如何快速鉴定未知不明病原微生物

1. 怎么将未知的微生物鉴定到属

鉴定方法很多 1、送到鉴定机构里面，自己只需要准备样品 2、如果自己做鉴定，方法如下： 各种染色方法+镜检 筛选培养基 荧光定量PCR

2. 未知的菌落如何鉴定到种和属

首先确定种
1.选择性培养基来做一个种大概的判定（比如SS--志贺沙门，Ecca---大肠，He---好多菌都可以，碱胨水---霍乱......），根据菌落形态大小和生长情况来做初步判定，其实这个步骤也是为了纯化菌，但对菌的方向大概有了一个确定，对下步生化反应的选择也有帮助；
2.对平板上的可以菌落做生活反应，来做进一步核实，比如说，KIA双糖，氧化酶反应，v-p动力试验......；
3.如果以上符合该菌生化特性，你就可以做血清鉴定了，可以鉴定属
确定属
4.这时候可以用血清鉴定其血清分型，即属。
这个一般的微生物实验室都是有条件的
上面的2.3.4步也可用生化板条来做如API20，这个就会贵一点，但会快很多
如果有条件，有生物酶标仪，军科院的新产品，可以直接做出来菌的种，有点贵.
当然PCR还是最快捷的方法，但因为是未知菌，没有范围，也很麻烦的，引物就得准备好多.
楼上说的涂片现在用的少了，麻烦死了，除非你经验多，一下就瞧得出来，不然只能看出是球菌，弧菌，杆菌，没啥意义.
但如果你检测目标均，就可以查看国标了，差不多就是1.2.3.4几个步骤.

3. 鉴定一种未知的病害的法则和步骤是什么

采用细菌溢的方法进行鉴定。
如果是细菌病害，对细菌病害的病原鉴定，多采用“细菌溢”的方法。
切取小块病组织制片，放载玻片于显微镜下检查，如觉现有“细菌溢”从病组织（维管束）涌出，即可勿步确定为细菌病害。

4. 细菌鉴定办法有哪些，常见细菌的鉴定办法就可以

细菌的鉴定通过分离培养获得的病原菌，必须达到不含有其他微生物的纯培养程度，才能进行系统鉴定。系统鉴定就是通过病原菌的形态结构、生长特性、抗原性和病原性等检测，并用已知标准免疫血清确定分离细菌的属、种和型。微生物鉴定的程序通常是根据其形态，生长、生化特性等定种，最后根据抗原的免疫血清学检查定型。(一)形态学检查各种细菌的形态，在适宜的环境下是相对稳定的。但环境的改变，如培养基条件的改变，抗生素和化学药品的作用等，均可使细菌产生不规则的形态，并可出现细胞壁的缺陷和多样性。为此，在作细菌形态鉴定时，必须按被检菌的生长要求，选择适宜的培养基和培养条件，以及适宜的培养时间和检查方法，才能作出正确的形态学鉴定。形态学检查一般包括二方面：肉眼观察和显微镜检查。1.肉眼观察肉眼观察主要观察细菌在固体、液体、半固体，鉴别培养基上的生长情况。在固体培养基上要观察菌落形态、大小、颜色是否均匀一致，表面是光滑湿润，还是干燥无光或呈皱纹状，边缘是整齐还是不规则，菌落是隆起、扁平，还是乳头样，是透明、半透明或不透明。在液体培养基中，要观察培养基是否呈均匀浑浊，管底有无沉淀，液面有无菌膜，是否产气等。在半固体培养基上应观察细菌是否沿着接种线生长，是呈毛刷样生长还是均匀生长，上下生长是否一致。在鉴别培养基上，应观察其生长情况是否与预期的相一致，在血琼脂培养基上还要观察是否溶血及溶血圈的特点，在某些培养基上还要注意是否有臭味等。2.显微镜观察在作细菌个体形态学检查时，要根据被检菌的种类和检查项目，选用相应的染色方法，同时要注意选择适合的培养基以及细菌培养的时间，才能达到预期的目的。一般以18－24小时（生长时间长的细菌除外）的幼嫩培养菌为宜。例如，作革兰氏染色检查时，培养时间长的陈旧细菌，可能由阳性变为阴性。作细菌运动性检查时，液体培养基的幼嫩培养物（几小时到十几小时）最为适宜。作炭疽荚膜染色时，因炭疽杆菌在一般培养基上不形成荚膜，而在动物体内形成明显的荚膜，因此，应先接种小鼠，取死亡动物的病料作涂片标本镜检。作鞭毛染色时，以液体培养基为宜。芽胞的形成，因细菌种类不同，往往对培养条件如培养基、空气和培养时间等而异，但一般均要求较长时间。镜检时除注意其基本形态结构和大小（要用测微计测量）外，还应注意其排列状态、菌端形状、有无两极染色、有无形成芽胞和荚胞等。必要时可用电镜观察其微细结构。3.常用的几种染色方法涂片用的载玻片需用清洁液洗净、擦干、不留油质，否则培养物不能均匀地推开。被检材料如果是肉汤培养物，用铂金耳环取一滴，均匀涂抹于载玻片上，涂抹的范围约有手指甲大即可。随后，在酒精灯火焰上加热使之固定（即火焰固定）；被检材料如果是固体培养物，先滴一滴水（常用生理盐水）于载玻片上，用铂金耳环取少许培养物，在水滴中混匀，培养物不宜太多，菌体看不清楚。脓汁、淋巴液、乳汁也按同样方法制备抹片。血液和病变组织，直接涂抹在载玻片上，组织抹片也不能太厚，否则看不见细菌，细菌培养物抹片用火焰固定，组织抹片常用甲醇或甲醛固定。

