如何做微生物镜检

1. 微生物镜检涂片步骤

涂片是将微生物培养物涂在载波片上，用来观察死的微生物。微生物刚放到波片上是活的，但经过固定步骤就将其杀死了。如果涂片太厚，就难以观察单个细胞，如果太薄，就可能找不到微生物。如果将涂片时搅动太厉害，又会破坏原来细胞的排布。涂片后应使其完全风干。然后将其快速通过火焰3～4次，这个过程成为热固定。若固定主要目的有三个：1.杀灭微生物，2.使微生物黏附在载波片上，3.使菌体跟容易染色。如果载波片还没在完全风干的时候将其在火焰上移动，菌体就会煮沸二被破坏。如果热固定不够，菌体就无法粘在载波片上，在后续步骤中容易被冲洗掉。

2. 生物里的镜检是什么

生物里的镜检是在显微镜下检查。
镜检一词更多时候不是用在生物上，
而是用在医学检查上，
及医学研究上。

3. 微生物镜检的化验怎么做

做微生物镜检首先要对微生物进行培养，
1.一般适温培养18-24h，
2.革兰氏染色：1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）自来水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。
3.干燥，镜检。

4. 用显微镜观察细菌的步骤

一、用脏手上的细菌制装片：

1、收集手上细菌，用少量无菌水（可用冷开水代替）冲洗脏手，让洗手的水流到培养皿中。这些脏水就是细菌培养液。

2、制取细菌装片，取甲、乙两块洁净的载玻片，分别在两玻片的中央各滴一小滴细菌培养液；然后在甲片上盖好盖玻片后直接用600倍的显微镜观察。

（用稍偏暗的视野，调节到位可以看到多种细菌和其它微生物。很容易看到活动的微生物，这样对儿童更有吸引力和教育意义。）如果你想进一步放大并会操作，选定观察的物象后，可把此物象移到视野正中央，再转换更高倍数的镜头观察即可。

3、在乙片的细菌培养液滴上滴一小滴龙胆紫染色液，用牙签将细菌培养液和龙胆紫液搅匀、并将液滴推开，再用酒精灯加热液滴（约5秒钟）后让它自然晾干（约5分钟）。

再用600倍的显微镜直接观察，既可以看到染成深蓝色的多种细菌和其它微生物。不过此时看到的微生物都已死亡、并被固定，因此看不到它们的活动状态。

二、制取洗手后的对照装片。

1、洗手－－－－－将手用香皂洗干净，用洁净的干毛巾揩干手；

2、收集细菌培养液－－－－－－－用少量无菌水冲洗双手，让洗手液流入洁净的培养皿中；

3、制细菌装片－－－－－制片过程与以上装片过程相同，参照制片即可。

(4)如何做微生物镜检扩展阅读：

细菌的基本形态与大小

（1）球菌：

球菌是外形呈圆球形或椭圆形的细菌，直径0．5～1微米，有以下几种类型：

①单球菌：单独存在，如尿素小球菌；②双球菌：如肺炎双球菌；

③链球菌：如乳酸链球菌；④四联球菌：形成的4个细胞排列在一起，成田字，如四联球菌；

⑤八叠球菌：如尿素生孢八叠球菌；⑥葡萄球菌：如金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）。

（2）杆菌：

外形为杆状的细菌称杆菌，常有长宽接近的短杆或球杆状菌，如甲烷短杆菌属（Methano—brevibacter）；

长宽相差较大的棒杆状或长杆状菌，如枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）、梭状杆菌（Bacteriumfusiformis）；

分枝状或叉状菌，如双歧杆菌属（Bifidobacterium）；竹节状（两端平截），如炭疽芽孢杆菌（Bacillusanthracis）等。

按杆菌细胞的排列方式不同则有成对的双杆菌、呈链状的链杆菌，另外，常有栅状、“八”字状以及由鞘衣包裹在一起的丝状等多种。典型的杆菌有大肠杆菌、枯草杆菌、链杆菌、变形杆菌［2］。

（3）螺旋状：

螺旋状的细菌称螺旋菌，一般长5～50微米，宽0．5～5微米，根据菌体的弯曲可分为：

①弧菌（Vibrio）：螺旋不足一环者呈香蕉状或逗点状，如霍乱弧菌（Vibriocholerae）；②螺菌（Spirillum）：满2～6环的小型、坚硬的螺旋状细菌，如小螺菌（Spirillumminor）；

