㈠ 用于植物基因克隆的工具酶有哪些
分子克隆中常用的工具酶连接酶、T4 多核苷酸激酶、碱性磷酸酶、核酸酶、琼脂糖酶、蛋白酶、溶菌酶以及一些DNA 结合蛋白。
分子克隆在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因,用体外重组方法将它们插入克隆载体,形成重组克隆载体,通过转化与转导的方式,引入适合的寄主体内得到复制与扩增,然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体,可以得到插入DNA的许多拷贝,从而获得目的基因的扩增。
工具酶:基因工程涉及众多的工具酶可粗略的分为限制酶,连接酶,聚合酶,核酸酶和修饰酶五大类。其中,以限制性核酸内切酶和DNA连接酶在分子克隆中的作用最为突出。
㈡ 急!生物化学!常见水解淀粉的酶有哪些各自的产物是什么
化学中的条件是酸性条件下的水解, 得到的是最终产物——葡萄糖生物里的条件是淀粉酶(不同生物体具体名称不同),分解成二糖——麦芽糖, 而麦芽糖分解成葡萄糖需要的是麦芽糖酶
㈢ 基因表达载体的构建需要哪些工具酶
在构建基因表达载体时要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。
基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。
过程:
首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口,露出黏性末端。然后用同
一种限制酶切断目的基因,使其产生相同的黏性末端(部分限制性内切酶可切割出平末端,拥有相同效果)。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处,首先碱基互补配对结合,两个黏性末端吻合在一起,碱基之间形成氢键,再加入适量DNA连接酶,催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键,从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来,形成一个重组DNA分子。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合,形成重组DNA分子(也叫重组质粒)的。
㈣ 1.2.基因工程常用的工具酶和载体有哪些
酶:
DNA连接酶,
DNA聚合酶(PCR中使用,eg. Taq, Q5, S15......)
限制性内切酶(BamH1, Sau3AI, 大概上百种,根据识别酶切位点的序列而定),
CIP(碱性磷酸酶,去磷酸化,防止质粒自连)
载体:
对于细菌来说(质粒): 复制载体: pUC18, pUC19.....对应使用的宿主如 Top10
表达载体:pACYC, pET 系列的质粒,对应表达宿主如BL21
对于动物和植物来说也可以用质粒来做载体,但转化方法不太一样,比如植物需要农杆菌转化法细菌用热激或电转。
㈤ 基因工程中有哪些常用的工具酶,他们各自的主要作用是什么
基因工程中主要的工具酶有限制酶和dna连接酶。
限制酶的作用是切割目的基因两端,而dna连接酶是将目的基因和运输体的黏性末端连接在一起。
㈥ 基因工程中有哪些常用的工具酶,他们各自的主要作用是什么
基因工程中常用的工具酶有:限制酶、聚合酶、连接酶、修饰酶和核酸酶五大类,各自的主要作用如下:
1、限制酶:
可以识别并附着特定的脱氧核苷酸序列,并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割。
2、聚合酶:
可以专门生物催化合成脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的一类酶。
3、连接酶:
作用是催化两种大型分子以一种新的化学键结合一起的酶,一般会涉及水解其中一个分子的团。
4、修饰酶:
