如何保证微生物检查的准确性

㈠ 怎样做好微生物检验质量控制

怎样做好微生物检验质量控制
微生物学检验室内质量控制包括：①对细菌检验人员的要求；②操作手册；③仪器设备的功能监测；④培养基的质量控制；⑤试剂、染色液及抗血清的质量控制；⑥标本检验的质量控制；⑦标准菌株的来源和保存及室内质量的全面控制七个方面。
质量控制：满足质量要求的操作技术和活动。
质量保证：为了满足实验室质量要求
，制定相应的计划，实施证明（记录）所进行的一系列的系统活动。
外部质量控制：通过互相校准和/或检验对实验室的操作和结果所进行的控制。
内部质量控制：实验室内部采取的以对比分析、跟踪以及相关方法，对实验室工作的连续性控制计划。

㈡ 食品微生物检验如何进行质量控制

食品微生物检验如何进行质量控制

在食品微生物检验工作中，检验流程包括检验思路的确定、标准检验方法的使用、培养基的配制、样品前处理、检验结果的判断、原始记录、报告等许多环节，其中手工操作也较多，影响结果准确性的因素也较多，实验室必须通过行之有效的质量控制措施，持续地加以监督和控制，并结合必要的室间质量控制手段，才能确保检验结果的准确性。下面是我为大家带来的关于食品微生物检验如何进行质量控制的知识，欢迎阅读。

主要可从下几方面进行质量控制：

1检验人员方面：实验室的检验水平与检验人员素质密切相关，业务技术水平和工作责任心是检验人员素质的核心所在。这就要求检验人员必须具备扎实的理论基础知识和熟练的操作技能，要求检验人员具备高度的工作责任心和工作热情。实验室可通过培训和继续教育、实验室间的交流，必要时进行考核等手段，来不断提高检验人员的业务水平，在实验室质量体系文件中强调检验人员工作责任心的`重要性，通过制定的奖惩制度来规范检验人员的工作行为。

2仪器设备方面：实验室所有仪器均应在检定有效期内使用，必要时还要进行期间核查。在此基础上可通过一些监控手段来确保仪器设备保持最佳性能，如高压蒸汽灭菌器，可用生物指示剂嗜热脂肪杆菌ATCC7953(2)或化学指示剂如变色胶带监视灭菌效果;需要控制温度的仪器，应在工作前和工作后做好温度的记录，不符合应及时调整;生物安全柜要定期由专业人员更换滤网，对紫外线消毒设备必须三个月检查一次其消毒性能等等。

3检验耗材方面：如培养基：目前大多数实验室都是使用市售干粉培养基，这些来自着名公司的培养基，质量比较稳定，但在购买和使用前首先要对外观色泽和均一性、pH值、水分含量、批次或批号、琼脂凝胶的硬度、选择性等进行初次评估。用质控菌株进行预测，确保培养基、试剂达到预期效果。

在使用市售培养基时应注意以下几方面：

(1)选用国内外知名品牌和信誉度好的产品;

(2)要根据培养基储存条件储存，尽量少包装;

(3)要根据日常工作需要作为计划，控制在有效期内用完;

(4)购回试剂应对品名、生产日期、保质期做好记录，检查密封性、标签牢固性;(5)在配置时应仔细检查原料，如发现结块、变色严禁使用;

(6)所有培养基要有配制称量时要有记录，把剩余培养基密闭好;

(7)严禁使用过期的、污染的、失了水的培养基。

标准菌株：必须做好明确的作业指导书，实施标准菌株的规范管理，做好菌株的传代验证，这样才能确保标准菌株在实验中应起的作用等等。

4样品采集方面：因样品采集并非实验人员进行，样本采集是否合格规范要求，是实验成败的又一关键因素。因此，从事食品微生物检验的工作人员，要注意加强与采样人员的沟通，向样品采集者讲解采集样本的方法、要求，指导他们规范采集样本，如无菌要求、随机方法、种类、数量、采集部分、冷藏或保温、运送方式、安全要求等。实验室收到样本后，应仔细核对检验内容与送检单，对不符合检验要求的样本，注明原因退回。

