药品微生物怎么检验

‘壹’ 微生物检验是什么

微生物检验是对部分产品(主要是直接入口的食品)细菌污染的定性或定量检验，通常也称卫生检验。

目前，我国对食品(如肉及肉制品、乳及乳制品、蛋品、水产、清凉饮料、罐头、糕点、调味品、蔬菜、瓜果、豆制品、酒类等)，饮用水、口服及外用药品、化妆品及需灭菌的产品均规定了卫生标准，以严格控制细菌污染，防止各种有害的病原微生物侵入身体而直接危害广大消费者的人身健康。微生物常规检验项目包括细菌总数测定、霉菌总数测定、大肠菌群的检验、肠道致病菌的检验、化脓性致病菌的检验、食物中毒菌的检验、破伤风厌氧菌的检验、活螨虫及螨虫卵的试验、致贺氏菌、金黄色葡萄球菌的检验等等。微生物检验需要严格按照检验程序，检验样品前一定提前对操作环境进行灭菌，操作过程中慎防二次污染。

‘贰’ 药品领域的微生物检测及标准

中国药典微生物限度检查法，为《中国药典》附录收载的关于药品微生物检查的法定方法。药品的不同剂型的微生物检测标准不同，具体如下：

1、制剂通则品种

制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂应符合无菌检查法规定。

2、口服给药制剂

细菌数每1g不得过l000cfu。每lml不得过100cfu。

霉菌和酵母菌数每lg或lml不得过100cfu。

大肠埃希菌每1g或lml不得检出。

3、耳、鼻及呼吸道吸入给药制剂

细菌数每1g、lml或l0cm²，不得过100cfu。

霉菌和酵母菌数每1g、lml或l0cm²，不得过10cfu。

金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌每1g、lml或l0cm²不得检出。

大肠埃希菌鼻及呼吸道给药的制剂，每1g、lml或l0cm²，不得检出。

4、阴道、尿道给药制剂

细菌数每1g、lml或l0cm²，不得过100cfu。

霉菌数和酵母菌数每1g、lml或l0cm²应小于10cfu。

金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌每1g、lml或l0cm²，不得检出。

5、直肠给药制剂

细菌数每1g不得过l000cfu。每lml不得过100cfu。

霉菌和酵母菌数每1g或lml不得过100cfu。

金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌每lg或lml不得检出。

6、其他局部给药制剂

细菌数每1g、lml或l0cm²不得过100cfu。

霉菌和酵母菌数每1g、lml或l0cm²不得过100cfu。

金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌每1g、lml或l0cm²不得检出。

7、含动物组织

含动物组织（包括提取物）的口服给药制剂每10g或10ml还不得检出沙门菌。

8、兼用途径制剂

应符合各给药途径的标准。

(2)药品微生物怎么检验扩展阅读

微生物限度检查法的注意事项：

1、当建立产品的微生物限度检查法时，应进行控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的控制菌检查。若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检查方法应重新验证。

2、检查项目应当包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

3、微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内进行。

4、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

5、除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30℃～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23℃～28℃。

6、检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10c㎡ 为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。

