广物院的病原微生物如何

‘壹’ 什么是病原微生物

病原微生物是指可以侵入人或动物机体，引起感染甚至传染病的微生物，也称病原体。病原体中，以细菌和病毒的危害性最大。病原微生物包括病毒、细菌寄生虫（原虫、蠕虫、医学昆虫）、真菌等。

病原体侵入动物机体，机体就是病原体生存的场所，医学上称为病原体的宿主。

病原体在宿主中进行生长繁殖、释放毒性物质等引起机体不同程度的病理变化，这一过程称为感染。动物机体在发生感染的同时，能激发机体免疫系统产生一系列免疫应答而与之对抗，称之为免疫。

感染和免疫是一对矛盾，其结局如何，根据病原体和宿主两方面力量强弱而定。如果宿主免疫系统足够强壮，可能不形成感染；即使形成了感染，病原体也多半会逐渐消亡，动物康复；如果宿主很虚弱，免疫系统机能下降，而病原体很凶猛，则感染扩散，甚至导致动物死亡。

对于细菌引起的感染，可以用有效的抗菌药物治疗；而对于病毒引起的感染，抗菌药物没有效果，病毒性疾病有细菌混合感染或继发感染时，须用抗菌药物配合治疗。

‘贰’ 请教病原微生物分型的方法种类及优劣势比较。谢谢！

病原微生物的分子分型方法
近年来，随着分子牛物学技术快速发展，新的诊断技术和方法不断涌现并广泛应用于临床微生物的检测，为病原微牛物的致病性、流行性、变异性以及耐药性分析等方面提供J，重要的信息。目前，应用分子生物学技术对病原微牛物进行分型的方法包括：脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gelelectrophoresis。PFGE)分型、聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)分型、生物芯片分型、多位点序列分型(muhilocus sequencetyping，MI。ST)、质粒DNA图谱分型以及限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)分型等。
1．脉冲场凝胶电泳分型PFGE技术以其重复性好、分辨力强而被誉为细菌分子分型的“金标准”。它可以用于大分子DNA的分离，其分辨范围达到10 Mb，而普通琼脂糖凝胶电泳仅能分离小于500 Kb的DNA。PFGE的基本原理是通过电场的不断改变，使包埋在凝胶中的DNA分子的泳动方向发
生改变，小分子DNA比大分子DNA泳动快，从‘‘ii在凝胶上按DNA分子大小呈现出特异的电泳图谱。病原微生物的基因组DNA经脉冲场凝胶电泳，使大片段DNA有效分离。DNA条带的密度反映了病原微生物基因组DNA的含量以及分子的大小，最终达到分型的目的。目前，PFGE已被广泛的应用于病原微牛物的分型，Swaminathan等∽J已经建立了针对大肠杆菌0157：H7、沙门菌属的Typhimurium血清型、李斯特菌、志贺菌属等病原微生物分型的标准PFGE操作方法。有研究认
为PFGE的分辨力强于核糖体分型和随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA，RAPD)分型。当采用1个限制件核酸内切酶的分辨力不强时，可以采用2种限制性核酸内切酶加以提高。当然，PFGE也有一些局限，如耗时长、成本高等。另外，电泳图谱易受操作人员技术水平等因素的影响，这为不同实验室问的比较带米一定困难¨
2．聚合酶链反脱分犁PCR技术自1985年发明以来，以其灵敏度高和特异性强受到了人们的高度重视，成为核酸扩增和检测的一种常规方法H]。用于病原微生物分子分型的PCR方法主要有RAPD分型和重复序列PCR分犁2种。RAPD是建移在PCR基础卜-的1种可对整个未知序列的基因
组进行多态性分析的分子生物学方法。该方法以基冈组DNA为模板，以单个人T．合成的随机多态核苷酸序列(通常为10个碱基)为引物，在热稳定的DNA聚合酶的作用下进行PCR扩增，扩增产物经琼脂糖或聚内烯酰胺凝胶电泳后，对其进行多态性分析。反应小同基因组DNA特点，从而对病原微生物进行分型。RAPD可以在物种没有任何基因组信息的情况下分析其DNA多态性，对模板DNA的纯度要求不高。无需DNA探针和分子杂交。重复序列PCR分型足Versalovic于1996