最后，要求每个食品微生物检验工作者都应提高对微生物检验质量控制工作的认识，在日常工作中要特别重视实验室质量控制工作，以确保检验结果的准确性和权威性。要求检验人员应加强对《质量手册》和《程序文件》学习，发现问题，及时记录，作为管理体系文件的修订、补充、完善的依据。要求检验人员对实验的整个过程应在工作当时予以记录，不允许事后补记或追记。同时，管理者应防止片面重视专业理论知识和操作技能培训，轻视思想道德教育和法制观念教育，要努力打造一支思想过硬、品德高尚、专业扎实、技术精湛的食品微生物检验队伍。

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㈢ 微生物检测手段及注意事项

1. 微生物计量法

1.1 体积测量法

又称测菌丝浓度法，通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液(如10 mL)放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间(如5 min)和转速(如5000 rpm)，离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为(10-v)/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。

1.2称 干重法

可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10~20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1~5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105 ℃或100 ℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80 ℃或40 ℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40 ℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母(Activity Dry Yeast, ADY),一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。

1.3 比浊法

微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。如使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600 nm处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.coli的生长及诱导时间。

1.4 菌丝长度测量法

对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长。

2. 微生物计数法

2.1 血球计数板法

血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1 mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1 mm2面积上刻有400个小方格。通过油镜观察，统计一定大格内微生物的数量，即可算出1 mL菌液中所含的菌体数。这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。

2.2 染色计数法

为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。借助不同的染料对菌体进行适当的染色，可以更方便的在显微镜下进行活菌计数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液，染色后在显微镜下观察，活细胞为无色，而死细胞为蓝色。

2.3 比例计数法

将已知颗粒(如霉菌孢子或红细胞)浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。这种计数方法比较粗放。并且需要配制已知颗粒浓度的悬液做标准。

2.4 液体稀释法

对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5 mL试样，接种1 mL到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN(Most Probable Number)得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。

2.5 平板菌落计数法

这是一种最常用的活菌计数法。将待测菌液进行梯度稀释，取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在凝固前均匀混合，或将菌液涂布于已凝固的固体培养基平板上。保温培养后，用平板上出现的菌落数乘以菌液稀释度，即可算出原菌液的含菌数。一般以直径9 cm的平板上出现50~500个菌落为宜。但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数，而且同时将菌液中的'细菌进行了一次分离培养，获得了单克隆。

2.6 试剂纸

在平板计数法的基础上，发展了小型商品化产品以供快速计数用。形式有小型厚滤纸片，琼脂片等。在滤纸和琼脂片中吸有合适的培养基，其中加入活性指示剂2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(TTC，无色)待蘸取测试菌液后置密封包装袋中培养。短期培养后在滤纸上出现一定密度的玫瑰色微小菌落与标准纸色板上图谱比较即可估算出样品的含菌量。试剂纸法计数快捷准确，相比而言避免了平板计数法的人为操作误差。

2.7 膜过滤法

用特殊的滤膜过滤一定体积的含菌样品，经丫叮橙染色，在紫外显微镜下观察细胞的荧光，活细胞会发橙色荧光，而死细胞则发绿色荧光。

3. 间接测定法

微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的生理指标很多，它们可作为生长测定的相对值。因此可利用生理指标等间接参数来测定生物量。

3.1 测定含氮量

大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母为7.5%，霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25，即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，如用硫酸，过氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas测N2气法。Dumas测N2气法是将样品与CuO混合，在CO2气流中加热后产生氮气，收集在呼吸计中，用KOH吸去CO2后即可测出N2的量。

3.2 测定含碳量

将少量(干重0.2~2.0 mg)生物材料混入1 mL水或无机缓冲液中，用2 mL 2%的K2Cr2O7溶液在100 ℃下加热30分钟后冷却。加水稀释至5 mL，在580 nm的波长下读取吸光光度值，即可推算出生长量。需用试剂做空白对照，用标准样品做标准曲线。

3.3还原糖测定法

还原糖通常是指单糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通过还原糖的测定可间接反映微生物的生长状况，常用于大规模工业发酵生产上微生物生长的常规监测。方法是，离心发酵液，取上清液，加入斐林试剂，沸水浴煮沸3分钟，取出加少许盐酸酸化，加入Na2S2O3临近终点时加入淀粉溶液，继续加Na2S2O3至终点，查表读出还原糖的含量。

