生物实验中怎么染色

❶ 微生物染色的染色方法

微生物染色方法一般分为单染色法和复染色法两种。前者用一种染料使微生物染色，但不能鉴别微生物。复染色法是用两种或两种以上染料，有协助鉴别微生物的作用。故亦称鉴别染色法。常用的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法，此外还有鉴别细胞各部分结构的（如芽胞、鞭毛、细胞核等）特殊染色法。食品微生物检验中常用的是单染色法和革兰氏染色法。
用一种染色剂对涂片进行染色，简便易行，适于进行微生物的形态观察。在一般情况下，细菌菌体多带负电荷，易于和带正电荷的碱性染料结合而被染色。因此，常用碱性染料进行单染色，如美兰、孔雀绿、碱性复红、结晶紫和中性红等。若使用酸性染料，多用刚果红、伊红、藻红和酸性品红等。使用酸性染料时，必须降低染液的PH值，使其呈现强酸性（低于细菌菌体等电点），让菌体带正电荷，才易于被酸性染料染色。
单染色一般要经过涂片、固定、染色、水洗和干燥五个步骤。
染色结果依染料不同而不同：
石碳酸复红染色液：着色快，时间短，菌体呈红色。
美兰染色液：着色慢，时间长，效果清晰，菌体呈蓝色。
草酸铵结晶染色液：染色迅速，着色深，菌体呈紫色。
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。
细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。
另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。

❷ 微生物染色的微生物染色的基本原理

微生物染色的基本原理，是借助物理因素和化学因素的作用而进行的。物理因素如细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。化学因素则是根据细胞物质和染料的不同性质而发生地各种化学反应。酸性物质对于碱性染料较易吸附，且吸附作用稳固；同样，碱性物质对酸性染料较易于吸附。如酸性物质细胞核对于碱性染料就有化学亲和力，易于吸附。但是，要使酸性物质染上酸性材料，必须把它们的物理形式加以改变（如改变pH值），才利于吸附作用的发生。相反，碱性物质（如细胞质）通常仅能染上酸性染料，若把它们变为适宜的物理形式，也同样能与碱性染料发生吸附作用。

微生物染色 - 染料的种类和选择

染料分为天然染料和人工染料两种。天然染料有胭脂虫红、地衣素、石蕊和苏木素等，它们多从植物体中提取得到，其成分复杂，有些至今还未搞清楚。目前主要采用人工染料，也称煤焦油染料，多从煤焦油中提取获得，是苯的衍生物。多数染料为带色的有机酸或碱类，难溶于水，而易溶于有机溶剂中。为使它们易溶于水，通常制成盐类。
微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质以及其他化合物组成。所以，微生物细胞表现出两性电解质的性质。两性电解质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带正电，在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。[1]染料可按其电离后染料离子所带电荷的性质，分为酸性染料、碱性染料、中性（复合）染料和单纯染料四大类。
1、酸性染料
这类染料电离后染料离子带负电，如伊红、刚果红、藻红、苯胺黑、苦味酸和酸性复红等，可与碱性物质结合成盐。当培养基因糖类分解产酸使pH值下降时，细菌所带的正电荷增加，这时选择酸性染料，易被染色。
2、碱性染料
这类染料电离后染料离子带正电，可与酸性物质结合成盐。微生物实验室一般常用的碱性染料有美兰、甲基紫、结晶紫、碱性复红、中性红、孔雀绿和蕃红等，在一般的情况下，细菌易被碱性染料染色。
3、中性（复合）染料
酸性染料与碱性染料的结合物叫做中性（复合）染料，如瑞脱氏（Wright）染料和基姆萨氏（Gimsa）染料等，后者常用于细胞核的染色。
4、单纯染料
这类染料的化学亲和力低，不能和被染的物质生成盐，其染色能力视其是否溶于被染物而定，因为它们大多数都属于偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如紫丹类（Sudanb）的染料。

❸ 生物实验中怎样将装片迅速染色，我染色的时候不成功

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❹ 给细菌染色的方法都有几种，怎么操作，都用复红染色吗麻烦一一讲来，详细点，本人初学者.