③螺旋体（Spirochaeta）：旋转周数多（通常超过6环）、体长而柔软的螺旋状细菌，如梅毒螺旋体（TreponemaPallim）。

5. 怎么制作微生物的制片，然后用显微镜观察

(1) 以油性签字笔在载玻片之背面画个圈 并写上所要鉴定之细菌的名称。
，
(2) 在圆圈正面滴上一滴水，水滴越小滴越好，如有需要，可将多馀的水
擦去。
(3) 用牙签沾取一点菌落涂于载玻片正面的圆圈中(勿沾取太多的细菌)。
(4) 待涂布的菌液完全风乾后(切记不可用火烧乾，以免破坏细菌细胞壁的
结构)，让载玻片在火上來回數次，使细菌固定(每次通过火焰后均需
稍冷却，载玻片之温度以不烫手为原则)。

一）正置显微镜

1、安放

右手握住镜臂，左手托住镜座，使镜体保持直立。桌面要清洁、平稳，要选择临窗或光线充足的地方。单筒的一般放在左侧，距离桌边3～4厘米处。

2、清洁

检查显微镜是否有毛病，是否清洁，镜身机械部分可用干净软布擦拭。透镜要用擦镜纸擦拭，如有胶或粘污，可用少量二甲苯清洁之。

3、对光

镜筒升至距载物台1～2厘米处，低倍镜对准通光孔。调节光圈和反光镜，光线强时用平面镜，光线弱时用凹面镜，反光镜要用双手转动。
若使用的为带有光源的显微镜，可省去次步骤，但需要调节光亮度的旋钮。

4、安装标本

将玻片放在载物台上，注意有盖玻片的一面一定朝上。用弹簧夹将玻片固定，转动平台移动器的旋钮，使要观察的材料对准通光孔中央。

5、调焦

调焦时，先旋转粗调焦旋钮慢慢降低镜筒，并从侧面仔细观察，直到物镜贴近玻片标本，然后左眼自目镜观察，左手旋转粗调焦旋钮抬升镜筒，直到看清标本物像时停止，再用细调焦旋钮回调清晰。
操作注意：不应在高倍镜下直接调焦；镜筒下降时，应从侧面观察镜筒和标本间的间距；要了解物距的临界值。
若使用双筒显微镜，如观察者双眼视度有差异，可靠视度调节圈调节。另外双筒可相对平移以适应操作者两眼间距。

6、观察

若使用单筒显微镜，两眼自然张开，左眼观察标本，右眼观察记录及绘图，同时左手调节焦距，使物象清晰并移动标本视野。右手记录、绘图。
镜检时应将标本按一定方向移动视野，直至整个标本观察完毕，以便不漏检，不重复。
光强的调节：一般情况下，染色标本光线宜强，无色或未染色标本光线宜弱；低倍镜观察光线宜弱，高倍镜观察光线宜强。除调节反光镜或光源灯以外，虹彩光圈的调节也十分重要。

（1）低倍镜观察

观察任何标本时，都必须先使用低倍镜，因为其视野大，易发现目标和确定要观察的部位。

（2）高倍镜观察

从低倍镜转至高倍时，只需略微调动细调焦旋钮，即可使物像清晰。
使用高倍镜时切勿使用粗调焦旋钮，否则易压碎盖玻片并损伤镜头。
转动物镜转换器时，不可用手指直接推转物镜，这样容易使物镜的光轴发生偏斜，转换器螺纹受力不均匀而破坏，最后导致转换器就会报废。

（3）油镜的观察

先用低倍镜及高倍镜将被检物体移至视野中央后，再换油镜观察。油镜观察前，应将显微镜亮度调整至最亮，光圈完全打开。
使用油镜时，先在盖玻片上滴加一滴香柏油（镜油），然后降低镜筒并从侧面仔细观察，直到油镜浸入香柏油并贴近玻片标本，然后用目镜观察，并用细调焦旋钮抬升镜筒，直到看清标本的焦段时停止并调节清晰。
香柏油滴加要适量。油镜使用完毕后一定要用擦镜纸沾取二甲苯擦去香柏油，并再用干的擦镜纸擦去多余二甲苯。

7、结束操作

观察完毕，移去样品，扭转转换器，使镜头V字型偏于两旁，反光镜要竖立，降下镜筒，擦抹干净，并套上镜套。
若使用的是带有光源的显微镜，需要调节亮度旋钮将光亮度调至最暗，再关闭电源按钮，以防止下次开机时瞬间过强电流烧坏光源灯

6. 微生物镜检的化验怎么做

做微生物镜检首先要对微生物进行培养，
1.一般适温培养18-24h，
2.革兰氏染色：1）涂片固定。 2）草酸铵结晶紫染1分钟。 3）自来水冲洗。 4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。 5）水洗，用吸水纸吸去水分。 6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。 7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。
3.干燥，镜检。

