微生物基本实验方法有哪些

① 微生物实验的四大基本技术是什么

1、显微镜使用,细菌抹片及革兰氏染色,细菌形态、结构的观察
2、常用培养基的制备
3、细菌的分离、培养、移植
4、细菌在培养基中的生长表现及生理生化试验（鉴定）

② 微生物学的基本实验技术有哪些试分别阐述

LB培养基的配制，酵母菌的培养，PCR技术，转录，酶切，提取质粒

③ 高中生物常用的实验方法有哪些

1．实验方法
实验方法是整个实验设计的精髓,是做好实验设计的关键所在.现将与中学实验有关的一些最常见的经典的实验方法汇总如下：
(1)化学物质的检测方法：
①淀粉——碘液
②还原糖——斐林试剂、班氏试剂
③CO2——Ca(OH)2溶液或酸碱指示剂
④乳酸——pH试纸
⑤O2——余烬复燃
⑥无O2——火焰熄灭
⑦蛋白质——双缩脲试剂
⑧染色体——龙胆紫、醋酸洋红溶液
⑨DNA——二苯胺试剂
⑩脂肪——苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液
(2)实验结果的显示方法：
①光合速率——O2释放量或CO2吸收量或淀粉产生量
②呼吸速率——O2吸收量或CO2释放量或淀粉减少量
③原子途径——放射性同位素示踪法
④细胞液浓度大小——质壁分离
⑤细胞是否死亡——质壁分离
⑥甲状腺激素作用——动物耗氧量,发育速度等
⑦生长激素作用——生长速度(体重变化,身高变化)
⑧胰岛素作用——动物活动状态
⑨菌量——菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度
⑩大肠杆菌——伊红—美蓝琼脂培养基
(3)实验条件的控制方法：
①增加水中氧气——泵入空气或吹气或放入绿色植物
②减少水中氧气——容器密封或油膜覆盖或用凉开水
③除去容器中CO2——NaOH溶液
④除去叶片中原有淀粉——置于黑暗环境
⑤除去叶片中叶绿素——酒精隔水加热
⑥除去光合作用对呼吸作用的干扰——给植株遮光
⑦如何得到单色光——棱镜色散或彩色薄膜滤光
⑧血液抗凝——加入柠檬酸钠
⑨线粒体提取——细胞匀浆离心
⑩骨的脱钙——盐酸溶液
⑾灭菌方法——微生物培养的关键在于灭菌,对不同材料,灭菌方法不同：培养基用高压蒸气灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂洗净,擦干后用75％酒精消毒；整个接种过程都在实验室无菌区进行.
(4)实验中控制温度的方法：
①还原糖鉴定：水浴煮沸加热
②酶促反应：水浴保温
③用酒精溶解叶中的叶绿素：酒精要隔水加热
④DNA的鉴定：水浴煮沸加热
⑤细胞和组织培养以及微生物培养：恒温培养
2．斐林试剂、班氏试剂与尿糖试纸
这三种物质均可用来检验含醛基的有机物的存在,在医学上用来检验糖尿病,其原理均是利用了Cu2+的氧化性把醛基氧化,但成分略有不同：
斐林试剂：即硫酸铜、氢氧化钠和酒石酸钾钠组成的蓝色混合溶液.分为斐林试剂A和斐林试剂B,A为CuSO4溶液,B为氢氧化钠和酒石酸钾钠的混合溶液,使用时将A、B等体积混合即成斐林试剂.
班氏试剂：即硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸钠组成的混合液,又叫本尼迪克特(Benedict)试剂,它与醛反应的结果是与斐林试剂一致的,只是比斐林试剂更稳定,所以在临床化验中更常使用.
尿糖试纸：又叫硫酸铜试纸,呈白色,带蓝色斑点,用于糖尿病患者的尿糖测试.每片含硫酸铜20毫克,枸橼酸300毫克,碳酸钠80毫克,氢氧化钠235毫克.尿糖试纸法快速、方便,试纸的正确使用方法为：将试纸条放在尿液中浸湿,一秒钟后取出,在一分钟内观察试纸的颜色,并与标准色板对照,根据不同的颜色来确定尿糖阳性的程度.
3．斐林试剂和双缩脲试剂的比较
相同点：①都由NaOH溶液和CuSO4溶液构成；
②斐林试剂甲液和双缩脲试剂A都为0．1g/mLNaOH溶液.
不同点：①CuSO4溶液浓度不一样：斐林试剂乙液为0．05g/mLCuSO4溶液,
双缩脲试剂B为0．01g/mLCuSO4溶液.
②配制比例不一样.
③使用方法不一样：斐林试剂是甲、乙液一起混合后再使用,