能催化稀有碱基参入RNA或DNA,或对原有碱基进行修饰的酶。以防止限制性内切酶的破坏。
体内有些酶可在其他酶的作用下,将酶的结构进行共价修饰,而使其在高活性形式和相对较低的活性形式之间互相转变,这种调节称为共价修饰调节。
5、核酸酶:
是能够将聚核苷酸链的磷酸二酯键切断的酶,核酸酶属于水解酶,作用于磷酸二酯键的P-O 位置,核酸酶是在核酸分解的第一步中,作用于水解核苷酸之间的磷酸二酯键的一种核酸。在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的。
㈦ 酶的分类有哪些
一、酶的分类
与DNA复制有关的酶
解旋酶、DNA聚合酶
与DNA转录有关的酶
解旋酶、RNA聚合酶
与蛋白质翻译有关的酶
蛋白质合成酶
与逆转录有关的酶
反转录酶、DNA聚合酶
与基因工程有关的酶
限制性核酸内切酶、DNA连接酶
植物细胞工程有关的酶
纤维素酶、果胶酶
动物细胞工程有关的酶
胰蛋白酶
物质代谢酶
消化酶(存在于消化管内):淀粉酶(唾液、胰液)、麦芽糖酶(胰液、小肠液)、脂肪酶(胰液)、蛋白酶(胃液、胰液)、肽酶(肠液)
水解酶类:脂肪酶、蛋白酶、肽酶、转氨酶
呼吸酶(有氧及无氧呼吸酶)
光合作用酶
ATP合成酶及ATP水解酶
微生物代谢酶类
组成酶类:只受遗传物质控制
诱导酶类:受遗传物质控制的同时,还受环境的影响
二、主要酶的功能概述
1.解旋酶:作用于氢键,是一类解开氢键的酶,由水解ATP来供给能量它们常常依赖于单链的存在,并能识别复制叉的单链结构。在细菌中类似的解旋酶很多,都具有ATP酶的活性。大部分的移动方向是5′→3′,但也有3′→5′移到的情况,如n′蛋白在φχ174以正链为模板合成复制形的过程中,就是按3′→5′移动。在DNA复制中起作用。
2.DNA聚合酶:在DNA复制中起作用,是以一条单链DNA为模板,将单个脱氧核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链,形成链与母链构成一个DNA分子。
3.DNA连接酶:其功能是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键。如果将经过同一种内切酶剪切而成的两段DNA比喻为断成两截的梯子,那么,DNA连接酶可以把梯子的“扶手”的断口处(注意:不是连接碱基对,碱基对可以依靠氢键连接),即两条DNA黏性末端之间的缝隙“缝合”起来。据此,可在基因工程中用以连接目的基因和运载体。
与DNA聚合酶的不同在于:不在单个脱氧核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键,而是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来,因此DNA连接酶不需要模板
4.RNA聚合酶:又称RNA复制酶、RNA合成酶,作用是以完整的双链DNA为模板,边解放边转录形成mRNA,转录后DNA仍然保持双链结构。对真核生物而言,RNA聚合酶包括三种:RNA聚合酶I转录rRNA,RNA聚合酶Ⅱ转录mRNA,RNA聚合酶Ⅲ转录tRNA和其她小分子RNA。在RNA复制和转录中起作用。
5.反转录酶:为RNA指导的DNA聚合酶,催化以RNA为模板、以脱氧核糖核苷酸为原料合成DNA的过程。具有三种酶活性,即RNA指导的DNA聚合酶,RNA酶,DNA指导的DNA聚合酶。在分子生物学技术中,作为重要的工具酶被广泛用于建立基因文库、获得目的基因等工作。在基因工程中起作用。
6.限制性核酸内切酶(简称限制酶):限制酶主要存在于微生物(细菌、霉菌等)中。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并且能在特定的切点上切割DNA分子。是特异性地切断DNA链中磷酸二酯键的核酸酶(“分子手术刀”)。发现于原核生物体内,现已分离出100多种,几乎所有的原核生物都含有这种酶。是重组DNA技术和基因诊断中重要的一类工具酶。例如,从大肠杆菌中发现的一种限制酶只能识别GAATTC序列,并在G和A之间将这段序列切开。目前已经发现了200多种限制酶,它们的切点各不相同。苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因,就能被某种限制酶切割下来。在基因工程中起作用。