年描述的1种细菌基因组指纹分析方法，即PCR扩增细菌基因组中广泛分布的短重复序列，经电泳图谱比较分析揭示基因组间的差异[5]。研究表明重复序列PCR分型与RAPD分型有相同的分辨力[6]，但操作相对复杂。然而，重复序列PCR分型的再现性非常好，这是RAPD无法比拟的。此外，多重PCR、巢式PCR等也呵用于病原微生物的分型，虽然各有长处，但也存在分辨力弱、重复性差、结果解析困难等不足，因此，还未广泛应用于临床。
3．生物芯片分型 生物芯片技术是将生物大分子，如寡核苷酸、cDNA、基冈组DNA、肽、抗原以及抗体等固定在诸如硅片、玻璃片、塑料片、凝胶和尼龙膜等固相介质上形成生物分子点阵，当待测样品中的生物分子与生物芯片的探针分子发生杂交或相互作用后，利．}}j激光共聚焦显微扫描仪对杂交信号进行检测和分析例。其用于病原微生物分型的基本原理是将代表各个亚型的特异基因制成1张芯片，经反转录就可检测样本中病原微生物的亚型进行辨别。液态芯片(suspension arraytechnology，SAT)，又称微球蛋白芯片(proteinbeadarrays，PBA)，是近年来出现的1种新的芯片技术。其原理是甩2种荧光染料按照不同比例将直径为5．6 ttm的微球染成100种颜
色，每种颜色的微球共价结合1种牛物探针，可以是抗原、抗体、配体，也可以是核酸或酶，分针对1种待检物。混合载有100种不同颜色的微球，就可以在1个反应孔里同时完成100种不同的生物反应。随后微球成单列通过2束激光照射的管道，计算机采集并处理每种颜色微球的荧光强度变化就可以分别对每个待测物进行定性或定量的检测。该系统口‘用于多种微生物抗原、抗体和特定基因的联合检测。目前，该方法已应用于临床HPV的分型检测。与固态芯片相比，液态芯片在反
应动力学、反应速度、检测敏感性、稳定性以及自动化程度方面都有较大的优势，因此，不少学者看好液态芯片的应用前景。
4．多位点序列分型 随着DNA测序技术的快速发展，分子分型日益趋向于染色体的单一或多个位点的多态性上。MI。ST分型是指测定对多个管家基囡中长度约为470 bp的核心片段的核苷酸序列，对其组合进行索引编号，不同的菌株对应不同的序列型，从而揭示菌株间等位基因的多样性。Maid—en等[83发现，MI，ST可用于脑膜炎奈瑟球菌的分型。他们认为，多个管家基因的序列分析比较在实验过程的ⅡI操作性与结果的可靠性之间取得了平衡，且结果准确，所得数据在不同的实验窜问具有良好的可比性，即MLST对某哆菌株具有较强的种内分辨力【9 J。Chen等no]应用MLST对我国台湾地区12家医院分离到的51株白色假丝酵母菌进行遗传特征分析，结
果发现了7个管家基因序列的83个多态性位点和45个二倍体序列类型。其中，36．1％是同义突变，63．9 oA为非同义突变。他们认为，MI。ST的分辨力较PFGE更强，能分辨某患者所感
染的白色假丝酵母菌随时间推移‘‘ii发生的微小种内进化。但MLST的缺点是它的高额费用和操作过程所需的特定仪器。这使得这项技术只能局限在大型的全球性流行病学研究中心
使用，影响其在医院推广普及。
5．质粒DNA图谱分型 细菌质粒分析是较早被使用的病原微牛物分子分型方法。该方法包括萃取质粒DNA和琼脂糖凝胶电泳。由于不同菌株质粒DNA序列和大小不同，
通过琼脂糖凝胶电泳分离得到的DNA质粒图谱也不同，从而可以对不同菌株进行分型。菌株携带的质粒越多则质粒DNA图谱分型方法的特异性越强。质粒网谱分型的优点是操作相对简单，只需要简单的设备就可以完成，耗时短，费用低廉。但质粒图谱分型有一难以克服的缺陷。即质粒可以自发的丢失、获取以及在同种细菌甚至是在异种细菌之间转移，这就造成了质粒图谱的不稳定性。另外，质粒图谱型方法小能区分那些大小相同而DNA序列不同的质粒¨“。
6．限制性片段长度多态性分型 RFI。P是指基因组DNA经限制性核酸内切酶消化，消化后的片段再通过琼脂糖凝胶电泳进行分离。用限制性核酸内切酶BglⅡ和EcoRI等消化病原微生物基因组DNA，可以产生大量短的片段，通过电泳后得到的DNA图谱可用于病原微生物的分型。几乎所有
的病原微牛物分离株都町以通过这种方法分型，但由于基因组DNA巨大，酶切后产生的片段众多，且含有大量的莺叠片段，这使得蔚株间图谱的一致性分析面I临诸多用难口“。RFLP分
型分辨力弱于PFGE分型，且操作比较复杂。