双缩脲试剂则是先向待鉴定材料加入A试剂摇匀后,再加入试剂B.
④鉴定的对象不一样：斐林试剂鉴定的是还原糖,双缩脲试剂鉴定的是蛋白质.
⑤反应本质及颜色反应不一样.
4．苏丹Ⅲ染液与苏丹Ⅳ染液的比较
都是用来鉴定脂肪.苏丹Ⅳ染液更易溶于脂肪,所以染色更深,同时要求染色时间更短.
生物学中常用的试剂：
1、斐林试剂： 成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.05g/ml CuSO4（乙液）.用法：将斐林试剂甲液和乙液等体积混合,再将混合后的斐林试剂倒入待测液,水浴加热或直接加热,如待测液中存在还原糖,则呈砖红色.
2、班氏糖定性试剂：为蓝色溶液.和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀.用于尿糖的测定.
3、双缩脲试剂：成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.01g/ml CuSO4（乙液）.用法：向待测液中先加入2ml甲液,摇匀,再向其中加入3~4滴乙液,摇匀.如待测中存在蛋白质,则呈现紫色.
4、苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中,摇匀.用于检测脂肪.可将脂肪染成橘黄色（被苏丹Ⅳ染成红色）.
5、二苯胺：用于鉴定DNA.DNA遇二苯胺（沸水浴）会被染成蓝色.
6、甲基绿：用于鉴定DNA.DNA遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色.（甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色.）
7、50%的酒精溶液：在脂肪鉴定中,用苏丹Ⅲ染液染色,再用50%的酒精溶液洗去浮色.
8、75%的酒精溶液：用于杀菌消毒,75%的酒精能渗入细胞内,使蛋白质凝固变性.低于这个浓度,酒精的渗透脱水作用减弱,杀菌力不强；而高于这个浓度,则会使细菌表面蛋白质迅速脱水,凝固成膜,妨碍酒精透入,削弱杀菌能力.75％的酒精溶液常用于手术前、打针、换药、针灸前皮肤脱碘消毒以及机械消毒等.
9、95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA.
10、15%的盐酸：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖.
11、龙胆紫溶液：(浓度为0.01g/ml或0.02g/ml)用于染色体着色,可将染色体染成紫色,通常染色3~5分钟.（也可以用醋酸洋红染色）
12、20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率.（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）
13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验.
14、碘液：用于鉴定淀粉的存在.遇淀粉变蓝.
15、丙酮：用于提取叶绿体中的色素.
16、层析液：（成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成,也可用93号汽油）可用于色素的层析,即将色素在滤纸上分离开.
17、二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入,可使研磨充分.
18、碳酸钙：研磨绿色叶片时加入,可中和有机酸,防止在研磨时叶绿体中的色素受破坏.
19、0.3g/mL的蔗糖溶液：相当于30%的蔗糖溶液,比植物细胞液的浓度大,可用于质壁分离实验.
20、0.1g/mL的柠檬酸钠溶液：与鸡血混合,防凝血.
21、氯化钠溶液：①可用于溶解DNA.当氯化钠浓度为2mol/L、 0.015mol/L时DNA的溶解度最高,在氯化钠浓度为0.14 mol/L时,DNA溶解度最低.②浓度为0.9%时可作为生理盐水.