5. 如何对样本中的微生物进行病原学诊断

摘要：病原微生物种类繁多，变异迅速，快速鉴定病原微生物的检验技术也在不断发展前进着。目前，应用比较广泛的病原微生物检测方法主要有直接涂片镜检、分离培养、生化反应、血清学反应、核酸分子杂交、基因芯片、多聚酶链反应等，该文对这些检测技术进展做一综述。 对人和动物具有致病性的微生物称为病原微生物，又称病原体，有病毒、细菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体、真菌、放线菌、朊粒等。这些病原微生物可引起感染、过敏、肿瘤、痴呆等疾病，也是危害食品安全的主要因素之一。近年来出现的SARS、高致病性禽流感、西尼罗病毒感染等疾病的传染性极强，往往造成世界性大流行，因此对病原体的检测必须做到快速、准确。常规病原学检测方法操作繁琐，检测周期长，而且对操作人员技术水平要求比较高。随着医学微生物学研究技术的不断发展，病原学诊断已不再局限于病原体水平，深入到分子水平、基因水平的检测手段不断出现并被应用于临床和实验室 J。核酸分子杂交技术、PCR技术、基因芯片技术等检测方法，自动化程度高，快速省时、无污染、结果精确，可以准确灵敏地鉴定病原微生物。1 传统的病原微生物的检测方法传统的病原微生物学实验室检查以染色、培养、生化鉴定等为主，将标本直接涂片染色镜检和接种在培养基上进行分离培养是对细菌或真菌感染性疾病进行病原学诊断的常用方法。1．1 直接涂片镜检病原微生物体形体积微小，大多无色半透明状，将其染色后可借助显微镜观察其大小、形态、排列等。直接涂片染色镜检简便快速，对那些具有特殊形态的病原微生物感染仍然适用，例如淋球菌感染、结核分枝杆菌、螺旋体感染等的早期初步诊断。直接涂片镜检不需要特殊的仪器和设备，在基层实验室里仍然是十分重要的病原微生物检测手段。1．2 分离培养与生化反应 分离培养主要用于临床标本(如血液、痰、粪便等)或培养物中有多种细菌时对某一种细菌的分离。细菌的生长繁殖需要一定时间，检测周期较长，不能同时处理批量样本。为解决这一问题，各种自动化培养和鉴定系统不断产生，传统鉴定方法也在逐步改进，大大加快了检验速度。例如Microscan WalLCAway全自动微生物分析仪，可同时做细菌鉴定和药敏试验，检验500多个菌种。苛养菌如肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌等对营养要求比较高，常规培养阳性率低。雍刚 等将不要同比例的葡萄糖、玉米淀粉、生长因子、酵母粉、氨基酸等特殊增菌剂加入到巧克力培养基中制成了新型淋病奈瑟菌培养基，大大提高了淋病奈瑟菌的分离培养率。苏盛通等在营养琼脂中加人了中药红枣、赤小豆培养甲型链球菌、乙型链球菌、肺炎链球菌等细菌，生长指数明显高于血平板。1．3 组织细胞培养 活组织细胞培养适于专营活组织细胞内生存的病原体，包括病毒、立克次体、衣原体等。不同病原体敏感的组织细胞是不一样的，将活细胞从病原体敏感的动物组织中取出在体外进行原代培养或用病原体敏感细胞系进行传代培养，再将病原体接种于相应的组织细胞中后，病原体可在其中繁殖增长，引起特异性的细胞病变效应。也可以将病原体直接接种于敏感动物体内，引起相应组织器官出现特异的病理学改变。往往可以根据这些特异的病变对病原体进行鉴定。2 血清学与免疫学检测血清学检测是通过已知的抗体或抗原来检测病原体的抗原或抗体从而对病原体进行快速鉴定的技术，简化了鉴定步骤，常用的方法包括血清凝集技术、乳胶凝集实验、荧光抗体检测技术、协同凝集试验、酶联免疫测试技术等。酶联免疫技术的应用大大提高了血清学检测的敏感性和特异性，不仅可检测样本中病原体抗原，也可检测机体的抗体成分。幽门螺奸菌在我国人群感染率高达50％ ～80％ ，应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测唾液中抗HP抗体来诊断HP感染，其结果满意。乙型肝炎病毒(HBV)在我国人群中感染率极高，ELISA应用于乙型肝炎病人早期血清学诊断的效果最为明显。临床上致病菌往往和非致病菌混合在一起，如何从这些细菌中分离出目标菌是关键。免疫磁珠分离技术(IMBS)是近年来发展起来的在微生物检测领域中一种新技术。其基本原理是将特定病原体的单抗或多抗或二抗偶联到磁珠微球上，通过抗原抗体反应形成磁珠一目标病原体复合物或磁珠一一抗一目标病原体复合物，在外部磁场磁力的作用下，将目标病原体分离出来。目前已经开发出了针对各种病原体的免疫磁珠，如大肠埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、军团菌等，广泛应用到各级科研和实验室 。经IMBS分离出的白色念珠菌可直接在显微镜下检测，检测时间缩短至4 h。IM—Bs还可以和其它检测技术联合来检测病原菌，免疫磁珠分离得到的目标菌可继续用于分离培养使大肠埃希菌0157最低检测限由200 cfu·g 提高到2 cfu·g～；IMBS结合聚合酶链反应(IMBS—PCR)可对培养条件比较特殊的细菌如苛养菌、厌氧菌进行快速检测，肉类中的产毒素型产气荚膜梭菌经IMBS．PC

