Ⅰ 重组DNA分子导入受体细胞的主要方法有哪些
(1)农杆菌转化法:
农杆菌是土壤中的一种微生物,在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物,对大多数单子叶植物没有感染能力。农杆菌进入植物细胞后,其Ti质粒上的T-DNA会转移到受体细胞染色体的DNA上,目的基因进入植物细胞。
(2)花粉管通道法:
在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液,利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道,将外源DNA导入受精卵细胞,并进一步地被整合到受体细胞的基因组中,随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。
(3)基因枪法:
基因枪根据动力系统可分为火药引爆、高压放电和压缩气体驱动三类。其基本原理是通过动力系统将带有基因的金属颗粒(金粒或钨粒),将DNA吸附在表面,以一定的速度射进植物细胞,由于小颗粒穿透力强,故不需除去细胞壁和细胞膜而进入基因组,从而实现稳定转化的目的。
原理:
选择一种特制的空质粒载体(如PBI121质粒载体),其上要求含有T-DNA边界序列(此处可参见词条双元表达载体系统),在序列之间含有复制原点、抗性基因、GUS报告基因、Hind Ⅲ和BamH I 等酶切位点(以上这些构成了一个T-DNA区)。
先通过双酶切反应酶切空质粒载体和目的基因,再通过酶连反应连接空质粒载体和目的基因,从而构建成完整的重组质粒。此时重组质粒的T-DNA区包括T-DNA边界序列、复制原点、突变启动子片段、GUS报告基因、抗性基因。
以上内容参考:网络-农杆菌转化法
Ⅱ 将目的基因导入受体细胞的方法有那些
DNA分子杂交技术:
用同位素标记的目的基因片段作探针,与受体染色体DNA进行杂交。
近年来研究者常采用PCR-Southern杂交技术,即先对被检测的材料进行PCR扩增,然后再用目的基因的同源探针与扩增产物进行杂交。
再采用RT-PCR检测转录产物,即以受体总RNA或mRNA为模板进行逆转录合,然后再进行PCR扩增,如果得到特异的cDNA扩增条带,则表明目的基因实现了转录。
最后还需在翻译水平上验证表达,常进行Wester blotting,将经SDS-PAGE分离的蛋白质样品通过电转移到硝酸纤维素膜上,用待定蛋白质的初级抗体与膜上吸附的蛋白质进行免疫反应,再与酶标记的第二抗体反应,通过二抗上标记酶催化的显色反应,就可以鉴定目的基因表达的特异蛋白质产物。
Ⅲ 常见目的基因导入受体细胞的方法及过程
1,植物细胞;常用农杆菌转化法(其中能将目的基因整合到Ti质粒上的T-DNA上)常用于双子叶和裸子植物。
基因枪法;单子叶植物。
花粉管通道法;剪掉柱头
2,动物细胞;显微注射技术(注射到受精卵中)
3,微生物;感受态细胞法或钙离子处理法(用含有钙离子溶液处理使其成为感受态细胞)
Ⅳ 将目的基因导入受体细胞的方法
显微注射技术是转基因动物中采用最对,也是最有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法。
Ⅳ 将目的基因导入受体细胞的方法
高中生物选修三书中内容。导入动物细胞的方法:显微注射技术。导入植物细胞的方法:农杆菌转换法。导入微生物细胞的方法:Ca离子处理法。
Ⅵ 将目的基因导入受体细胞的方法有哪些
常用方法:基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌,枯草杆菌,土壤农杆菌,酵母菌和动植物细胞等。其中,对于细菌或植物细胞,常用质粒作为载体将目的基因导入细胞内;动物细胞则用显微注射的方法将目的基因导入动物受精卵的雄性原核中。
过程:用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞,主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。例如,如果运载体是质粒,受体细胞是细菌,一般是将细菌用氯化钙处理,以增大细菌细胞壁的通透性,使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。目的基因导入受体细胞后,就可以随着受体细胞的繁殖而复制,由于细菌的繁殖速度非常快,在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。
Ⅶ 将基因导入受体细胞常用什么方法
导入植物细胞常用农杆菌转化法,花粉管通道法,基因枪法,导入动物细胞常用显微注射法,导入微生物细胞常用钙离子处理法
Ⅷ 将目的基因导入受体细胞的方法有那些
导入植物细胞:农杆菌转化法(转基因抗虫棉用的是花粉管通道法);导入动物细胞:显微注射技术(注射入受精卵中);导入原核生物:一般是将细菌用氯化钙处理,以增大细菌细胞壁的通透性,使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。