3.4 氨基氮的测定

离心发酵液，取上清液，加入甲基红和盐酸作指示剂，加入0.02 mol/L的NaOH调色至颜色刚刚褪去，加入底物18%的中性甲醛，反应数刻，加入0.02 mol/L的使之变色，根据NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根据培养液中氨基氮的含量，可间接反映微生物的生长状况。

3.5 其他生理物质的测定

P，DNA，RNA，ATP，NAM(乙酰胞壁酸)等含量以及产酸，产气，产CO2(用标记葡萄糖做基质)，耗氧，黏度，产热等指标，都可用于生长量的测定。也可以根据反应前后的基质浓度变化，最终产气量，微生物活性三方面的测定反映微生物的生长。如在BMP-2的发酵生产上，随时监测溶氧量的变化和酸碱度的变化，判断细菌的长势。

4. 商业化快速微生物检测法

微生物的检测，其发展方向是快速，准确，简便，自动化，当前很多生物制品公司利用传统微生物检测原理，结合不同的检测方法，设计了形式各异的微生物检测仪器设备，正逐步广泛应用于医学微生物检测和科学研究领域。例如：

4.1 试剂盒，培养基等手段

抗干扰培养基和微生物数量快速检测技术结合解决了传统微生物检测手段不能解决的难题，为建立一套完整的抗干扰微生物检测系统奠定了坚实的基础。如：抗干扰微生物培养基，新型生化鉴定管，微生物计数卡，环境质量检测试剂盒等，可方便的用于多项检测。

4.2 借助新型先进仪器

BACTOMETER全自动各类总菌数及快速细菌检测系统可以数小时内获得监测结果，样本颜色及光学特征都不影响读数，对酵母和霉菌检测同样高度敏感原理是利用电阻抗法(Impedance Technology)将待测样本与培养基置于反应试剂盒内，底部有一对不锈钢电极，测定因微生物生长而产生阻抗改变。如微生物生长时可将培养基中的大分子营养物经代谢转变为活跃小分子，电阻抗法可测试这种微弱变化，从而比传统平板法更快速监测微生物的存在及数量。测定项目包括总生菌数，酵母菌，大肠杆菌群，霉菌，乳酸菌，嗜热菌，革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌等。

微生物OD值是反映菌体生长状态的一个指标，OD是Optical Density(光密度)的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度。通常400～700 nm 都是微生物测定的范围，需要紫外分光光度计测最大吸收波长。用得最多的是：505 nm测菌丝菌体、560 nm测酵母、600 nm测细菌。用测OD方法画微生物生长曲线时，同一株菌的起始培养浓度可以准备多管(根据检测点的需要，如需检测10个点，就准备10管)，然后每个点取一管出来测OD值就行了。

一般测菌体密度的OD的波长范围是580 nm-660 nm，如枯草芽孢杆菌用600 nm，已经属于可见光区(200 nm～400 nm为紫外光区，400 nm～800 nm为可见光区)。空白如用水做，需要离心洗涤菌体;空白如用不接种的培养基做就不需要洗涤，但是不接种的培养基要和接种的同时培养以求条件一致，最后注意一般OD值在控制在0.1~0.4最好，在这个区内的值就可靠，如果OD大于1.0，一般要稀释后再测，因为OD太大，分光光度计的灵敏度就会显着降低。

一般都测吸光值，而且最好是整个实验过程中，保持发酵液或菌体的稀释倍数一致，吸光值与稀释倍数不一定成正比，可保证整个实验点有可比性。且取值的时候要连续读数，重复3次的数最好。

另，用分光光度计测微生物的OD值为什么要把波长设为600 nm

这个波长其实只是针对浊度，而分光光度计在600 nm处对浊度的反应比较灵敏。测吸收峰的实际意义并不大，比如LB摇瓶培养过夜的大肠杆菌，其实在400多纳米处的吸收最大，但那很可能是培养液的吸收峰。