6. 食源性致病微生物的快检方法

检测致病菌大概有如下几种方法。
1 传统生物学方法，按照标准检测，最麻烦，最传统，但是最经典，可作为其他方法之验证。
2 显色培养基方法，用国外进口显色培养基检测，比较方便，目前最流行，使用简单，也不贵。
3 胶体金试纸条检测，购买国外进口试纸条，现场检测，这种方法10分钟可以检测到结果。但是检测灵敏度偏低。
4 ELISA，酶联免疫实验。目前只有国外进口，欧美四家大公司垄断了全球95%以上的市场，一个96孔试剂盒，售价高达5000-6000元，非常无奈，但是是国外最流行的快速筛选技术，检测灵敏度、检测周期都比较理想，不过国内现在有公司专业在做这方面的试剂盒了，估计价格很快会降下来，可能是将来主流的检测技术了，部分已经写进国标了。
5 IC-PCR，免疫捕捉PCR，用抗体特异性识别捕捉，之后再PCR扩增。最大的优势是，病原经过抗体识别、PCR检测双重检测，可一次鉴定到种，检测灵敏度可以达到十的两次方，不用核酸提取，所有反应在一个PCR管里进行，减少了病原的损失，缺点是检测时间大致在4个小时，是一张理想的验证手段。
6 Direct-PCR，增菌后直接PCR，比较简单的验证手段，增菌后直接扩增，受PCR检测体系的现实，灵敏度偏低，但是取决于样品中的菌含量。
7 Nested-PCR，两对引物巢式PCR。两对引物两次扩增，最大的优势是检测准确性、灵敏度可绝对保障，劣势是检测时间较长。
8膜过滤PCR，利用病原富集装置，富集之后检测，最笨的一种方法，但是是最实用的，病原经过微孔滤膜过滤后，可高效富集病原 ，之后去检测，大大提高检测灵敏度。
9 BIO-PCR，培养增菌后PCR扩增，这个技术只能做研究用了，就是分离培养后，用PCR检测，乏善可陈。
10 IMS-PCR，免疫磁珠PCR，用免疫磁珠捕捉，之后进行PCR，用磁珠富集样品中的病原，之后直接PCR扩增，非常实用的方法，主要是可以富集病原。
11 BAX快速检测系统，按照系统说明书操作。贵族实验室用的东西，灵敏度和其成本、假阳性一样出色。
12 RiboPrinter快速检测系统，按照系统说明书操作。同上，大同小异。