细菌染色分为活菌染色跟死菌染色两种。其中死菌染色分为正染色跟负染色。正染色又包括普通染色与特殊染色两种。普通染色有简单染色法、革兰氏染色法和抗酸染色法；特殊染色分为芽孢染色法、荚膜染色法和细胞壁染色法。一般都只用革兰氏染色法跟抗酸染色法。

革兰氏染色法(Gram's stain)是最常用的细菌染色法。细菌经结晶紫初染染成蓝色。革兰氏染色阳性菌（G+）细胞壁肽聚糖层数多，且肽聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密，染料复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而革兰氏染色阴性菌（G-）细胞壁脂类含量多，肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解，使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色为无色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。
①将结晶紫染液加于涂膜上，染色（初染）1min。②水洗后加芦戈氏碘液处理(媒染)1min。③水洗后用95％酒精脱色，脱色时频频摇动玻片，直至流下的液体无色为止(约需0.5min)。④水洗后加石炭酸复红稀释液染色(复染)0.5min。⑤水洗，用滤纸轻轻吸干，待标本充分干燥后进行镜检。染色过程中，水洗要用自来水的细流徐徐冲洗，冲洗涂膜的背面，勿使强水流直接冲到涂膜上。

抗酸染色法（acid-fast stain）对分枝杆菌属等一般染色法不易着色的抗酸性细菌染色。要注意：1）涂片要略厚；2）加温染色或延长染色时间，加温时随时补加染色液；3）分枝杆菌呈红色（+），其他细菌和背景为蓝色。
①石碳酸复红加温染色8~10分钟。②3%的盐酸酒精脱色约1~2分钟，脱色是轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止。③水洗后，用碱性美蓝复染1分钟。④再次水洗，印干。

芽孢染色法是专门给细菌芽孢染色的。要注意：1）芽孢染色用的菌种应控制菌龄，使大部分芽孢仍保留在菌体上为宜；2）染色加热过程要及时补充染液，切勿让涂片干涸。
①孔雀绿加热染色5分钟。②水洗。③番红染色2~3分钟。④水洗，干燥。

荚膜染色法是专门给与染料亲和性弱的细菌荚膜染色。由于荚膜很薄，且含水量高（90%以上），易变形，所以制片和染色时一般不用热固定。这个包括黑素负染色法、Leifson染色法跟Tyler染色法。
黑素负染色法：
1.制菌液：在洁净载破片一端加一滴蒸馏水，按无菌操作要求，用接种环取少量斜面试管培养物于蒸馏水中，轻轻混匀。
2.涂片（推片法）：取另一块边缘光滑的载玻片，使之一端与菌液接触，然后迅速均匀地将菌液推向玻片的另一端，使菌液涂成一薄层。置空气中自然干燥。注意：勿热固定。
3.复红染色：滴加石炭酸复红染色液覆盖涂布面，染色4~5分钟后，除去多余染液（勿用水洗）。干燥时间不要太长，防荚膜脱水。
4.黑素染色：在玻片一端加一滴1%黑素液，再取一块边缘光滑的裁玻片，当边缘与黑素液接触后，迅速均匀地推向玻片另一端，使成一薄层。置空气中自然干燥。
5. 镜检（油镜）：菌体呈红色，背景呈黑色，荚膜无色。
注意事项：滴黑色素要量少；取菌要适量。
Leifson染色法
1.制备涂片同前，自然干燥。
2.滴加Leifson’s染色液覆盖涂布面，染色10分钟，倾去多余染料（勿用水洗）。
3.滴加硼酸钠美蓝染色液，染色5分钟，轻轻用水冲洗，置空气中自然干燥。
4.油镜下镜检，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。
Tyler染色法
1.制备涂片同前，自然干燥。
2.滴加结晶紫冰醋酸染色液覆盖涂布面，染色5~7分钟。倾去多余染料（勿用水洗）。
3.用20%CuS04水溶液轻轻冲去染料，用吸水纸印干后，置空气中自然干燥。
4.油镜下检查，菌体呈紫色，荚膜呈浅紫色或浅蓝色。