㈣ 微生物日常检验过程中的注意事项

微生物日常检验过程中的注意事项

在微生物检验操作过程中，要保证检测环境(如超净台、检测室)以及所用工器具的洁净程度，同时保证人员各种操作的规范性，尽量保证其无菌性，防止因人为原因操作失误而出现误差结果，同时在适宜温度进行培养，为合理决策和指导生产提供依据。下面是我为大家带来的关于微生物日常检验过程中的注意事项的知识，欢迎阅读。

培养基的灭菌及使用

1.每次配制时，要注意其生产日期是否在保质期内，查看其开瓶日期及瓶口密封性，保证其未变质，并且未吸潮。

2.培养基配制时，称量要准确，包括盐水的分装要准确。

3.一定要保证现配制现灭菌，未灭菌的配好培养基不能长时间放置，更不可隔夜。

4.灭菌时要保证恒温、恒压，同时要保证有效的灭菌时间。

5.灭菌过的培养基要冰箱保存，可保存一周，一般不超过 3 天。而且要遵循“先入先出”原则，先配制的要先使用。

6.在使用时，要根据当班次的使用量，用水浴锅先将培养基溶化为液态，然后及时调低水浴温度(先化好的可从水浴取出，放在水浴锅锅盖上)待用，千万不可长时间使培养基处于高温状态。

7.做产品微生物检测时，倾倒培养基温度在 45℃左右，不可过烫，避免将菌烫死;也不可过凉，化好的培养基又结块凝固，不便于观察结果。

8.每瓶培养基均要做空白。

9.尽量集中做样，避免频繁打开同一瓶培养基瓶塞，增大培养基的污染几率，出现误差结果。

10.培养基剩余过少时，可先将其倾倒成空白用板。

检测环境的维持

一、大环境(检测室)

1.检测时，窗户和空调要关闭，或用酒精对房间进行喷雾消毒，避免房间内空气流通影响超净台内部环境(最好在有通排风系统的恒温恒湿无菌间进行操作)。

2.如果在原来的原料微生物检测室进行检测，要定期开启紫外灯，对房间进行杀菌。

二、小环境(超净工作台)

1.定期清洁初效过滤器，要及时更换。

2.检测前，将超净台内部进行清洁，用 75%酒精进行擦拭消毒，并提前半小时将超净台紫外灯打开，对超净台内部环境进行杀菌。

3.关紫外灯，开风机，调整合适进风量，风量不可过低。

4.每次检测后，要对超净台内部进行清理、清洁，并用 75%酒精进行擦拭消毒。

5.紫外灯根据其使用寿命要及时更换。

6.检测同时，要做上相应菌落检测的`环境空白。

7.检测区域的选择：

a、一般在距离超净台外沿的 1/3-2/3 区域进行无菌操作;

b、要在酒精灯火焰的外焰保护区域进行操作。

工器具的洁净度

1.玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌。

2.检测用剪刀、勺子等物品要做到检测专用，不可与其它操作器具混用，使用时，先用75%酒精消毒，再采用灼烧方式进行灭菌。

3.接种针(环)采用灼烧方式进行灭菌，但要注意检测时要先将接种针(环)进行冷却。

样品的采集及检测

一、保证采样器具的无菌性

1.玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌，保证恒温、时间足够(但不可时间过长，容易导致玻璃器皿易裂纹而报废)。

2.取样筐：使用前要用75%酒精进行喷洒消毒。

3.取样勺：要保证其清洁消毒，清洁后用75%酒精进行擦拭消毒。

4.取样袋：可先用酒精进行擦拭消毒，再在超净台用紫外灯照射消毒，(包装车间要在传递窗用紫外灯照射消毒)。

5.电子称表面用 75%酒精消毒。

二、人员操作

1.保证手部的清洗、消毒：取样前及检测前都要先洗手再消毒。

2.取样要具有代表性(随机样、目的样、综合样)且要标示清楚。

3.取样完毕，不可在车间逗留，要及时将样品放入超净台，对其外表面进行紫外灯照射消毒。

4.在要求的检测区域进行操作。

5.检测前，要用 75%酒精棉球对样品袋口部进行擦拭消毒，再开口。

6.往盐水瓶加样品时，要注意勺子或袋子尽量不接触瓶口。

7.样品计量要准确，稀释倍数也要准确(1mL 吸管不允许将管口敲掉)，进行 100 倍稀释时，1mL 吸管要伸入盐水中，不可以将样品从管壁流下去，同时要避免将管底部捅破。

