A. 基因文库 从基因文库中提取基因
有了基因文库,获取目的基因可以通过下面三种方法.1.可以通过碱基序列人工合成,2.通过特定的限制性内切酶将目的基因剪切下来,3.可以用mRNA通过逆转录合成目的基因.
为了筛选真核生物的某种基因,常从它的转录产物mRNA经反向转录(见中心法则)合成相应的互补DNA(cDNA),再加入用32P标记的核苷三磷酸,用DNA多聚酶切口移位方法制成有同位素标记的探针。把探针DNA和硝酸纤维滤膜上的菌落或噬菌体分别进行变性处理,然后进行分子杂交。再将X光底片覆盖在经过处理的滤膜上以进行放射自显影。在培养皿上找出和X光底片上的黑点相对应的菌落或噬菌斑。这些菌落或噬菌体中便包含着所需要的基因,经过扩增便能得到大量的细菌或噬菌体,从中可以分离出所需基因的DNA片段。
在构建受体细胞载体时需要用到限制酶,在从基因文库中提取时,需要特定限制酶