细胞壁染色法是观察细菌细胞壁时采用的染色法。细菌细胞壁很薄，它与染料结合的能力差，不易着色，在细菌的染色过程中，一般情况染料都是通过细胞壁的渗透、扩散等作用而进入细胞，细胞壁本身并未染色，因此，欲通过染色来观察细胞壁，必须设法使细胞壁能着色，而细胞质则不易着色，常用的方法有单宁酸法和磷钼酸法。单宁酸和磷钼酸都是起媒染作用，它们使细胞壁形成可着色的复合物，而使细胞质不易被着色，经结晶紫或甲基绿染色后，便可在普通光学显微镜下观察到细胞壁。
根据细菌细胞在高渗溶液中或用乙醚蒸气处理后，会产生质壁分离这一现象，经染色后也可在普通光学显微镜下区分细胞壁和细胞质膜。
1．单宁酸法
(1)将培养16—18小时的巨大芽孢杆菌按常法制成涂片。
(2)用5％单宁酸染5分钟后，水洗。
(3)用0．2％结晶紫染3—5分钟，水洗，吹干。用油镜观察，细胞壁呈紫色，细胞质呈淡紫色。
2．磷钼酸法
(1)制备浓厚的涂片，在未干时浸入1％磷钼酸水溶液3—5分钟。
(2)用1％甲基绿水溶液染3—5分钟。
(3)水洗后，吹干，用油镜观察。细胞壁为绿色，细胞质无色。
3．区分细胞壁与细胞质膜
(1)乙醚蒸气法
(a)将巨大芽孢杆菌涂布于盖玻片上，翻转盖玻片使其放在乙醚蒸气瓶的瓶口上蒸3分钟。
(b)取下盖玻片置Bouin氏固定液中30分钟后取出，水洗。
(c)用硫堇染色30秒钟。
(d)水洗，水封，置油镜下观察。
(2)NaCl法
(a)取一滴25％NaCl溶液于洁净的载玻片上。
(b)挑一小环培养6小时的枯草芽孢杆菌，在25％NaCl水滴中涂布均匀，待自然干燥。
(c)滴加0．01％结晶紫于其上，使盖满有菌部分，30秒钟后水洗，干燥，用油镜观察结果。

❺ 微生物鉴别染色方法有哪些

检验常用染色法包括 1）革兰氏染色法 2）抗酸染色法 3）美兰染色法 4）异染颗粒染色法 5）细菌鞭毛染色法 6）荚膜染色法芽孢染色法 7)布氏杆菌科兹洛夫斯基染色法 8)结核杆菌荧光染色法等主要染色法 革兰氏染色法染液配制 1。结晶紫染液：称取结晶紫（龙胆紫）14g，溶于95%酒精100ml中，配成饱和液，再取饱和液20ml与1%草酸铵溶液（1g草酸铵溶于100ml蒸馏水溶解即成）80ml混匀即成2。卢戈氏碘液：碘化钾2g于10ml蒸馏水中，再加碘1g，待碘全部溶解后（时间较长）加蒸馏水200ml即成3。95%酒精4。（1）石碳酸复红液：称取碱性复红（碱性品红）4g溶于95%酒精100ml中成饱和液，再取饱和液10ml与5%石碳酸溶液（5ml石碳酸溶于100ml蒸馏水）90ml混匀即成，（2）稀释石碳酸复红液：取石碳酸复红液10ml加入蒸馏水90ml即成染色方法：1。涂片 将菌液直接涂在载玻片上，经培养的菌落要加生理盐水混匀涂片，等待干燥（固定）2。将结晶紫染液滴加在已固定的涂片上，染色1分钟后用水冲去剩余燃料3。滴加卢戈氏碘液1分钟后水洗，在滴加95%酒精脱色，摇动玻片至紫色不在脱色为止（约需1分钟），水洗4。用稀释石碳酸复红液复染30秒至1分钟5。水洗待干，镜检6。革兰氏阳性菌染成紫色，革兰氏阴性菌染成红色

