如何指导做徽生物检测

‘壹’ 怎样做好微生物检验的工作

怎样做好微生物检验质量控制
微生物学检验室内质量控制包括：①对细菌检验人员的要求；②操作手册；③仪器设备的功能监测；④培养基的质量控制；⑤试剂、染色液及抗血清的质量控制；⑥标本检验的质量控制；⑦标准菌株的来源和保存及室内质量的全面控制七个方面。
质量控制：满足质量要求的操作技术和活动。
质量保证：为了满足实验室质量要求
，制定相应的计划，实施证明（记录）所进行的一系列的系统活动。
外部质量控制：通过互相校准和/或检验对实验室的操作和结果所进行的控制。
内部质量控制：实验室内部采取的以对比分析、跟踪以及相关方法，对实验室工作的连续性控制计划。

‘贰’ 做微生物实验的步骤

操作步骤
1．涂片将培养14—16小时的枯草芽孢杆菌和培养24小时的大肠杆菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。固定时通过火焰1—2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2．染色
（1）初染
加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗。
（2）媒染
滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。
（3）脱色
将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒钟，立即用水冲净酒精。
（4）复染
用番红液染1—2分钟，水洗。
（5）镜检
干燥后，置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
（6）同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。

‘叁’ 做微生物检验要注意什么

1、室验需在洁净台进行
2、操作前用75%酒精擦洁净台面及四周，放好需用的实验器材及各种溶液，开紫外灯消毒30分钟，在关掉紫外灯30分钟后方能进入。
2、进入无菌室前应用肥皂洗手，然后用75%酒精球棉将手擦干净。3、进入无菌间必须穿的专用工作服、帽及拖鞋、口罩，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
4、操作开始前用0.1%的新洁尔灭或75%的酒精对手、手臂及所要用到的超净台台面进行消毒。
5、使用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用的器皿，不能放置再用，消毒用器皿放置不得超过一周。6、从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位及试管或平皿边。7、接种样品必须在酒精灯前操作，接种样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。8、实验完毕，清洁操作台面。
9、用过的器材进行整理，污染细菌的器材需经高压灭菌或煮沸消毒。
11、实验过程中，及时用0.1%的新洁尔灭溶液对手、手臂及可能被污染了的区域进行消毒。
12、换下的隔离衣、帽等进行紫外线，拖鞋放回原处。13、用毕，再开紫外灯消毒 30分钟。

‘肆’ 微生物检验时的注意事项

微生物检验时的注意事项

微生物(microorganism)，包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物等在内的一大类生物群体，个体微小，与人类生活密切相关。广泛涉及健康、医药、工农业、环保等诸多领域。在中国大陆地区的教科书中，均将微生物划分为以下8大类：细菌、病毒、真菌、放线菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体。下面是我为大家带来的微生物检验的注意事项的知识，欢迎阅读。

一、培养基的灭菌及使用

(1)每次配置时，要注意其生产日期是否在保质期内，查看其开瓶日期及瓶口密封性，保证其未变质，并且未吸潮。

(2)培养基配置时，称量要准确，包括盐水的分装要准确。

(3)一定要保证现配制现灭菌，未灭菌的配好培养基不能长时间放置，更不可隔夜。

(4)灭菌时要保证恒温、恒压，同时要保证有效灭菌时间。

(5)灭菌过的培养基要冰箱保存，可保存一周，一般不超过 3 天。而且要遵循“先入先出”原则，先配制的要先使用。

(6)在使用时，要根据当班次的.使用量，用水浴锅先将培养基溶化为液态，然后及时调低水域温度(先化好的可从水域取出，放在水浴锅锅盖上)待用，千万不可长时间使培养基处于高温状态。

(7)做产品微生物检测时，倾倒培养基温度在 45℃左右，不可过烫，避免将菌烫死;也不可过凉，化好的培养基又结块凝固，不便于观察结果。

(8)每瓶培养基均要做空白。

(9)尽量集中做样，避免频繁打开同一瓶培养基瓶塞，增大培养基的污染几率，出现误差结果。

(10)培养基剩余过少时，可先将其倾倒成空白用板。

二、 做样环境的维持

(1)大环境(房间)

1)做样时，窗户和空调要关闭，或用酒精对房间进行喷雾消毒，避免房间内空气流通影响超净台内部环境(最好在有通排风系统的恒温恒湿无菌间进行操作)。

2)如果在原来的原料微生物检测室进行做样，要定期开启紫外灯，对房间进行杀菌。

(2)小环境(超净台)

1)定期清洁初效过滤器，要及时更换。

2)做样前，将超净台内部进行清洁，用 75%酒精进行擦拭消毒，并提前半小时将超净台紫外灯打开，对超净台内部环境进行杀菌。

3)关紫外灯，开风机，调整合适进风量，风量不可过低。

4)每次做样后，要对超净台内部进行清理、清洁，并用 75%酒精进行擦拭消毒。

5)紫外灯根据其使用寿命要及时更换。

6)做样同时，要做上相应菌落检测的环境空白。

7)做样区域的选择：

a、一般在距离超净台外沿的 1/3-2/3 区域进行无菌操作;

b、要在酒精灯火焰的外焰保护区域进行操作。

三、 工器具的洁净度

(1)玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌。

(2)做样用剪刀、勺子等物品要做到做样专用，不可与其它操作器具混用，使用时，先用75%酒精消毒，再采用灼烧方式进行灭菌。

(3)接种针(环)采用灼烧方式进行灭菌，但要注意做样时要先将接种针(环)进行冷却。

四、样品的采集及检测

(1)保证采样器具的无菌性

1)玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌，保证恒温、时间足够(但不可时间过长，导致玻璃器皿易裂纹而报废)。