7.纤维素酶和果胶酶:植物细胞工程中植物体细胞杂交时,需事先用纤维素酶和果胶酶分解植物细胞的细胞壁,从而获得有活力的原生质体,然后诱导不同植物的原生质体融合。
8.胰蛋白酶:在动物细胞工程的动物细胞培养中,需要用胰蛋白酶将取自动物胚胎或幼龄动物的器官和组织分散成单个的细胞,然后配制成细胞悬浮液进行培养。或用于细胞传代培养时将细胞从瓶壁上消化下来。
9.淀粉酶:主要有唾液腺分泌的唾液淀粉酶、胰腺分泌的胰淀粉酶和肠腺分泌的肠淀粉酶,可催化淀粉水解成麦芽糖。
10.麦芽糖酶:主要有胰腺分泌的胰麦芽糖酶和肠腺分泌的肠麦芽糖酶,可催化麦芽糖水解成葡萄糖。
11.脂肪酶:主要有胰腺分泌的胰脂肪酶和肠腺分泌的肠脂肪酶,可催化脂肪分解为脂肪酸和甘油。肝脏分泌的胆汁乳化脂肪形成脂肪微粒后,有利于脂肪分解。
12.蛋白酶:主要有胃腺分泌的胃蛋白酶和胰腺分泌的胰蛋白酶,可催化蛋白质水解成多肽链。作用结果是破坏肽键和蛋白质的空间结构。
13.肽酶:由肠腺分泌,可催化多肽链水解成氨基酸。
14.转氨酶:催化蛋白质代谢过程中氨基转换过程。如人体的谷丙转氨酶(GPT),能够把谷氨酸上的氨基转移给丙酮酸,从而形成丙氨酸和a—酮戊二酸。
由于谷丙转氨酶在肝脏中的含量最多,当肝脏病变时谷丙转氨酶就大量释放到血液,因此临床上常把化验人体血液中这种酶的含量作为诊断是否患肝炎等疾病的一项重要指标。
15.光合作用酶:是指与光合作用有关的一系列酶,主要存在于叶绿体中。
16.呼吸氧化酶:与细胞呼吸有关的一系列酶,主要存在于细胞质基质和线粒体中。
17.ATP合成酶:指催化ADP和磷酸,利用能量形成ATP的酶。
18.ATP水解酶:指催化ATP水解形成ADP和磷酸,释放能量的酶。
19.组成酶:指微生物细胞中一直存在的酶。它们的合成只受遗传物质的控制,如大肠杆菌细胞中分解葡萄糖的酶。
20.诱导酶:指环境中存在某种物质的情况下才合成的酶,如大肠杆菌细胞中分解乳糖的酶。
㈧ 基因表达载体的构建需要哪些工具酶
限制性核酸内切酶或限制酶——比作剪刀 DNA连接酶——比作针线(包括T4DNA连接酶 热稳定DNA连接酶等) 楼上的说的不对
这还有几种酶的比较 有兴趣就看看 希望采纳
限制性核酸内切酶(以下简称限制酶):限制酶主要存在于微生物(细菌、霉菌等)中。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并且能在特定的切点上切割DNA分子。是特异性地切断DNA链中磷酸二酯键的核酸酶(“分子手术刀”)。发现于原核生物体内,现已分离出100多种,几乎所有的原核生物都含有这种酶。是重组DNA技术和基因诊断中重要的一类工具酶。例如,从大肠杆菌中发现的一种限制酶只能识别GAATTC序列,并在G和A之间将这段序列切开。目前已经发现了200多种限制酶,它们的切点各不相同。苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因,就能被某种限制酶切割下来。在基因工程中起作用。 DNA连接酶:主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键,起连接作用,在基因工程中起作用。 DNA聚合酶:主要是连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键,在DNA复制中起做用。 DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上,形成磷酸二酯键;而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键,不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。 DNA聚合酶是以一条DNA链为模板,将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链;而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。 DNA连接