❻ 单染色法的基本步骤有哪些有何注意事项

一、单染色法的基本步骤：

1．涂片取两块干净的载玻片，各滴一小滴生理盐水于载玻片中央，用无菌操作，分别挑取金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌于二载玻片的水滴中，调匀并涂成薄膜。注意滴生理盐水时不宜过多，涂片必须均匀。

2．干燥于室温中自然干燥。

3．固定涂片面向上，于火焰上通过2—3次，使细胞质凝固，以固定细菌的形态，并使其不易脱落。但不能在火焰上烤，否则细菌形态将毁坏。

4．染色放标本于水平位置，滴加染色液于涂片薄膜上，染色时间长短随不同染色液而定。吕氏碱性美兰染色液约染2-3分钟，石炭酸复红染色液约染1-2分钟。

5．水洗染色时间到后，用自来水冲洗，直至冲下之水无色时为止。注意冲洗水流不宜过急，过大，水由玻片上端流下，避免直接冲在涂片处。冲洗后，将标本晾干或用吹风机吹干，待完全干燥后才可置油镜下观察。

6．镜检按实验程序进行显微镜观察。

二、注意事项：

(1)载玻片要清洁无油污，否则菌液不易涂开。涂片时取培养物宜少，培养物涂层宜薄，涂层过厚则不易观察细菌形态。

(2)干燥和固定时，玻片不能直接在离火焰很近的位置上烘烤，否则会破坏细菌形态并使之变形，影响观察结果。

(3)观察时如需用到油镜，油镜检查前玻片应完全干燥，观察后要将油镜用擦镜纸等彻底擦拭干净。

单染色法原理：

简单染色法即只用一种染料对涂片进行染色，该法简便易行，适用于菌体的一般形态观察。通常情况下由于细菌菌体多带负电荷，易和带正电荷的碱性染料结合而被染色，因此常用碱性染料进行简单染色，如美蓝、碱性复红、结晶紫、孔雀绿、番红等。

所有的苯胺染料，均可用来做简单染色法的染色剂。在进行染色之前的制片过程是影响染色结果好坏的关键性步骤。

❼ 在观察活细胞中的线粒体结构时常用什么进行染色

（1）染色体易被龙胆紫、醋酸洋红等碱性染料染成深色；甲基绿能使DNA呈绿色；健那绿是专一性染线粒体的活细胞染料，能将线粒体染成蓝绿色．
（2）在“检测生物组织中的脂肪”实验中，50%酒精的作用是去浮色．在“绿叶中色素的提取和分离”实验中，酒精可作为有机溶剂来提取绿叶中的色素．
故答案为：
（1）龙胆紫（或醋酸洋红也） 甲基绿 健那绿
（2）去浮色 提取绿叶中的色素