8.盐水温度以 40℃左右为宜，不能过热，会将部分微生物烫死;也不能温度太低，不能将样品溶解完全。

9.进行稀释时，要摇匀，保证溶液的均一性。

10.倾倒平皿时，要注意培养基瓶口不要接触到平皿;倾倒的培养基要适量，不可以太少，在培养过程中易干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右为宜。

11.做大肠菌群样时，要提前将乳糖胆盐培养基培养管按需要量备好，放入超净台对外表面进行紫外线灭菌。

12.接二步时，要注意先将接种针(环)进行冷却，避免出现接不上菌落的情况，导致无法判断、确认。

13.检测完毕，及时放入相应培养箱进行培养，并清理清洁超净台。

微生物的培养

1.在培养过程中，要随时监控培养箱温度，保证其在适宜的温度进行培养。

2.要按照《微生物检验规范》要求及时观察结果，出现异常，要及时分析原因进行反馈。

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㈤ 如何进行微生物检验分析中的质量控制

如何进行微生物检验分析中的质量控制

质量控制对检验结果的保证非常重要，而质量控制也贯穿检验工作的整个过程。中国合格评定国家认可委员会(CNAS)于2012年9月13日发布的CNAS-CL42在2014年4月21日进行了第1次修订，并于2014年11月1日实施。其中明确了微生物检验在分析过程中质量控制需要满足如下要求。下面是我为大家带来的如何进行微生物检验分析中的质量控制的知识，欢迎阅读。

一、诊断性抗血清试剂，实验当日至少应做多价血清阴性和阳性质控：

定性试验试剂每次检测时应至少包括阳性和阴性质控菌株。不含内质控的直接抗原检测试剂，实验当日应检测阳性和阴性质控。使用的染色剂(革兰染色、特殊染色和荧光染色)，至少每周(若检测频率小于每周1此，则实验当日)用已知阳性和阴性(适用时)的质控菌株检测。凝固酶、过氧化氢酶、氧化酶、β-内酰胺酶，实验当日应做阴性和阳性质控，商业头孢菌素试剂的β-内酰胺酶试验可遵循制造商的建议。

二、实验室采用的抗菌药物敏感性试验方法的质控：

应以质控标准菌株连续检测20—30天，每一组药物/细菌超出参考范围(抑菌圈直径或MIC)的频率应不超过(≤)1/20或1/30;也可采用替代质控方案，即连续5天，每天对每一组药物/细菌重复测定3次，每次单独制备接种物，15个数据超出参考范围(抑菌圈直径或MIC)的结果应不超过(≤)1个，若失控结果为2-3个，则如前述，再进行5天，每天3次重复试验，30个数据失控结果应不超过(≤)3个。此后，应每周使用标准菌株进行质控。若检测频率小于每周1次，则每个检测日应进行质控。采用自动或者半自动仪器检测MIC值时，应按照制造商的要求进行质控。

三、厌氧菌培养：

还需要使用有效的方法检测厌氧培养环境(如以亚甲兰试条、厌氧菌或其它适当方法)。分枝杆菌检测：抗酸染色应在实验当日用适当的`阴性和阳性质控验证;荧光染色应每次实验以阴性和阳性质控验证。真菌检测：直接染色(如：抗酸染色，PAS，吉姆萨染色，墨汁染色)检查患者样品时，应在实验当日做阴性和阳性质控(某些染色如吉姆萨染色，玻片本身作为阴性质控。KOH制备的玻片不需要质控)。病毒：连续细胞传代时应定期监测支原体污染(宜监测阴性未传代的质控株，而不是培养支原体);应监测用于细胞生长培养液的动物血清的细胞毒性;应具备相应的细胞株用于病毒培养。

