① 在显微镜下观察标本都是染色的原理是什么
染色是提高标本显微观察效果的关键措施::
由于活体的微生物个体的颜色在显微镜下差别很小,同时所观察样本中所含的微生物种类繁多,个体微小,形态千差万别。每一种的组织结构、内含物质复杂多变,相互间交织贯穿在一起。如果不加染色显然是很难在显微镜的视野中把它们相互区别出来。
正是因为这样,由于标本内部的微生物种类、形态、组织结构、物质大分子的成分染色剂的化学反应(着色)各有不同。通过染色,它们之间就会形成各自不同的颜色梯度,从而产生不同的视觉对比度。这样便有利于在显微镜下把它们的个体形态、着色差别、内含物、组织结构区分出来。所以大多数的标本都需要染色才能更好地在显微镜进行下观察。
染色是制作永久标本的必须步骤和措施:
在制作永久保存标本时,必须对标本进行固定和染色,通过固定和染色才能把标本的外部形态和内部结构层次永久固定下来,使之得以长久保存不分解变质。
不是所有的观察标本都需要染色:
染色的标本虽然能够增加标本的色度和色差,但在固定、染色过程中由于化学作用的缘故,也会使一些内部物质的形态和分子结构发生变性而失真,从而影响观察的真实性。再者,一些活体观察是不需要或不能使用染色剂的。
② 进行简单染色的目的及原理是什么进行微生物制片时是否都需要进行染色
染色剂与蛋白质或者脂质dna螯合,为了看清楚细胞内的物质,,不是所有的都需要染色,有的微生物本身自带颜色,如青霉等霉菌
③ 观察细菌形态时为什么要用染色法
观察细菌形态时为何要用染色法?因为细菌细胞微小,透明,不易观察,需染上颜色.利用单一染料对细菌进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构.
常用的染色法有:
1.简单染色法:简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法, 一般用于观察个体形态与细菌排列。
由于细菌在中性、碱性或弱酸性环境中带负电荷,所以通常采用一种碱性染料如美蓝、碱性复红、 结晶紫对细菌进行染色。美蓝是美蓝的盐酸盐,可解离为带正电荷的美蓝,很容易与细菌结合使菌体着色。染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比,在显微镜下更易于识别。
简单染色过程:涂片→固定→染色→水洗→干燥→镜检
涂片→ 固定→ 干燥→ 水洗、吸干→镜检→染色 1mim
2.革兰氏染色法:
革兰氏染色法是由丹麦医生 Hans Christian Gram于 1884 年创立。它是细菌学中很重要的鉴 别染色法,因为通过此法染色,可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌(G + )和革兰氏阴性菌(G - )两大 类。
革兰氏染色过程:涂片→固定→结晶紫初染(1min)→碘液媒染(1min)→乙醇脱色(95% 酒精,30s)→番红复染(30 秒)→干燥→镜检
阳性菌:紫色; 阴性菌:红色
④ 细菌的简单染色方法谁能介绍下
简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
操作步骤
1.涂片:用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀,涂成极薄的菌膜。
2.干燥:可自然晾干,或将涂片置于火焰高处微热烘干,但不能直接在火焰上烘烤。
3.固定:手执玻片一端,有菌膜的一面朝上,通过迅速通过火焰2-3次(用手指触涂片反面,以不烫手为宜)。
4.染色:加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液),染l~2min。
5.水洗:用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。
6.干燥
7.镜检
⑤ 进行简单染色的目的及原理是什么
目的:破坏细胞膜的选择透过性,再使用染色剂,将生物组织浸入染色剂内。
原理:使组织细胞的某一部分染上与其他部分不同的颜色或深度不同的颜色,产生不同的折射率,以便观察。
最常用的是苏木精和伊红染色法;按照现代的染色理论的观点,染料之所以能够上染纤维,并在纤维织物上具有一定牢度,是因为染料分子与纤维分子之间存在着各种引力的缘故。
(5)微生物简单染色的原理是什么意思扩展阅读:
伊红为酸性染料,将细胞质和细胞间质,如细胞质中的RNA染成红色。我们称这种能被伊红染红的性质为嗜酸性。染色深浅可反映嗜碱性和嗜酸性强弱;若对两种染料缺乏亲和力,则称为嗜中性。
有些组织成分可以显示与染料颜色不同的颜色,当用蓝色碱性染料甲苯胺进行染色时,组织中的糖胺多糖成分被染成紫红色,此种显色与染料颜色不同的现象成为异染性。
⑥ 在对细菌做革兰氏染色之前通常先进行简单染色,其目的是什么
细菌的细胞小而透明,在普通的光学显微镜下不易识别,必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构,这就对简单染色,简单染色后再进行革兰氏染色,可以更容易区分革兰氏阳性和革兰氏阴性菌。
