‘壹’ 外毒素、内毒素、类毒素的区别和联系
相同的都是一些细菌的成分,差别在于成分不同,作用也不同。
其中类毒素是人工由外毒素制备的无毒的保留抗原性的免疫制剂。外毒素是蛋白而内毒素是脂多糖,都是毒性物质,但外毒素是细菌活着释放的,而内毒素是细菌死了才出来的。
【外毒素是指某些病原菌生长繁殖过程中分泌到菌体外的一种代谢产物,为次级代谢产物。其主要成分为可溶性蛋白质。许多革兰氏阳性菌及部分革兰氏阴性菌等均能产生外毒素。外毒素不耐热、不稳定、抗原性强,可刺激机体产生抗毒素,可中和外毒素,用作治疗。
内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分,叫做脂多糖。脂多糖对宿主是有毒性的。内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来,所以叫做内毒素。其毒性成分主要为类脂质A。内毒素位于细胞壁的最外层、覆盖于细胞壁的黏肽上。各种细菌的内毒素的毒性作用较弱,大致相同,可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。内毒素耐热而稳定,抗原性弱。
类毒素是一些经变性或经化学修饰而失去原有毒性而仍保留其免疫原性的毒素。医学微生物学中将类毒素定义为:将细菌外毒素用0.3%~0.4%甲醛处理脱去其毒性,保存其免疫原性即为类毒素。如某些细菌外毒素可用甲醛等处理后脱毒的制品,毒性虽消失,但免疫原性不变,故仍然具有刺激人体产生抗毒素,以起到机体从此对某疾病具有自动免疫的作用。它们广泛地应用于预防某些传染病。如向人体注射白喉类毒素后可以预防白喉。其他的还有破伤风类毒素、葡萄球菌类毒素、霍乱类毒素等。亦可把它们注射到动物体内用于制备抗毒素。】
‘贰’ 关于细菌内毒素的问题
据我从事十几年细菌内毒素的药品检验工作,并且仅在2010年10月至今的短短一年多时间内就在国家级正式专业杂志上已发表了4篇有关细菌内毒素的论文,应该是5篇,其中1篇杂志社已计划于2012年4月发表(同样也是国家级专业杂志)的经验分析,细菌内毒素并不像有些人说的那样容易污染,因为细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖(Lipoply Saccharide)和微量蛋白质(Protein)的复合物,它不是细菌或细菌的代谢产物,而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有内毒素生物活性的物质,并且也仅仅是革兰氏阴性菌才会产生,因而一般在进行细菌毒素检查或你说的冷冻干时,是不会产生的。我们可以分析一下:是否有具备适应细菌生长、繁殖的营养物质、温度(在冷冻条件下一般细菌是处于休眠状态,不易繁殖)等条件存在。而且又要求是革兰氏阴性菌,并且要等它繁殖并死亡或解休后,才可释放出具有内毒素生物活性的物质,时间上分析,时间也不够。因此不具备细菌污染并产生内毒素的条件,在你说的冷冻条件下就更不易产生细菌内毒素了。这点你完全可以放心。
“冷冻干燥”是一种常用的干燥方法,生产上常用于对一些受热后性质不稳定,易分解、变质的物质,水分去除。如一些在水溶液中性质不稳定,加热干燥又易分解的抗生素生产工艺上就用到“冷冻干燥法”
那么为什么干燥后检测出的内毒素比干燥前增加?从你的描述中也可看出“冻干前液体蛋白浓度为10%”,经冷冻干燥之后,大约失去90%的水份,并且细菌内毒素是比较稳定的,它不会因冷冻干燥而破坏,也不会随水分蒸发而除去。干燥后蛋白质的浓度增加,自然细菌内毒素的浓度也随之而增加。
‘叁’ 求教“枯草芽孢杆菌”、“细菌内毒素”、“热原” 的产生、生存环境、还有杀死方法~ 主要是药学方面的!!