‘叁’ 中国药典微生物限度检查法的检验量和供试液制备

检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm²）。
除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100cm²；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml用于阳性对照试验）。
检验时,应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不得少于4片。
一般应随机抽取不少于检验用星（两个以上最小包装单位）的3倍最供试品。 根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。
1.液体供试品
取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为l:10的供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
2.固体、半固体或黏稠性供试品
取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1:10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
3.需用特殊方法制备供试液的供试品
（1）非水溶性供试品
方法1 取供试品5g（或5ml )，加至含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加人45 ℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为1 : 20的供试液。
方法2 取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯（制法见附录XII A无菌检查法中供试品的无菌检查项下）和无菌玻璃珠的适宜容器中．必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加入45 ℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇5～10分钟，萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为l : 10的供试液。
（2）膜剂供试品
取供试品100cm²，剪碎，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml（必要时可增加稀释液），浸泡，振摇，作为1:10的供试液。
（3）肠溶及结肠溶制剂供试品
取供试品10g，加pH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制剂）或pH7.6无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）至100ml，置45 ℃水浴中，振摇，使溶解，作为1 :10的供试液。
（4）气雾剂、喷雾剂供试品
取规定量供试品，置冰冻室冷冻约1小时，取出，迅速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。用无菌注射器吸出全部药液，加至适量的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（若含非水溶性成分，加适觉的无菌聚山梨酯80）中，混匀，取相当于10g或10ml的供试品，再稀释成1:10的供试液。
（5）贴剂供试品
取规定量供试品，去掉贴剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖贴剂的粘贴面，以避免贴剂粘贴在一起。然后将其置于适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷脂）的稀释剂中，用力振荡至少30分钟，制成供试液。贴剂也可采用其他适宜的方法制备成供试液。
（6）具抑菌活性的供试品
当供试品有抑菌活性时，采用下列方法进行处理，以消除供试液的抑菌活性，再依法检查。常用的方法如下。
①培养基稀释法取规定量的供试液，至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少，至不含抑菌作用。测定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时，取同稀释级的供试液2ml，每1ml供试液可等量分注多个平皿，倾注琼脂培养基，混匀，凝固，培养，计数。每1ml供试液所注的平皿中生长的菌落数之和即为1ml的菌落数，计算每1ml供试液的平均菌落数，按平皿法计数规则报告菌数；控制菌检查时，可加大增菌培养基的用量。
②离心沉淀法取一定量的供试液，500转/分钟离心3分钟，取全部上清液混合。用于细菌检查。
③薄膜过滤法见细菌、霉菌及酵母菌计数项下的“薄膜过滤法”。
④中和法凡含汞、砷或防腐剂等具有抑菌作用的供试品，可用适宜的中和剂或灭活剂消除其抑菌成分。中和剂或灭活剂可加在所用的稀释液或培养基中。

‘肆’ 微生物的传统检测方法有哪些

传统检测有三种方法

1、直接显微镜观察，正常情况，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度以及培养时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。可以通过显微镜观察菌落特征对微生物种类进行判断。

2、选择培养基培养微生物或人为提供有利于目的菌株生长的条件，选择培养基，其作用是允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养一般是通过观察微生物的同化作用类型或某一特征进行间接判断，得到的微生物往往并不只有一种，但是能够大致确定这些微生物存在的共有特征从而对其分类。

3、鉴别培养基，根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品。与选择培养相比，鉴别培养基的鉴别所得结果的范围比较小，一般可直接测定某微生物的种类。

‘伍’ 外用药微生物学检验的基本原理是什么

外用药微生物学检验的基本原理是：化脓性链球菌产生的吡咯烷酮芳香酯酶能水解吡咯烷酮β-萘基酰胺，加入N，N-二甲氧基肉桂醛试剂后产生桃红色即为阳性。

酸性物质对于碱性染料较易吸附，且吸附作用稳固；同样，碱性物质对酸性染料较易于吸附。如酸性物质细胞核对于碱性染料就有化学亲和力，易于吸附。要使酸性物质染上酸性材料，必须把它们的物理形式加以改变（如改变pH值），才利于吸附作用的发生。

学科

微生物学是高等院校生物类专业必开的一门重要基础课或专业基础课，也是现代高新生物技术的理论与技术基础。基因工程、细胞工程、酶工程及发酵工程就是在微生物学原理与技术基础上形成和发展起来的；微生物学也是高等农林院校生物类专业发展及农林业现代化的重要基石之一。随着生物技术广泛应用，微生物学对现代与未来人类的 生产活动及生活必将产生巨大影响。