2)取样筐：使用前要用 75%酒精进行喷洒消毒

3)取样勺、浓奶取样提子：要保证其清洁消毒，清洁后用 75%酒精进行擦拭消毒。

4)取样袋：可现用酒精进行擦拭消毒，再在超净台用紫外灯照射消毒，(包装车间要在传递窗用紫外灯照射消毒)。

5)电子称表面用 75%酒精消毒。

(2)人员操作

1)保证手部的清洗、消毒：取样前及做样前都要先洗手再消毒。

2)取样要具有代表性(随机样、目的样、综合样)且要标示清楚。

3)取样完毕，不可在车间逗留，要及时将样品放入超净台，对其外表面进行紫外灯照射消毒。

4)在要求的做样区域进行操作。

5)做样前，要用 75%酒精棉球对样品袋口部进行擦拭消毒，再开口。

6)往盐水瓶加样品时，要注意勺子或袋子尽量不接触瓶口。

7)样品计量要准确，稀释倍数也要准确(1mL 吸管不允许将管口敲掉)，进行 100 倍稀释时，1mL 吸管要伸入盐水中，不可以将样品管壁流下去，同时要避免将管底部捅破。

8)盐水温度以 40℃左右为宜，不能过热，将部分微生物烫死，也不能温度太低，不能将奶粉溶解完全。

9)进行稀释时，要摇匀，保证溶液的均一性。

10)倾倒平皿时，要注意培养基瓶口不要接触到平皿;倾倒的培养基要适量，不可以太少，在培养过程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右为宜。

11)做大肠菌群样时，要提前将乳糖胆盐培养基培养管按需要量备好，放入超净台对外表面进行紫外线灭菌。

12)接二步时，要注意先将接种针(环)进行冷却，避免出现接不上菌落的情况发生，导致无法判断、确认。

13)做样完毕，及时放入相应培养箱进行培养，并清理清洁超净台。

五、 微生物的培养

(1)在培养过程中，要随时监控培养箱温度，保证其在适宜的温度进行培养。

(2)要按照《微生物检验规范》要求及时观察结果，出现异常，要及时分析原因进行反馈。

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‘伍’ 请教表面微生物检测如何操作

1、采样与检测方法：1.1表面微生物的采样与测试方法1.1.1样品采集：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面取25cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水。

‘陆’ 微生物检测应注意什么事项

1、工作室要矮小平整、光滑、无凹凸不平或棱角、四壁及屋顶用不透水之材质，便于擦洗及杀菌。

2、室内采光面积应大，从室外应能看到室内的情况。

3、为保证无菌室的洁净，无菌室周围需设缓冲走廊，走廊旁再设缓冲间，其面积可小于无菌室。

4、无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及紫外灯，杀菌紫外灯离工作台以一米为宜，其电源开关应设在室外。

5、无菌室与缓冲间进出口应设推拉门，门与窗平齐，门缝要封紧，两门要错开，以免空气对流造成污染。

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‘柒’ 微生物镜检的化验怎么做

做微生物镜检首先要对微生物进行培养，
1.一般适温培养18-24h，
2.革兰氏染色：1）涂片固定。 2）草酸铵结晶紫染1分钟。 3）自来水冲洗。 4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。 5）水洗，用吸水纸吸去水分。 6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。 7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。
3.干燥，镜检。

‘捌’ 纯化水中的微生物检测怎么做 要详细

1检测前的准备
1.1仪器：微生物限度检验仪
微生物限度培养器
1.2培养基：TGYA琼脂培养基、R2A琼脂培养基
上述培养基均须做培养基的促生长试验，TGYA琼脂培养基的促生长试验参见微生物计数操作检查法SOP07-QC-3-017，R2A琼脂培养基促生长试验中选择的菌种是铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄糖球菌，操作方法同微生物计数操作检查法SOP07-QC-3-017中培养基的促生长试验。
75%的酒精
1.3开启净化工作台，把微生物限度检验仪连接电源。

2检测
2.1薄膜过滤法
使用孔径大小不超过0.45μm的薄膜过滤器。
2.2在净化工作台下，用火焰喷枪对泵头端面和过滤片进行消毒。把微生物限度培养器固定在微生物限度检验仪上，打开微生物限度培养器盖子。
2.3取50ml的纯化水，倒入微生物限度培养器中，打开微生物限度检验仪开关，立即过滤。过滤完成后，取下过滤器，在过滤器膜的另一面中，倾注TGYA琼脂培养基，盖上盖子。
2.4取50ml的纯化水，倒入微生物限度培养器中，打开微生物限度检验仪开关，立即过滤。过滤完成后，取下过滤器，在过滤器膜的另一面中，倾注R2A琼脂培养基，盖上盖子。
2.5每个样品过滤后均做2单个培养，检测完毕，取一微生物限度培养器固定在微生物限度检验仪上，注入100ml的75%酒精过滤，关闭仪器、电源。

3培养
倾注TGYA琼脂培养基的，在30℃-35℃培养48h-72h，并计数。倾注R2A琼脂培养基的，在20℃-25℃培养5d-7d，并计数。
分别计算和报告两种培养基每1ml纯化水中的cfu值。

‘玖’ 做微生物实验的步骤

1、准备工作，培养基的配制及灭菌（121-126度灭30分钟高压蒸汽式灭菌），玻璃器皿的灭菌（170度灭2小时干热灭菌，也可用湿热灭菌）若量大可加长灭菌时间。