一、枯草芽孢杆菌
1、产生:广泛分布在土壤及腐败的有机物中,易在枯草浸汁中繁殖,故名。空气中也会有存在。
2、生存环境:需氧菌。生存条件恶劣时,细胞营养体会形成生命力极强的芽孢。
3、杀死方法:121℃高温高压灭菌;或环氧乙烷灭菌;或辐射灭菌。
二、细菌内毒素
1、产生:是革兰氏阴性菌的细胞壁的产物。细菌在生活状态时不释放出来,只有当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时,才表现其毒性,内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A成分。
2、存在环境:当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素,所以广泛存在于自然界中任何有细菌的地方。
3、去除方法:不是生命,不存在杀死的说法。对于药品中内毒素去除可以使用过滤及高压灭菌方法,而对于一般水溶液,则普通采用薄膜过滤后高压法,对于实验中所用器具可使用干热或射线给予灭活,其它也可使用酸、碱破坏的方法。对于细菌内毒素检查法中所用实验用具的外源性内毒素除去方法,最好采用250℃2hr以上的干热灭菌方法。
三、热原
1、产生:由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。一般是指细菌性热原,是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。
2、存在环境:既然是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素,那么也就是只要有细菌的地方就有热原。
3、去除方法:方法众多。基本类似但不限于内毒素的,而且还分对象。
下面的链接里有,你看下吧。太多字就不贴了。
‘肆’ 什么是内毒素如何解决
你好,我是药物专业的,细菌内毒素经常出现在药品中,这种内毒素就会成为药品热源来源,使人应用后产生发热反映
消除的办法很多,比如高温,酸碱法,凝胶过滤,离子交换等,由于其滤过性,基本不能采用过滤法。
检查的方法目前应用最多就是家兔法
顺便补充一下,内毒素是细菌体内的脂多糖
‘伍’ 内毒素去除方法
超标因素不外乎以下三种:
1.原料、辅料的带入
2.用水的带入
3.设备清洗不够干净
去除方法的话,针对以上三点做出改进措施,应该会有比较好的效果。
对于已有的半成品,是不是可以用超滤或反渗透?
成品的话只能销毁了。
‘陆’ 如何去除内毒素
药品、生物制品的细菌内毒素限值(L)一般按以下公式确定:
L=K/M
式中L为供试品的细菌内毒素限值,以EU/ml、EU/mg或EU/U(活性单位)表示;
K为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量,以EU/(kg•h)表示,注射剂K=5E U/(kg•h),放射性药品注射剂K=2.5 EU/(kg•h),鞘内用注射剂K=0.2 EU/(kg•h);
M为人用每公斤体重每小时最大剂量,以ml(kg•h)、mg (kg•h)或U/ (kg•h)表示,人均体重按60kg计算,注射时间若不足1小时,按1小时计算。
按人用剂量计算限值时,如遇特殊情况,可根据生产和临床用药实际情况做必要调整,但需说明理由。
如果内毒素含量超标,应当在进一步改善生产工艺条件,加强对原材料,辅料以及生产用水等方面的控制!
谢谢!
‘柒’ 细菌内毒素是否能被过滤
可以
细菌内毒素是由革兰氏阴性菌菌体崩解后释放出,内毒素为细菌细胞壁的结构成分,一个细胞壁的结构成分肯定很微小,因此能被过滤!
‘捌’ 细菌产生的毒素如何消灭
青霉菌
可以产生一种代谢产物,青霉素,这是它的
次级代谢产物
.青霉素可以抑制
细菌细胞壁
的形成,由于细菌在适宜环境下要不断地
分裂生殖
,就要不断
‘玖’ 细菌内毒素引入途经及消除方法
细菌内毒素主要来自于细菌污染。也有可能是采购的原料被污染后灭菌处理残留。
消除的方法一般是高温处理,玻璃器皿250度或者180度处理。如果是样品珍贵的,也可以用去除内毒素的凝胶颗粒吸附。
‘拾’ 如何去除质粒中的内毒素
内毒素,即脂多糖或LPS,是革兰氏阴性菌(如大肠杆菌)细胞膜的组成部分。细菌外膜的外层脂质部分是完全由内毒素分子所构成的。单个大肠杆菌细胞约包含两百万个LPS分子,每个LPS分子由疏水的脂质A(lipid A)部分、复杂的糖类残基阵列部分及负电性的磷酸基团所组成。因此,每个内毒素分子都具有疏水域、亲水域和电荷域,这使它在与其他分子相互作用时具有其独特的自身性质。细菌在其活性生长期向其周围微环境中散布少量的内毒素,在死亡时则释放大量内毒素。
在质粒制备的细菌细胞裂解过程中,内毒素分子被从外膜释放到溶菌液中。
去除内毒素
获得专利的EndoFree Plasmid制备方法在标准的QIAGEN Plasmid纯化方案中整合了对内毒素的去除步骤。使用QIAfilter Cartridge过滤中性的细菌裂解液,并加入专门的不含内毒素缓冲液(缓冲液ER)在冰上进行共同孵育。不含内毒素缓冲液能够避免LPS分子与QIAGEN-tip中的树脂结合,从而使每微克质粒DNA中含有的内毒素少于0.1EU。