❽ 细菌中革兰氏染色法的过程是怎样的

微生物的染色方法很多,各种方法应用的染料也不尽相同,但是一般染色都要通过制片及一套染色操作程序.
1、制片
在干净的载玻片上滴上一滴蒸馏水,用接种环进行无菌操作,挑取培养物少许,置载玻片的水滴中,与水混合做成悬液并涂成直径约1厘米的薄层,为避免因菌数过多聚成集团,不利观察个体形态,可在载玻片之一侧再加一滴水,从已涂布的菌液中再取一环于此水滴中进行稀释,涂布成薄层,若材料为液体培养物或固体培养物中洗下制备的菌液,则直接涂布于载玻片上即可.
2、自然干燥
涂片最好在室温下使其自然干燥,有时为了使之干得更快些,可将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形.
3、固定
标本干燥后即进行固定,固定的目的有三个：
1）杀死微生物,固定细胞结构.
2）保证菌体能更牢的粘附在载玻片上,防止标本被水冲洗掉.
3）改变染料对细胞的通透性,因为死的原生质比活的原生质易于染色.
固定常常利用高温,手执载玻片的一端（涂有标本的远端）,标本向上,在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3—4次,共约2—3秒钟,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜（不超过60℃）,放置待冷后,进行染色.
以上这种固定法在微生物实验室中虽然应用较多普遍,但是应当指出,在研究微生物细胞结构时不适用,应采用化学固定法.化学固定法最常用的固定剂有：酒精（95%）,酒精和醚各半的混合物,丙酮,1—2%的饿酸等.饿酸能很快固定细胞但不改变其结构,故较常用.应用饿酸固定细胞的技术如下：在培养皿中放一玻璃,在玻璃上放置玻璃毛细管,在毛细管中注入少量的1—2%饿酸溶液,同时在玻璃上再放置湿标本涂片的载玻片,然后把培养皿盖上,经过1—2分钟后把标本从培养皿中取出,并使之干燥.
4、染色
标本固定后,滴加染色液.染色的时间各不相同,视标本与染料的性质而定,有时染色时还要加热.染料作用标本的时间平均约1—3分钟,而所有的染色时间内,整个涂片（或有标本的部分）应该浸在染料之中.
若作复合染色,在媒染处理时,媒染剂与染料形成不溶性化合物,可增加染料和细菌的亲和力.一般固定后媒染,但也可以结合固定或染色同时进行.
5、脱色
用醇类或酸类处理染色的细胞,使之脱色.可检查染料与细胞结合的稳定程度,鉴别不同种类的细菌.常用的脱色剂是95%酒精和3%盐酸溶液.
6、复染
脱色后再用一种染色剂进行染色,与不被脱色部位形成鲜明的对照,便于观察.革氏染色在酒精脱色后用番红,石碳酸复红最后进行染色,就是复染.
7、水洗
染色到一定的时候,用细小的水流从标本的背面把多余的染料冲洗掉,被菌体吸附的染料则保留.
8、干燥
着色标本洗净后,将标本晾干,或用吸水纸把多余的水吸去,然后晾干或微热烘干,用吸水纸时,切勿使载玻片翻转,以免将菌体擦掉.
9、镜检
干燥后的标本可用显微镜观察.
综上所述,染色的基本程序如下：
制片→固定→媒染→染色→脱色→复染→水洗→干燥→镜检.

❾ 简述革兰氏染色的操作步骤

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：

1）涂片固定。

2）草酸铵结晶紫染1分钟。

3）蒸馏水冲洗。

4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。

5）水洗，用吸水纸吸去水分。

6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。

7）蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。干燥，镜检。

(9)生物实验中怎么染色扩展阅读

革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

在治疗上，大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感）：大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，可以选择青霉素族，头孢曲松钠等。

革兰氏阴性菌，大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素，靠内毒素使人致病。而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感，可以选择氟喹诺酮类药物如诺氟沙星，左氧氟沙星等，也可以选择大环内酯类比如克拉霉素、罗红霉素等。所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是阴性菌，在选择抗生素方面意义重大。

❿ 革兰染色的实验步骤

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：

1、涂片固定。

2、草酸铵结晶紫染1分钟。

3、蒸馏水冲洗。

4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。

5、水洗，用吸水纸吸去水分。

6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。

7、蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。干燥，镜检。

(10)生物实验中怎么染色扩展阅读：

革兰染色反应的原理：

革兰染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。

革兰染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。

细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。

革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色。

革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。