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㈥ 怎样做好微生物检验的工作

怎样做好微生物检验质量控制
微生物学检验室内质量控制包括：①对细菌检验人员的要求；②操作手册；③仪器设备的功能监测；④培养基的质量控制；⑤试剂、染色液及抗血清的质量控制；⑥标本检验的质量控制；⑦标准菌株的来源和保存及室内质量的全面控制七个方面。
质量控制：满足质量要求的操作技术和活动。
质量保证：为了满足实验室质量要求
，制定相应的计划，实施证明（记录）所进行的一系列的系统活动。
外部质量控制：通过互相校准和/或检验对实验室的操作和结果所进行的控制。
内部质量控制：实验室内部采取的以对比分析、跟踪以及相关方法，对实验室工作的连续性控制计划。

㈦ 微生物检验时的注意事项

微生物检验时的注意事项

微生物(microorganism)，包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物等在内的一大类生物群体，个体微小，与人类生活密切相关。广泛涉及健康、医药、工农业、环保等诸多领域。在中国大陆地区的教科书中，均将微生物划分为以下8大类：细菌、病毒、真菌、放线菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体。下面是我为大家带来的微生物检验的注意事项的知识，欢迎阅读。

一、培养基的灭菌及使用

(1)每次配置时，要注意其生产日期是否在保质期内，查看其开瓶日期及瓶口密封性，保证其未变质，并且未吸潮。

(2)培养基配置时，称量要准确，包括盐水的分装要准确。

(3)一定要保证现配制现灭菌，未灭菌的配好培养基不能长时间放置，更不可隔夜。

(4)灭菌时要保证恒温、恒压，同时要保证有效灭菌时间。

(5)灭菌过的培养基要冰箱保存，可保存一周，一般不超过 3 天。而且要遵循“先入先出”原则，先配制的要先使用。

(6)在使用时，要根据当班次的.使用量，用水浴锅先将培养基溶化为液态，然后及时调低水域温度(先化好的可从水域取出，放在水浴锅锅盖上)待用，千万不可长时间使培养基处于高温状态。

(7)做产品微生物检测时，倾倒培养基温度在 45℃左右，不可过烫，避免将菌烫死;也不可过凉，化好的培养基又结块凝固，不便于观察结果。

(8)每瓶培养基均要做空白。

(9)尽量集中做样，避免频繁打开同一瓶培养基瓶塞，增大培养基的污染几率，出现误差结果。

(10)培养基剩余过少时，可先将其倾倒成空白用板。

二、 做样环境的维持

(1)大环境(房间)

1)做样时，窗户和空调要关闭，或用酒精对房间进行喷雾消毒，避免房间内空气流通影响超净台内部环境(最好在有通排风系统的恒温恒湿无菌间进行操作)。

2)如果在原来的原料微生物检测室进行做样，要定期开启紫外灯，对房间进行杀菌。

(2)小环境(超净台)

1)定期清洁初效过滤器，要及时更换。

2)做样前，将超净台内部进行清洁，用 75%酒精进行擦拭消毒，并提前半小时将超净台紫外灯打开，对超净台内部环境进行杀菌。

3)关紫外灯，开风机，调整合适进风量，风量不可过低。

4)每次做样后，要对超净台内部进行清理、清洁，并用 75%酒精进行擦拭消毒。

5)紫外灯根据其使用寿命要及时更换。

6)做样同时，要做上相应菌落检测的环境空白。

7)做样区域的选择：

a、一般在距离超净台外沿的 1/3-2/3 区域进行无菌操作;

b、要在酒精灯火焰的外焰保护区域进行操作。

三、 工器具的洁净度

(1)玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌。

(2)做样用剪刀、勺子等物品要做到做样专用，不可与其它操作器具混用，使用时，先用75%酒精消毒，再采用灼烧方式进行灭菌。

(3)接种针(环)采用灼烧方式进行灭菌，但要注意做样时要先将接种针(环)进行冷却。

四、样品的采集及检测

(1)保证采样器具的无菌性

1)玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌，保证恒温、时间足够(但不可时间过长，导致玻璃器皿易裂纹而报废)。