以上内容参考：网络-微生物

‘陆’ 蜜丸的微生物验证

为保证药品的微生物检测检验的质量，必须对所有的检测方法进行验证，只有检测方法验证确认后才能确保验证结果的准确、可靠。我国的《药品生产质量管理规范》（1998年修订）第五十八条规定：“产品的生产工艺及关键设施、设备应按验证方案进行验证。当影响产品质量的主要因素，如工艺、质量控制方法、主要原辅料、主要生产设备等发生改变时，以及生产一定周期后，应进行再验证。第五十九条：应根据验证对象提出验证项目、制定验证方案，并组织实施。验证工作完成后应写出验证报告，由验证工作负责人审核、批准。第六十条：验证过程中的数据和分析内容应以文件形式归档保存。验证文件应包括验证方案、验证报告、评价和建议、批准人等”。
《中国药典》（2005年版）附录《药品质量标准分析方法验证》中明确指出：“药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求，在建立药品质量标准时，分析方法需经验证；在药品生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法也需进行验证。方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准起草说明或修订说明中”。此外，《中国药典》（2005年版）的药品无菌检查法和微生物限度检查法中也明确规定了无菌检查法方法验证试验和微生物限度检查法方法的验证内容：“当供试品为新的产品或供试品的检验条件发生改变时，应进行方法验证试验，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不计。验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。供试品对每一试验菌的抑菌程度应逐一进行验证”；“当供试品为新的产品或供试品的检验条件发生改变时，应进行方法验证试验，以确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性。验证时，按供试品的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证”。为何规定要进行方法学的验证？这是由于许多药品本身具有抑菌性（如抗生素类药品、含防腐剂药品）会对检查结果带来影响，因此在进行微生物检测前，需要对样品进行适当的预处理以消除样品本身对微生物检测所带来的干扰。同样，样品的预处理方式、检验条件和培养条件也都会影响到样品的微生物检测结果。因此，在确定新产品的微生物学检验时或开发新的检测方法时或原有检验条件发生改变时必须要加以验证，以确保在新产品的微生物学检验时或开发新的检测方法时或原有检验条件发生改变时的实际检验条件下，其检验方法的准确性、有效性和重现性。
目前虽然在食品、化妆品等行业的微生物检测中尚没明确规定要进行方法学的验证，但正如在绪论中指出的验证是能证明任何程序、工艺、设备、物料、活动、或系统确实能导致预期结果的文件证明的行为。因此其原理与方法同样适用这些行业，因为检测本身就是一项严谨、认真、准确、有效的科学工作。

‘柒’ 微生物检验包括哪些项目

微生物检测有一般微生物如细菌总数、霉菌和酵母计数检测，以及致病菌检测，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度以及培养时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。

根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品。与选择培养相比，鉴别培养基的鉴别所得结果的范围比较小，一般可直接测定某微生物的种类。

选择培养一般是通过观察微生物的同化作用类型或某一特征进行间接判断，得到的微生物往往并不只有一种，但是能够大致确定这些微生物存在的共有特征从而对其分类。

微生物检验范围

国内外开展微生物检验的食品种类较多，食品分类方法也不尽相同。总的来看涉及微生物检验的食品种类主要有：奶制品、预烹煮食品、饮用水、蛋制品、水果、谷物、婴幼儿食品、肉及肉制品、软体动物、禽肉、贝类、白明胶、香草（药）。

即食食品、罐头食品、调味品，粉类制品、豆制品、冷冻饮品、糖果、海鲜、甜点、蔬菜、藻类、食疗食品、米面制品等。

我国开展微生物检验的重点食品种类为：奶制品、罐头食品、调味品、蛋制品、淀粉类制品、发酵和非发酵性豆制品、冷冻饮品、糖果、饮用天然矿泉水等，其中食糖以及保健品的微生物检验为我国所独有。

‘捌’ 药物微生物检验操作时，如何防止微生物感染人体或污染环境

其实除了霉菌孢子较轻容易飞之外，其他一般常用的菌种只要稍微有些注意就不会感染人体和环境。
1.首先微生物检验操作一定要有专门的微生物室，至少有三间缓冲间，有洁净操作台，按照国家药品微生物检验操作的规定去操作，提前开紫外灯散发臭氧，开通风，做之前用酒精擦拭接触部位，手、台面、以及瓶口、试管口等。
2.每做完一个菌种试验用酒精消毒移液用试验物品，所有的带菌器皿用后全部拿到灭菌锅中消毒。实验员做完试验洗干净手，怕染菌就用酒精等擦拭。
3.最需要注意的是有孢子的霉菌类，比如黑曲霉菌，需要专门的操作台，必须有紫外，且不能有通风，并且需全密闭，只有两个口可以伸手进去，用之前和用完之后都要开紫外灯30min以上灭掉空气中和表面的微生物。
只要做到以上几点，基本上就不会对人体和环境有什么影响，我做大半年了，有时候口罩都不戴（当然规定是使要戴的），都没有因为微生物操作身体受到影响，而且是天天做大量阳性菌。

‘玖’ 微生物检验知识

微生物检验知识

微生物检验是检验技师工作的重点，你对微生物检验了解吗?下面是我为大家带来的微生物检验的知识，欢迎阅读。

一.涂片镜检结果与培养结果不吻合?

