1?l（约5单位）E.coli DNA polymerase I，混匀。
⑵ 50分急求 如何用光敏生物素标记质粒
生物素化质粒ds-DNA：将含质粒pBR332的大肠杆菌在含氨苄青霉素的LB培养基中扩增，取纯培养物用MagicTM DNA纯化系统，按Promega公司所附操作说明书提取质粒ds-DNA。取纯化的不含单链DNA的大肠杆菌质粒ds-DNA直接与长臂光敏生物素混合，用光标记灯进行光照标记，以制备生物素化质粒ds-DNA。可参考以下步骤：在一灭菌EP管中加待标记DNA 5ug／10uL，在暗室中加入5ug／uL光敏生物素，充分混匀，置冰浴中。
在特制光源下10cm处照射20min。加入100mmol／LTris-HCl，pH9．0(含0．1mmol／LEDTA)10uL，混匀。再加入等体积仲丁醇，混匀。离心lmin(10 000r／rain)，吸去上层仲丁醇，弃去。再加入仲丁醇25uL，重复提取游离的光敏生物素。吸去上层无色仲丁醇后，加入5uL3mol／L醋酸钠，充分混匀，加入冷无水酒精100gL充分混匀，沉淀标记的DNA，置-20℃过夜(或-70℃l5min)，15 000r／min离心20min，沉淀物再用70％乙醇洗1次，离心，抽干，溶于0．1mmol／LEDTA或TK中，测定探针浓度，分装，保存于-20℃。
⑶ 怎样用生物素标记dna
先用限制性内切酶在DNA上切出两个粘性末端，然后在DNA连接酶的配合下用与这个粘性末端相配的有标志性的（可以是放射性和荧光性等同位素一般属于放射性）DNA片段标记出来，简单地说就是这样～
⑷ 求助生物素-亲和素标记技术的优缺点
BAS在实际应用中所具有的巨大优越性，主要表现在以下几个方面。
灵敏度
生物素容易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合，形成的生物素衍生物，不仅保持了大分子物质的原有生物活性，而且比恬度高，具多价性。此外，每个亲和素分子有四个生物素结合部位，可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物和标记物。因此，BAS具有多级放大作用，使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。
特异性
亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性。因此，BAS的多层次放大作用在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰。而且，BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。
稳定性
亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍，二者结合形成复合物的解离常数很小，呈不可逆反应性；而且酸、碱、变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合。因此，BAS在实际应用中，产物的稳定性高，从而可降低操作误差，提高测定的精确度。
普适性
生物素-亲和素系统的多功能性还能提供一套统一的研究方法。例如对于某待测分子，已经得到了对于该分子的生物素标记抗原，那么配合结合亲和素的胶体金可以在电镜下观测，配合结合荧光标记的亲和素可以使用流式细胞仪筛选，配合连接到酶的亲和素可以进行ELISA等免疫组化实验。
其他
BAS可依据具体实验方法要求制成多种通用性试剂（如生物素化第二抗体等）适用于不同的反应体系，而且都可高度稀释，用量很少，实验成本低；尤其是BAS与成本高昂的抗原特异性第一抗体偶联使用，可使后者的用量大幅度减少，节约实验费用．此外，由于生物素与亲和素的结合具高速、高效的特性，尽管BAS的反应层次较多，但所需的温育时间不长，实验往往只需数小时即可完成
⑸ 生物素标记 5'3'dna 哪个好
EMSA结合反应：(1) 如下设置EMSA结合反应阴性对照反应：Nuclease-Free Water 7微升EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) 2微升细胞核蛋白或纯化的转录因子 0微升标记好的探针 1微升总体积 10微升样品反应：Nuclease-Free Water 5微升EMSA/Gel-Shift结合...
BAS-ELISA是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。
⑹ FAM 标记RNA原理是什么
DNA探针的标记方法较成熟，有多种方法可供选择，如缺口平移法、随机引物法、PCR标记法等，能用于同位素和非同位素标记。
DNA探针技术又称分子杂交技术，是利用DNA分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性，对某一特异性DNA序列进行探查的新技术。DNA探针是利用同位素、生物素等标记的特定DNA片断，该片断可大至寄生虫基因组DNA，小至20个碱基。当DNA探针与待测的非标记单链DNA（或RNA）按碱基顺序互补结合时，以氢健将2条单链连接而形成标记DNA-DNA（或标记DNA-RNA）的双链杂交分子。将未配对结合的核苷酸溶解后用检测系统（放射自显影或酶检测等）检测杂交反应结果。由于DNA分子碱基互补的精确性，单连DNA探针仅与样品中变性处理的DNA单链出现配对杂交，由此决定了探针的特异性；用放射性同位素（如32P）或生物素标记探针，使杂交试验同时具有高度的敏感性
⑺ 生物素标记是什么
生物素是个蛋白，标记就是把这个蛋白标记到别的上面便于检测
⑻ 生物素标记在dna5'和3'的区别
相同点：不能发动新链的合成，只催化已有链的延长。都有5'端到3'端聚合的作用，3'端到5'端外切得作用。不同点：DNA聚合酶I还有5'端到3'端外切的作用。而DNA聚合酶III没有此功能。DNA聚合酶I的主要作用是切去冈崎片段5'端得引物。DNA聚合酶III是DNA复制的主要酶。
⑼ 高通量测序时为什么要用生物素标记
事物系统的诸要素所固有的相对稳定的组织方式或联结方式。体现为要素的组织、总合、集合。诸多要素借助于结构形成系统。物质系统的结构可分为空间结构与时间结构。
⑽ 在基因工程中,标记基因是怎么标记的同位素标记法
童鞋你好=
=
我想您可能记错了-
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基因工程第四部
目的基因的检测与鉴定。
检测的方法是DNA分子杂交技术。用转基因生物的基因组DNA提取出来
在还有目的基因的DNA片段上用放射性同位素标记法做标记
以此作为探针。。
而不是标记基因。
假如说你直接标记上了目的基因，同位素进入到DNA中的位置是不确定的，也就是只要新合成的DNA都可能携带同位素，这样的话不只有目的基因带有同位素了。。。。