④ 微生物学的研究方法和技术有哪些

1. 微生物学的研究方法和技术有：

   显微技术，纯种培养技术，无菌技术，纯种分离纯化技术和微生物保藏技术。

2. 显微技术（micros）：显微技术是利用光学系统或电子光学系统设备，观察肉眼所不能分辨的微小物体形态结构及其特性的技术。包括：①各种显微镜的基本原理、操作和应用的技术；②显微镜样品的制备技术；③观察结果的记录、分析和处理的技术。

3. 纯培养：纯培养最重要的是在于微生物的生理研究，方法是依靠灭菌和分离，是由巴斯德（L．Pasteur）和柯赫（R．Koch）建立起来的。在自然界中，有的培养条件很困难，特别是具有密切共生关系的生物及进行寄生性营养的生物；也有一些在理论上不可能进行纯粹培养的生物。纯培养(pure culture)——微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代,称纯培养。

4. 无菌技术：无菌技术是在医疗护理操作过程中，保持无菌物品、无菌区域不被污染、防止病原微生物 侵入人体的一系列操作技术。无菌技术（aseptic technique） 是指在执行医疗、护理技术过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。

5. 纯化：纯化是将多糖混合物分离为单一多糖的过程。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化。

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⑤ 微生物的传统检测方法有哪些

传统检测有三种方法

1、直接显微镜观察，正常情况，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度以及培养时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。可以通过显微镜观察菌落特征对微生物种类进行判断。

2、选择培养基培养微生物或人为提供有利于目的菌株生长的条件，选择培养基，其作用是允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养一般是通过观察微生物的同化作用类型或某一特征进行间接判断，得到的微生物往往并不只有一种，但是能够大致确定这些微生物存在的共有特征从而对其分类。

3、鉴别培养基，根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品。与选择培养相比，鉴别培养基的鉴别所得结果的范围比较小，一般可直接测定某微生物的种类。

⑥ 微生物学的基本实验技术有哪些

显微制片，沉降菌和浮游菌的采集及测定，内毒素检测，培养基的配制，菌种的培养与繁殖！

⑦ 测定微生物的生物量有哪些主要方法

测定微生物的生物量有哪些主要方法
测定的方法主要有四种：

1.直接计数测定：根据微生物种类，有血球计数板和细菌计数板；

2.比浊法：根据菌悬液的浓度在一定范围内与光密度成正比，可以用分光光度计测OD值，用OD值表示样品菌液浓度；

3.核酸计数法：荧光定量PCR技术；

4.活菌计数法：MPN和平板计数法由于测定方法的限制。新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的LK2SO4溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（KEC），从而计算土壤微生物生物量碳。

⑧ 病原微生物中细菌常见检测方法有哪些

1、快速测试片技术法

快速测试片是指以纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过微生物在上面的生长、显色来测定食品中微生物的方法。

细菌总数检测纸片的研制始于 20 世纪 80 年代，其主要优点是简便、实用、经济、操作性强。近年来以滤纸和美国某公司的 Petrifilm 为载体的测试片已开始被广泛应用。

2、生物电化学方法

生物电化学方法是指通过电极测定微生物产生或消耗的电荷，从而提供分析信号的方法。微生物在滋生代谢过程中，培养基的电化学性质如电流、电位、电阻和电导等会发生变化，所以可以通过检测分析这些电化学参量的变化来实现对微生物的快速测定。

常见的有：阻抗分析法、电位分析法、电流分析法等。生物电化学方法具有测量快速、直观、操作简单、测量设备成本低和信号的可控性等特点。

3、微菌落技术

微菌落是指细菌生长繁殖早期在固相载体上所形成的只能借助于显微镜观察的微小菌落。微菌落技术具有快速、经济、实用的特点，其研究始于 20 世纪50年代，定量测定技术从 20 世纪 70 年代开始，国外已有报道将该法应用于水、食品中细菌总数的快速检测。

4、气相色谱法

气相色谱应用到微生物的检测中，主要是依据不同微生物的化学组成或其产生的代谢产物各异，利用上述色谱检测可直接分析各种体液中的细菌代谢产物、细胞中的脂肪酸、蛋白质、氨基酸、多肽、多糖等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

5、高效液相色谱法

利用高效液相色谱检测可分析各种体液中的细菌代谢产物、病原微生物等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

⑨ 微生物培养的方法有哪些

微生物培养法是在人为条件下繁殖微生物的方法。根据微生物的种类以及对养料、温度、氧气、水分、酸碱度等环境条件的要求不同，并联系生产和实验上的具体要求，可有不同的培养方法。可分好气培养法和厌气培养法两类。中海生物技术的培养基一是好气微生物培养法，常用：
①摇床培养法，即将微生物接种于盛有液体培养基的三角瓶后，放在恒温培养室中的摇床上作有节奏的振荡，使空气不断进入培养液中，促其良好生长;
②浅盘培养法，又称表面培养法，在盘内放一浅层培养基，使微生物能够充分接触空气，而有利于生长繁殖，但此法所需空间大，并且容易污染杂菌;
③深层培养法，适用于好气微生物的大规模发酵培养，在大容积的液体培养基中，通入无菌空气，并不断搅拌，可使微生物充分接触空气，迅速繁殖并积累代谢产物。二是厌气微生物培养法，实验室常用化学还原剂或抽气机吸除培养基中的分子氧，也有用静止状态的深层培养法。在生产中常用密封式发酵罐或不通风的固体发酵法。