革兰氏染色法的基本步骤是:先用初染剂结晶紫进行初染,再用碘液媒染,然后用乙醇(或丙酮)脱色,最后用复染剂(如番红)复染。经此方法染色后,细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌;如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色),该菌属于革兰氏阴性菌。
原理:
革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性,是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。实际上,当用结晶紫初染后,像简单染色法一样,所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂,它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物,从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时,两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成,壁厚、类脂质含量低,用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小,透性降低,从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内,经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同,由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高,所以当脱色处理时,类脂质被乙醇(或丙酮)溶解,细胞壁透性增大,使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来,用复染剂复染后,细胞被染上复染剂的红色。
⑦ 单染色法的基本步骤有哪些有何注意事项
一、单染色法的基本步骤:
1.涂片取两块干净的载玻片,各滴一小滴生理盐水于载玻片中央,用无菌操作,分别挑取金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌于二载玻片的水滴中,调匀并涂成薄膜。注意滴生理盐水时不宜过多,涂片必须均匀。
2.干燥于室温中自然干燥。
3.固定涂片面向上,于火焰上通过2—3次,使细胞质凝固,以固定细菌的形态,并使其不易脱落。但不能在火焰上烤,否则细菌形态将毁坏。
4.染色放标本于水平位置,滴加染色液于涂片薄膜上,染色时间长短随不同染色液而定。吕氏碱性美兰染色液约染2-3分钟,石炭酸复红染色液约染1-2分钟。
5.水洗染色时间到后,用自来水冲洗,直至冲下之水无色时为止。注意冲洗水流不宜过急,过大,水由玻片上端流下,避免直接冲在涂片处。冲洗后,将标本晾干或用吹风机吹干,待完全干燥后才可置油镜下观察。
6.镜检按实验程序进行显微镜观察。
二、注意事项:
(1)载玻片要清洁无油污,否则菌液不易涂开。涂片时取培养物宜少,培养物涂层宜薄,涂层过厚则不易观察细菌形态。
(2)干燥和固定时,玻片不能直接在离火焰很近的位置上烘烤,否则会破坏细菌形态并使之变形,影响观察结果。
(3)观察时如需用到油镜,油镜检查前玻片应完全干燥,观察后要将油镜用擦镜纸等彻底擦拭干净。
单染色法原理:
简单染色法即只用一种染料对涂片进行染色,该法简便易行,适用于菌体的一般形态观察。通常情况下由于细菌菌体多带负电荷,易和带正电荷的碱性染料结合而被染色,因此常用碱性染料进行简单染色,如美蓝、碱性复红、结晶紫、孔雀绿、番红等。
所有的苯胺染料,均可用来做简单染色法的染色剂。在进行染色之前的制片过程是影响染色结果好坏的关键性步骤。
⑧ 微生物染色原理
阳性菌厚,不容易脱色,阴性菌容易被乙醇脱色。所以一个可以被显紫色一个土黄色。但操作不当,染色过度。容易出现假阳性。
革兰氏染色的原理
1、G+细胞壁主要由肽聚糖形成的致密网状结构组成,壁厚,类脂含量低,交联度高,用乙醇处理后,发生脱水作用,肽聚糖层孔径缩小,透性降低,从而使结晶紫-碘复合物不易被洗脱而保留再细胞内,故细菌仍保留初染时的紫色。
2、G-肽聚糖层较薄,交联度低,含较多类脂质,故用乙醇处理后,类脂质被溶解,细胞壁孔径变大,通透性增加,使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出,细胞被脱色,经沙黄复染后呈红色。
二、革兰氏染色的步骤
1、制片
涂片——干燥——固定
2、初染
滴加结晶紫染色1~2分钟,水洗;
3、媒染
用碘液冲去残水,并用碘液覆盖1分钟;
4、脱色
滴加95%酒精,脱色30秒,立即水洗;
5、复染
用番红液复染1~2分钟,水洗;
6、镜检
干燥后,用油镜观察。先低倍镜再高倍镜。油镜使用结束后,要及时用擦镜纸擦干净镜头,避免香柏油残留