RNA聚合酶(又称RNA复制酶、RNA合成酶)的催化活性:RNA聚合酶以完整的双链DNA为模板,转录时DNA的双链结构部分解开,转录后DNA仍然保持双链的结构。真核生物RNA聚合酶:真核生物的转录机制要复杂得多,有三种细胞核内的RNA聚合酶:RNA聚合酶I转录rRNA,RNA聚合酶II转录mRNA,RNA聚合酶III转录tRNA和其它小分子RNA。在RNA复制和转录中起作用。 反转录酶:RNA指导的DNA聚合酶,具有三种酶活性,即RNA指导的DNA聚合酶,RNA酶,DNA指导的DNA聚合酶。在分子生物学技术中,作为重要的工具酶被广泛用于建立基因文库、获得目的基因等工作。在基因工程中起作用。 解旋酶:是一类解开氢键的酶,由水解ATP来供给能量它们常常依赖于单链的存在,并能识别复制叉的单链结构。在细菌中类似的解旋酶很多,都具有ATP酶的活性。大部分的移动方向是5'→3',但也有3'→5'移到的情况,如n'蛋白在φχ174以正链为模板合成复制形的过程中,就是按3'→5'移动。在DNA复制中起做用。 DNA限制酶作用于磷酸二酯键 DNA连接酶作用于磷酸二酯键 DNA聚合酶作用于磷酸二酯键 DNA解旋酶作用于氢键
㈨ 生物化学反应中充当氧化还原反应的辅酶或辅基都有哪些
一、名词解释
1.酶 13.最适pH
2.固定化酶 14.不可逆性抑制
3.同工酶 15.可逆性抑制
4.酶的特异性 16.激活剂
5.酶的活性中心 17.抑制剂
6.酶原及酶原激活 18.核酶
7.抗体酶 19.变构酶
8.活化能 20.酶的共价修饰
9.诱导契合假说 21.酶的Vmax
10.初速度 22.结合酶
11.Km值 23.酶活力
12.最适温度 24.比活力
二、填空题
25.酶是由 产生的对特异底物起高效催化作用的 。
26.酶加速反应的机制是通过降低反应的 ,而不改变反应的 。
27.结合酶,其蛋白质部分称 ,非蛋白质部分称 ,二者结合其复合物称 。
28.酶活性中心与底物相结合那些基团称 ,而起催化作用的那些基团称 。
29.当Km值近似 ES的解离常数KS时,Km值可用来表示酶对底物的 。
30.酶的特异性包括 特异性, 特异性和 特异性。
31.米曼二氏根据中间产物学说推导出V与[S]的数学方程式简称为 ,式中的 ..为米氏常数,它的值等于酶促反应速度达到 一半时的 。
32.在其它因素不变的情况下,[S]对酶促反应V作图呈 线,双倒数作图呈 线,而变构酶的动力学曲线呈 型。
33.可逆性抑制是指抑制剂与酶进行 结合影响酶的反应速度, 抑制剂与酶的活性中心结合, 抑制剂与酶的活性中心外的必需基团结合。
34.反竞争性抑制剂使酶对底物表观Km ,Vmax 。
35.无活性状态的酶的前身物称为 ,在一定条件下转变成有活性酶的过程称 。其实质是 的形成和暴露过程。
36.丙二酸是 酶的 抑制剂,增加底物浓度可 抑制。
37、同工酶是指催化化学反应 ,而酶蛋白分子结构、理化性质及免疫学性质 的一组酶。
38.辅酶与辅基的区别在于前者与酶蛋白 ,后者与酶蛋白 。
39.肌酸激酶的亚基分 型和 型。
40.最适温度 酶的特征性常数,它与反应时间有关,当反应时间延长时,最适温度可以 。
41.某些酶以 形式分泌,不仅可保护 本身不受酶的水解破坏,而且可输送到特定的部位与环境转变成 发挥其催化作用。
㈩ 用于酶切的常用工具酶有哪些
1,限制内切酶:用于DNA分子的特异切割
2,DNA甲基化酶:用于DNA分子的甲基化
3,核酸酶:用于DNA、RNA的非特异性切割
4,核酸聚合酶:合成
5,核酸连接酶:连接
6,核酸末端修饰酶:末端修饰
7,其他酶:破壁