7. 细菌分子鉴定的方法有哪些

一般从DNA、RNA和蛋白质这三个方面鉴定。将三种物质分别提取出来，各自进行鉴定。鉴定的方法可以用你提到的这些。
1.核酸杂交：简单的说，就是将需检测的核酸与标记的分子结合使得未知核酸可以被检测到。
2.脉冲场凝胶电泳：利用电场让不同大小的带电DNA分子以不同的速度移动，从而将不同大小的分子分开。可分离10kb--10mb的DNA分子。
3.16S rRNA :16S rRNA所对应的 16S rDNA基因在微生物基因组中具有高度保守性；对16S rDNA而言，如果出现3个碱基以上的差异就可以断定细菌不属于同一种属。它具有高度的灵敏性，而且不需要培养，检测指标也很单一。可以快速检测未知微生物或致病微生物。
4.RAPD：对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。先进行PCR扩增，然后电泳分离染色，在紫外透视仪上检测多态性。
5.质粒质谱分析法：我只了解过蛋白质的质谱分析技术，质粒的没有了解过。
蛋白质：将蛋白质酶解成小肽段并混合基质，用激光将呈离子化气体状态的待测物喷射，经电场到达检测器，根据到达的时间分析肽段的分子质量。

8. 病原微生物中细菌常见检测方法有哪些

1、快速测试片技术法

快速测试片是指以纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过微生物在上面的生长、显色来测定食品中微生物的方法。

细菌总数检测纸片的研制始于 20 世纪 80 年代，其主要优点是简便、实用、经济、操作性强。近年来以滤纸和美国某公司的 Petrifilm 为载体的测试片已开始被广泛应用。

2、生物电化学方法

生物电化学方法是指通过电极测定微生物产生或消耗的电荷，从而提供分析信号的方法。微生物在滋生代谢过程中，培养基的电化学性质如电流、电位、电阻和电导等会发生变化，所以可以通过检测分析这些电化学参量的变化来实现对微生物的快速测定。

常见的有：阻抗分析法、电位分析法、电流分析法等。生物电化学方法具有测量快速、直观、操作简单、测量设备成本低和信号的可控性等特点。

3、微菌落技术

微菌落是指细菌生长繁殖早期在固相载体上所形成的只能借助于显微镜观察的微小菌落。微菌落技术具有快速、经济、实用的特点，其研究始于 20 世纪50年代，定量测定技术从 20 世纪 70 年代开始，国外已有报道将该法应用于水、食品中细菌总数的快速检测。

4、气相色谱法

气相色谱应用到微生物的检测中，主要是依据不同微生物的化学组成或其产生的代谢产物各异，利用上述色谱检测可直接分析各种体液中的细菌代谢产物、细胞中的脂肪酸、蛋白质、氨基酸、多肽、多糖等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

5、高效液相色谱法

利用高效液相色谱检测可分析各种体液中的细菌代谢产物、病原微生物等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

9. 如何又快又好地检测细菌病原

细菌是严重危害养殖鱼类的微生物，个体非常微小，难以在显微镜下分辨。细菌性病原的分离及常规鉴定技术耗时较长，一般要2～3天才能获得结果，而且非常繁琐。目前发展较快的试剂盒技术，为鱼类细菌病原检测提供了简便、快速的方法。水产动物细菌性病原检测试剂盒的研发多采用生化和分子生物学方法，主要采用PCR、LAMP、核酸探针杂交和ELISA等技术，其中ELISA技术具有简便、快速、准确和灵敏的特点，易为养殖者和基层防疫人员应用。待检测的样品只需简单的研磨处理，加入试剂盒内提供的试剂，经过两步反应就可肉眼观察结果，不需特殊的仪器。根据试剂盒说明书上规定的操作步骤，可在一天内完成特定病原的检测。