7. 微生物镜检涂片步骤

单染色法，以观察菌体形态为主。
1、把泡在酒精中的片子用镊子夹出，放在酒精灯上点燃，去掉片子上的酒精及油脂。
2、片子冷却后，蘸一接种环发酵液，均匀地涂在片子上。
3、涂后的片子，于酒精灯火焰上过几遍，使所涂的细菌固定在片子上，注意，片子温度不易过高，以不烫手背为主，温度过高，会使菌变形，影响观察结果。
4、片子涂菌的位置，滴几滴结晶紫染液，使染液完全覆盖住所涂的菌，染1分钟左右。
5、用水冲洗片子至无紫色水流下后，进行火焰烤干。
6、镜下观察。在涂点处滴1滴香柏油，于油镜下观察菌体形态。

8. 怎样做微生物的镜检

取一滴试液，放载玻片上，盖上盖玻片，放显微镜下看就行了。如果需要计数，就是用血球计数板。这是最简单的了，不过这样恐怕看不出什么啊。光是看形态来判断种类吗？

9. 做微生物实验的步骤

操作步骤
1．涂片将培养14—16小时的枯草芽孢杆菌和培养24小时的大肠杆菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。固定时通过火焰1—2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2．染色
（1）初染
加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗。
（2）媒染
滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。
（3）脱色
将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒钟，立即用水冲净酒精。
（4）复染
用番红液染1—2分钟，水洗。
（5）镜检
干燥后，置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
（6）同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。

10. 疑似肺结核病人，应如何进行微生物学检验

标本标本的选择根据感染部位。可取痰、支气管灌洗液、尿、粪、脑脊液或胸、腹水。其他肺外感染可取血或相应部位分泌液或组织细胞。直接涂片镜检标本直接涂片或集菌后涂片，用抗酸染色。若找到抗酸阳性菌即可初步诊断。抗酸染色一般用ziehl-neelsen法。为加强染色，可用ik(intensified kinyoun)法染色。将石炭酸复红染色过夜，用0.5% 盐酸乙醇脱色30s，则包括大多结核分枝杆菌l型也可着色。为提高镜检敏感性，也可用金胺染色，在荧光显微镜下结核分枝杆菌呈显金黄色荧光。浓缩集菌先集菌后检查，可提高检出率。培养与动物试验也必须经集菌过程以除去杂菌。脑脊液和胸、腹水无杂菌，可直接离心沉淀集菌。痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4% naoh（痰和碱的比例为1:4,尿、支气管灌洗液和碱的比例为1:1）处理15min，时间过长易使结核分枝杆菌l型与非结核分枝杆菌死亡。尿标本先加5% 鞣酸、5% 乙酸各0.5ml于锥形量筒内静置，取沉淀物处理。处理后的材料再离心沉淀。取沉淀物作涂片染色镜检。若需进一步作培养或动物接种，应先用酸中和后再离心沉淀。分离培养将经中和集菌材料接种于固体培养基，器皿口加橡皮塞于37℃培养，每周观察1次。结核分枝杆菌生长缓慢，一般需2～4周长成肉眼可见的落菌。液体培养可将集菌材料滴加于含血清的培养液，则可于1～2周在管底见有颗粒生长。取沉淀物作涂片，能快速获得结果，并可进一步作生化、药敏等测定和区分结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌。国内学者已证明结核分枝杆菌l型可存在于血细胞内或粘附于细胞表面。这种患者往往血沉加快，用低渗盐水溶血后立即接种高渗结核分枝杆菌l型培养基能提高培养阳性率。动物试验将集菌后的材料注射于豚鼠腹股沟皮下，3～4周后若局部淋巴结肿大，结核菌素试验阳转，即可进行解剖。观察肺、肝、淋巴结等器官有无结核病变，并作形态、培养等检查。若6～8周仍不见发病，也应进行解剖检查。快速诊断一般涂片检查菌数需5x103～4/ml,培养需1x102/ml,标本中菌数少于此数时不易获得阳性结果，且培养需时较长。目前已将多聚酶链反应（pcr）扩增技术应用于结核分枝杆菌dna鉴定，每ml中只需含几个细菌即可获得阳性，且1?2d得出结果。操作中需注意实验器材的污染问题，以免出现假阳性。又细菌l型由于缺壁并有代偿性细胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶不能使细胞膜破裂释出dna，以致造成pcr假阴性。用组织磨碎器充分研磨使细胞破裂后，则可出现阳性。目前有条件的单位使用bactec法，以含14c棕榈酸作碳源底物的7h12培养基，测量在细菌代谢过程中所产生的14c量推算出标本中是否有抗酸杆菌，5～7d就可出报告。