1、涂片结果是报告所有检见病原菌，而培养的目的是检出致病菌，因此会产生不一致的情况。

2、一些苛养菌需要在特殊环境或培养基上生长，因此常规培养不一定能得到结果。

我们先来谈谈这第一个问题：涂片镜检结果与培养结果不吻合?。正如谢轶老师说的那样：首先我们的搞懂什么是涂片?什么是培养?涂片的原则在排除一些检查前或检验中的因素后其实就是：所见即所得!而培养呢?是根据检验的目的',检出可能的致病菌，因此会产生不一致的情况;也正如一些老师聊到的那样：一些苛养菌，厌氧菌等需要在特殊环境或培养基上生长，因此常规培养不一定能得到结果。

二.取的明显是脓液标本，为何培养报告为无菌生长?

1、涂片结果是报告所有检见病原菌，而培养的目的是检出致病菌，因此会产生不一致的情况;

2、一些苛养菌需要在特殊环境或培养基上生长，因此常规培养不一定能得到结果。

我们先来谈谈这第一个问题：涂片镜检结果与培养结果不吻合?正如谢轶老师说的那样：首先我们的搞懂什么是涂片?什么是培养?涂片的原则在排除一些检查前或检验中的因素后其实就是：所见即所得!而培养呢?是根据检验的目的,检出可能的致病菌，因此会产生不一致的情况;也正如一些老师聊到的那样：一些苛养菌，厌氧菌等需要在特殊环境或培养基上生长，因此常规培养不一定能得到结果。

标本采集和培养方式：

1、未破裂脓肿：消毒覆于脓肿表面的皮肤，用注射器将脓肿内容物吸出，注射器针头扎入无菌橡胶瓶盖(青霉素小瓶橡胶塞)。---厌氧培养or需氧培养

2、开放病灶和脓肿：不建议做厌氧培养;用无菌生理盐水或70%酒精擦拭除去表面分泌物，尽量去除表面菌群，用拭子采集病灶底部或边缘的标本，置于需氧培养基中。---需氧培养。

三.今天的培养结果与前一天的不一样?

1、取材是否一致;

2、痰标本，选择优势菌做鉴定药敏，就可能导致两次结果不一致。

四.明显是稀便，培养结果为何正常?

1. 大便培养，通常只能鉴定志贺菌、沙门菌感染。

2. 很少医院常备致病性大肠杆菌鉴定血清。

3. 很少医院能够做艰难梭菌培养，但有一部分医院能做培养和毒素检测。

4. 很少医院能常备霍乱弧菌血清。

与国际微生物检验的差距-缺项

1. 艰难梭菌：医院感染常见病原菌，一些发达国家中排名第一

2. 肺炎链球菌尿抗原检测

3. 军团菌尿抗原检测

4. 非典型分枝杆菌

5. 呼吸道感染病毒

五.培养阳性的病原菌都需要用抗菌药物治疗吗?

1. 不是;

2. 培养阳性≠感染，可能为污染(血培养)，可能为定植(痰培养);

3. 任何结果必须结合临床情况进行评价(重要);

4. 感染部位的清创、引流、换药比使用抗菌药更重要;

改善患者全身情况：器官功能支持、纠正酸碱平衡、电解质紊乱、低蛋白血症、高血糖等。

六.选择药敏报告敏感的药物，为什么临床疗效无效?

1. 体外药敏试验只能预测体内治疗效果，一般规律，耐药=治疗无效;敏感≠治疗有效;

2. 可能不是真正的致病菌(定植或污染);

3. 细菌本身因素(如诱导耐药，生物被膜);

4. 感染部位的药代动力学因素;

5. 药敏试验中有些药物单独使用无效，但可以与其他药物联合用药。

“严重的肠球菌感染，如心内膜炎，除非证明其对庆大霉素和链霉素高水平耐药外，可用氨苄西林、青霉素或万古霉素(对于敏感株)加一种氨基糖苷类进行联合治疗，起到协同杀菌作用。”

铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、复方新诺明、1、2代头孢天然耐药。对三代头孢(噻肟、曲松)即使药敏试验敏感，在实际里程治疗中也需要超大剂量才会取得疗效。头孢中仅他啶和吡肟。

铜绿假单胞菌有对跟多药物的诱导耐药性，在体外试验可能没有表现出来，但一旦接触某种抗生素，其沉默的耐药基因可能被诱导激活，耐药性则表现出来，这种特性在β-内酰胺抗生素中尤为明显，可导致体外敏感，但实际治疗却无效。

‘拾’ 简述药品微生物检查的项目有哪些

1药物的抗菌检验
，
2灭菌制剂的无菌检查法
，
3非灭菌制剂的微生物限度检查。