‘叁’ 第一类病原微生物有那些

一类动物病原微生物：

口蹄疫病毒、高致病性禽流感病毒、猪水泡病病毒、非洲猪瘟病毒、非洲马瘟病毒、牛瘟病毒、小反刍兽疫病毒、牛传染性胸膜肺炎丝状支原体、牛海绵状脑病病原、痒病病原。

二类动物病原微生物

猪瘟病毒、鸡新城疫病毒、狂犬病病毒、绵羊痘、山羊痘病毒、蓝舌病病毒、兔病毒性出血症病毒、炭疽芽孢杆菌、布氏杆菌。

三类动物病原微生物

多种动物共患病病原微生物：低致病性流感病毒、伪狂犬病病毒、破伤风梭菌、气肿疽梭菌、结核分支杆菌、副结核分支杆菌、致病性大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、致病性链球菌。

李氏杆菌、产气荚膜梭菌、嗜水气单胞菌、肉毒梭状芽孢杆菌、腐败梭菌和其他致病性梭菌、鹦鹉热衣原体、放线菌、钩端螺旋体。

根据病原微生物的组成及结构，可将其分为三大类：

1、非细胞型微生物

主要包括病毒和朊粒等。病毒无细胞结构，仅由蛋白质外衣包裹核酸构成，如甲型肝炎病毒、SARS冠状病毒等。朊粒是一种感染性蛋白质分子，能够引起动物和人类脑组织慢性海绵体变性，如疯牛病及人类的库鲁病。

2、原核细胞型微生物

由裸露的DNA盘绕形成原始核质，没有核膜和细胞器，包括细菌、立克次体、衣原体、支原体、螺旋体，属于广义的细菌范畴。

3、真核细胞型微生物

包括真菌、原虫等。此类微生物具有核膜和复杂的细胞器，如引起疟疾的疟原虫及引起皮肤病的霉菌等。

‘肆’ 有人了解研究生的病原微生物专业吗 是属于卫生检验类的还是基础医学呢具体就业如何 求了解的人解

病原微生物专业属于医学检验类的，这个专业在检验行业算是比较冷门的，很多人都喜欢免疫生活分子之类的，个人觉得这个专业的研究生还是很有前途的，本人所在地医院是广州的三甲医院，但检验科就临床微生物实验室没有研究生，今年才开始引进，其他很多小科室研究生博士生一大把！可以看出这专业的研究生在未来的几年内都会比较受欢迎。

‘伍’ 什么是病原微生物

在自然界除了分布有动物、植物外，还生活着多种多样微小的生物，称为微生物。微生物种类繁多，包括细菌、真菌（霉菌和酵母菌）、放线菌、螺旋体、支原体、立克次氏体、衣原体及病毒等，微生物绝大多数对人类和动物无害而有益。它们对于物质的分解、转化、综合和循环，起了巨大的作用。如土壤中的固氮菌、定氮菌、硝化菌、亚硝化菌等，是植物氮素营养供应的重要来源。此外，微生物在工业、医药、农业和畜牧方面也被广为利用，尤其是在酿造、抗生素和疫苗制造方面最为突出。仅有极少数微生物对人和动物有害，可引起各种传染病，故称为病原微生物。如引起猪肺疫的巴氏杆菌，引起猪瘟的猪瘟病毒，引起仔猪红痢的密螺旋体等。

‘陆’ 病原微生物分为几类

通常将病原微生物分为三类：

1、非细胞型微生物

它们没有典型的细胞结构，也没有能够产生能量的酶系统，需要在其它细胞中生长繁殖。例如导致新冠肺炎的就是病毒，还有乙型肝炎、艾滋病等都是病毒引起的。

2、原核细胞型微生物

这类病原微生物没有完整的细胞核，细胞器也不完善，包括细菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次体、螺旋体等。

3、真核细胞型微生物

这类微生物具有核膜和复杂的细胞器，包括真菌和原虫等。

对人体的影响

病原微生物侵入人体后是否发病还要取决于人体的免疫功能。感染和免疫是一对矛盾，其结局如何，根据病原体和宿主两方面力量强弱而定。如果宿主足够强壮，可以根本不形成感染；即使形成了感染，病原体也多半会逐渐消亡，于是患者康复；如果宿主很虚弱而病原体很凶猛，则感染扩散，病人将会死亡。

以上内容参考：网络-病原微生物

‘柒’ 如何理解病原微生物,动物与人类的关系

国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或群体的危害程度，将病原微生物分为四类：

第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。

第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。

第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。

第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或动物疾病的微生物。

第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。