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讲微生物导入受体细胞用什么方法

发布时间:2022-11-07 08:47:24

Ⅰ 重组DNA分子导入受体细胞的主要方法有哪些

(1)农杆菌转化法:

农杆菌是土壤中的一种微生物,在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物,对大多数单子叶植物没有感染能力。农杆菌进入植物细胞后,其Ti质粒上的T-DNA会转移到受体细胞染色体的DNA上,目的基因进入植物细胞。

(2)花粉管通道法:

在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液,利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道,将外源DNA导入受精卵细胞,并进一步地被整合到受体细胞的基因组中,随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。

(3)基因枪法:

基因枪根据动力系统可分为火药引爆、高压放电和压缩气体驱动三类。其基本原理是通过动力系统将带有基因的金属颗粒(金粒或钨粒),将DNA吸附在表面,以一定的速度射进植物细胞,由于小颗粒穿透力强,故不需除去细胞壁和细胞膜而进入基因组,从而实现稳定转化的目的。

原理:

选择一种特制的空质粒载体(如PBI121质粒载体),其上要求含有T-DNA边界序列(此处可参见词条双元表达载体系统),在序列之间含有复制原点、抗性基因、GUS报告基因、Hind Ⅲ和BamH I 等酶切位点(以上这些构成了一个T-DNA区)。

先通过双酶切反应酶切空质粒载体和目的基因,再通过酶连反应连接空质粒载体和目的基因,从而构建成完整的重组质粒。此时重组质粒的T-DNA区包括T-DNA边界序列、复制原点、突变启动子片段、GUS报告基因、抗性基因。

以上内容参考:网络-农杆菌转化法

Ⅱ 将目的基因导入受体细胞的方法有那些

DNA分子杂交技术:

用同位素标记的目的基因片段作探针,与受体染色体DNA进行杂交。

近年来研究者常采用PCR-Southern杂交技术,即先对被检测的材料进行PCR扩增,然后再用目的基因的同源探针与扩增产物进行杂交。

再采用RT-PCR检测转录产物,即以受体总RNA或mRNA为模板进行逆转录合,然后再进行PCR扩增,如果得到特异的cDNA扩增条带,则表明目的基因实现了转录。

最后还需在翻译水平上验证表达,常进行Wester blotting,将经SDS-PAGE分离的蛋白质样品通过电转移到硝酸纤维素膜上,用待定蛋白质的初级抗体与膜上吸附的蛋白质进行免疫反应,再与酶标记的第二抗体反应,通过二抗上标记酶催化的显色反应,就可以鉴定目的基因表达的特异蛋白质产物。

Ⅲ 常见目的基因导入受体细胞的方法及过程

1,植物细胞;常用农杆菌转化法(其中能将目的基因整合到Ti质粒上的T-DNA上)常用于双子叶和裸子植物。
基因枪法;单子叶植物。
花粉管通道法;剪掉柱头
2,动物细胞;显微注射技术(注射到受精卵中)
3,微生物;感受态细胞法或钙离子处理法(用含有钙离子溶液处理使其成为感受态细胞)

Ⅳ 将目的基因导入受体细胞的方法

显微注射技术是转基因动物中采用最对,也是最有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法。

Ⅳ 将目的基因导入受体细胞的方法

高中生物选修三书中内容。导入动物细胞的方法:显微注射技术。导入植物细胞的方法:农杆菌转换法。导入微生物细胞的方法:Ca离子处理法。

Ⅵ 将目的基因导入受体细胞的方法有哪些

Ⅶ 将基因导入受体细胞常用什么方法

导入植物细胞常用农杆菌转化法,花粉管通道法,基因枪法,导入动物细胞常用显微注射法,导入微生物细胞常用钙离子处理法

Ⅷ 将目的基因导入受体细胞的方法有那些

导入植物细胞:农杆菌转化法(转基因抗虫棉用的是花粉管通道法);导入动物细胞:显微注射技术(注射入受精卵中);导入原核生物:一般是将细菌用氯化钙处理,以增大细菌细胞壁的通透性,使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。

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