2)取样筐：使用前要用 75%酒精进行喷洒消毒

3)取样勺、浓奶取样提子：要保证其清洁消毒，清洁后用 75%酒精进行擦拭消毒。

4)取样袋：可现用酒精进行擦拭消毒，再在超净台用紫外灯照射消毒，(包装车间要在传递窗用紫外灯照射消毒)。

5)电子称表面用 75%酒精消毒。

(2)人员操作

1)保证手部的清洗、消毒：取样前及做样前都要先洗手再消毒。

2)取样要具有代表性(随机样、目的样、综合样)且要标示清楚。

3)取样完毕，不可在车间逗留，要及时将样品放入超净台，对其外表面进行紫外灯照射消毒。

4)在要求的做样区域进行操作。

5)做样前，要用 75%酒精棉球对样品袋口部进行擦拭消毒，再开口。

6)往盐水瓶加样品时，要注意勺子或袋子尽量不接触瓶口。

7)样品计量要准确，稀释倍数也要准确(1mL 吸管不允许将管口敲掉)，进行 100 倍稀释时，1mL 吸管要伸入盐水中，不可以将样品管壁流下去，同时要避免将管底部捅破。

8)盐水温度以 40℃左右为宜，不能过热，将部分微生物烫死，也不能温度太低，不能将奶粉溶解完全。

9)进行稀释时，要摇匀，保证溶液的均一性。

10)倾倒平皿时，要注意培养基瓶口不要接触到平皿;倾倒的培养基要适量，不可以太少，在培养过程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右为宜。

11)做大肠菌群样时，要提前将乳糖胆盐培养基培养管按需要量备好，放入超净台对外表面进行紫外线灭菌。

12)接二步时，要注意先将接种针(环)进行冷却，避免出现接不上菌落的情况发生，导致无法判断、确认。

13)做样完毕，及时放入相应培养箱进行培养，并清理清洁超净台。

五、 微生物的培养

(1)在培养过程中，要随时监控培养箱温度，保证其在适宜的温度进行培养。

(2)要按照《微生物检验规范》要求及时观察结果，出现异常，要及时分析原因进行反馈。

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㈧ 如何提高临床微生物检验标本的采样正确率

一、 血液标本的采集
1、 皮肤消毒程序： a.75%酒精清洁局部皮肤30s以上。b.待皮肤干后，再用1%-2.%碘酊作用30s或10%碘伏作用90s以上，从穿刺点中心部位向外画圈消毒，范围不应小于3cm（直径），且不能用手指触摸消毒后的皮肤。c.皮肤碘酒干后（约1min），穿刺采集血液，采血量成人10-20ml，婴幼儿1-2ml。儿童3-5ml。d.培养瓶消毒程序：70%酒精擦拭血培养橡皮塞，作用60s；用无菌棉签清除橡皮塞表面残余酒精。用注射器无菌采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。立即送检，切勿冷藏。一般情况下可把血培养瓶放20-22℃。不放冰箱。
2、注意事项：a.怀疑菌血症应尽早采血，体温上升（38.5℃）采血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机。b.对已经使用抗菌药物，而又不能停药者，也应在下次用药前采血。切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本，也不能从静脉导管及动脉插管中取血。c.培养基与血液之比以10:1为宜，以稀释血液中的抗生素，抗体等杀菌物质；有人主张对接受抗菌药物治疗的病人，培养基与采血量之比可为20:1或大于这个比例。d.近年研究表明，将血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。e.每例至少采血两次，间隔0.5-1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。f.疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人，以肘动脉或股动脉采血为宜，除在发热期采血外，并要多次采血（24h3-4次）和增加采血量（可增加10ml）。g采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。h如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。
二、骨髓的采集
1、采集方法：在病灶部位或髂前（后）上脊处严格消毒后抽取骨髓1ml，注入血培养瓶内。
2、注意事项：a.骨髓内含有大量的单核巨噬细胞系统的细胞，因而骨髓培养对伤寒病人的诊断较血培养优越。b.用于怀疑细菌性骨髓炎病人。
三、静脉导管标本的采集
1、采集方法：a.常规导管部位皮肤消毒。b.无菌方法从病人体内拔出静脉导管，剪下导管尖端5cm，放入无菌瓶中。立即（15min内）送检，避免标本干燥。4℃保存不超过2小时。
2、注意事项：a.剪下的导管立即接种血平皿，在血琼脂平板上交叉滚动4次。然后弃之。可提高阳性率。b.肉汤反复冲洗导管腔内，冲洗液做定量培养。
四、呼吸道痰标本
1、采集方法：a.清晨起床后用凉开水漱口多次，以除去口腔内大量杂菌，用力咳出肺深部的脓痰，置于清洁干燥容器中送检。b.痰量极少者可用45℃3%-5%的氯化钠溶液约5ml雾化吸入min,进行导痰。对于咯痰量少的幼儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管，当其咯痰后用无菌棉棒采集标本。c.咳嗽无力或昏迷病人，可用吸痰管经鼻腔或口腔经气管腔内吸引痰液送检。d.气管切开者可以深入透气孔中取痰。e.可用支气管镜直接在病灶部位采集高浓度的病原菌。f.用无菌导管经鼻腔插入气管镜内，缓慢注入无菌蒸馏水5ml，取出导管。留取患者在3h内咳出的痰液，放入无菌容器中送检。
2、注意事项：a.痰标本的采集以晨痰为准，此时患者痰量较多且含菌量也多。b.标本采集后立即送检，若不能及时送检者，可暂存4℃冰箱。若晚1-2h接种，会失去苛氧菌，并使得革兰阴性菌过分生长。c.可接受的标本：痰；支气管灌洗液，支气管刷，支气管活检；肺吸出物和肺活检。不能接受的标本：唾液；24h留的痰（结核杆菌培养除外）；拭子。d.痰标本的质量评价：（用显微镜筛选）在低倍镜下，检查鳞状上皮细胞，至少10个视野，集中在有白细胞处，合格标本为白细胞与鳞状上皮细胞比例大于2:1。
五、鼻咽喉拭子标本
A.用湿的拭子（生理盐水）；需插两个鼻孔；深入3.3cm左右，转动4-5次；以上用于诊断金黄色葡萄球菌暴发时的鼻带菌者。
B.咽拭子、口腔拭子（1）采集方法（到细菌室取专用拭子）a.患者清水漱口后，由检查者将其舌外拉，用棉拭子将咽后壁或悬雍垂的后侧反复擦拭数次；b.化脓性扁桃体炎、口腔念珠菌病时，直接用棉拭子在病灶部位擦拭；c插入运送培养基中立即送检，防止干燥。
(2)注意事项a.棉拭子应避免触及舌、口腔黏膜和唾液;b.采集标本前数小时不可用消毒药物漱口或接触病灶局部。
六、胃肠道
1、粪便a.采集方法选取脓血、黏液粪便2-3g，液体粪便取絮状物1-2ml。盛于灭菌瓶中或蜡纸盒中及时送检。b.注意事项①标本要采集新鲜的，陈旧标本影响阳性检出率；②切忌粪尿混合；③若要分离阿米巴，标本要立即送检并注意保温；④运送培养基可提高阳性率；⑤分离难辨梭菌时需选不成形或水样便；⑥霍乱弧菌、大肠杆菌Ο157感染的腹泻便则为水样便或血性便；⑦标本在病理早期或治疗前采集；⑧一般认为用抗菌药三天后，标本培养病原菌阴性。
2、肛拭子在无法获得粪便的情况下，可用经无菌甘油水或无菌生理盐水湿润的肛拭子插入肛门4-5cm（幼儿2-3cm）处，轻轻旋转擦取直肠表面黏液后取出，置运送培养基中送检。

㈨ 微生物检测应注意什么事项

1、工作室要矮小平整、光滑、无凹凸不平或棱角、四壁及屋顶用不透水之材质，便于擦洗及杀菌。

2、室内采光面积应大，从室外应能看到室内的情况。

3、为保证无菌室的洁净，无菌室周围需设缓冲走廊，走廊旁再设缓冲间，其面积可小于无菌室。

4、无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及紫外灯，杀菌紫外灯离工作台以一米为宜，其电源开关应设在室外。

5、无菌室与缓冲间进出口应设推拉门，门与窗平齐，门缝要封紧，两门要错开，以免空气对流造成污染。

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㈩ 用稀释法进行微生物计数时,怎样保证准确并防止污染答案

首先稀释过程中，每一次稀释10倍后，要充分震荡，摇匀，吸取过程中一定要吸取中部偏底部的菌液。在稀释过程中，做好实验室的灭菌工作，以及操作者进入无菌室前洗手消毒，穿无菌服的基本工作，另外要有较强的无菌意识。