生物碱用什么色谱

Ⅰ 生物碱的分离常用的方法是

你好，生物碱的分离常用的方法主要有以下几种：硅胶柱色谱法、大孔吸附柱色谱法、膜分离技术，望采纳。

Ⅱ 茶叶生物碱的分析方法

茶叶中生物碱的测定最早采用滴定法, 此法也是测定生物碱的经典方法，1949 年 Fungairino L 等报道了用重铬酸钾滴定测定茶叶、咖啡中的黄嘌呤碱。1956 年 Fleischer G.等首次采用纸层析法, 分离鉴定了茶叶中咖啡碱、可可碱、茶碱、anthine、3-甲基黄嘌呤、3, 8- 二甲基黄嘌呤和腺嘌呤。随后国内外专家、学者在茶叶生物碱( 主要是茶叶咖啡碱、可可碱和茶碱) 的测定方法研究方面作了许多工作, 归纳起来茶叶中生物碱的测定方法主要有：分光光度法、近红外光谱法、薄层色谱法、液相色谱法、毛细管电泳法和质谱法等 。 紫外可见分光光度法具有色散波长范围宽、本低、操作简单、样品易于制备和保存等优点，可用于茶叶生物碱的总生物碱含量测定；但由于存在灵敏度低、样品量大、分辨率不高等缺点，对各种结构相近的嘌呤生物碱分辨较为困难，因此单独应用于茶叶生物碱的检测已越来越少。
随着现代分析检测技术的发展，对茶叶生物碱的检测主要采用高效液相色谱HPLC、薄层色谱TLC、气像色谱 GC、毛细管电泳CE等色谱法。其中 HPLC 具有分离效能高、分离速度快等优点，作为生物碱含量测定的通用方法，是茶叶生物碱等活性成分测定中应用最为广泛的方法之一，其中反向高效液相色谱法分离效果好，应用最多。TLC 是一种开放系统的色谱，受外界影响因素较多，可能有较大的实验误差，使得实验的难度提高而且重现性较差，但其具有经济、快速、操作简单等优点，而且能较好地检出个别植物中微量的甲基黄嘌呤类生物碱。GC 具有分离时间短、经济、分析成分多等优点，但却有精密度和重现性相对较差等缺点，且在定性分析时需要已知样品或数据的色谱峰进行对照，在定量分析时需要已知纯样品检测后输出的信号进行矫正，因此已经较少单独用于茶叶生物碱等成分的测定。CE具有分离效率高、分析速度快、试剂用量少和成本低等优点；早期CE在茶叶有效成分检测中主要采用光检测法，有报道利用电化学检测器法，可以提高灵敏度，快速、简便并可同时测定茶叶中各种成分的含量 。
随着色谱-质谱联用等技术的迅速发展, 包括液相-质谱联用、气象-质谱联用、毛细管电泳-质谱联用、薄层色谱-质谱联用等，尤其是前两者的应用愈加广泛，这类技术集色谱的分离能力和质谱的高灵敏、高专属性于一体，成为分析检测的重要工具，现开始广泛应用于茶叶生物碱的分析检测中，使分析检测的精密度和灵敏度都得到了很大程度的提高。
除了上述各种分析检测技术外，荧光免疫测定、近红外光谱法等也开始应用于茶叶生物碱等化合物含量测定等领域。

Ⅲ 液相色谱法测定生物碱为什么采用内标法

液相色谱法测定生物碱采用内标法的原因在于内标法的测定的结果较为准确，由于内标物与被测组分的峰面积的比值不受进样量波动影响，因而在一定程度上消除了操作条件等的变化所引起的误差。
内标法是色谱分析中一种比较准确的定量方法，尤其在没有标准物对照时，此方法更显其优越性。内标法是将一定重量的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品混合物中，然后对含有内标物的样品进行色谱分析，分别测定内标物和待测组分的峰面积及相对校正因子，按公式即可求出被测组分在样品中的百分含量。
液相色谱法就是用液体作为流动相的色谱法。液相色谱不能由色谱图直接给出未知物的定性结果，而必须由已知标准作对照定性。当无纯物质对照时，定性鉴定就很困难，这时需借助质谱、红外和化学法等配合。液相色谱法的分离机理是基于混合物中各组分对两相亲和力的差别。根据固定相的不同，液相色谱分为液固色谱、液液色谱和键合相色谱。应用最广的是以硅胶为填料的液固色谱和以微硅胶为基质的键合相色谱。根据固定相的形式，液相色谱法可以分为柱色谱法、纸色谱法及薄层色谱法。按吸附力可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶渗透色谱。

Ⅳ 生物碱薄层色谱和纸色谱常用的显色剂是

生物碱薄层色谱和纸色谱常用的显色剂是?
答:生物碱薄层色谱和纸色谱常用的显色剂是改良碘化铋钾。

Ⅳ 生物碱色谱法检识可用于哪些目的

生物碱的色谱检识方法在中药研究和实际工作中应用很广泛，常用的有薄层色谱法、纸色谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等。

(一)薄层色谱
1、吸附薄层色谱法
（1）吸附剂：硅胶、氧化铝
（2）展开剂
（3）显色观察
多数生物碱的簿层色谱需用政良碘化铋钾试剂喷洒，显示桔红色斑点。

（4）应用范围
硅胶和氧化铝薄层色谱适用于分离和检识脂性生物碱。
2、分配薄层色谱法
当用硅胶或氧化铝吸附薄层色谱法检识生物碱效果不理想时，可考虑用分配薄层色谱法。特别是用于分离有些结构十分相近的生物碱，可获得满意的效果。

（1）支持剂：硅胶、纤维素。
（2）固定相
对于脂溶生物碱的分离，多以甲酰胺为固定相；水溶性生物碱或生物碱盐则以水作固定相。

（3）展开剂
分离脂溶性生物碱，应以亲脂性有机溶剂作展开剂。分离水溶性生物碱，则应以亲水性的溶剂作展开剂，如baw系统[正丁醇-乙酸-水（4：1：5），上层]。

（4）应用范围
以甲酰胺为固定相的薄层色谱，适于分离弱极性或中等极性的生物碱，以水为固定相的薄层色谱，适于分离水溶性的生物碱。

3、薄层色谱的显色观察薄层展开后，有色生物碱可直接观察斑点；具有荧光的生物碱在紫外光下显示荧光斑点；绝大多数生物碱的薄层色谱可用改良碘化铋钾试剂显色，显示橘红色斑点。应注意有些生物碱与改良碘化铋钾试剂不显色，可选择某些特殊显色剂。

(二)纸色谱
1、固定相：①水；②甲酰胺；③酸性缓冲液。
2、展开剂：以水作固定相的纸色谱，宜用亲水性溶剂系统作展开剂，如baw[正丁醇-乙酸-水（4：1：5），上层]；以甲酰胺和酸性缓冲液作固定相的纸色谱，多以亲脂性有机溶剂系统作展开剂。

3、显色剂
4、应用范围：纸色谱法多用于水溶性生物碱、生物碱盐和弱亲脂性生物碱的分离检识。

（三）高效液相色谱
（四）气相色谱
气相色谱主要适用于挥发性化合物的分析，如麻黄生物碱、烟碱等。

Ⅵ 生物碱的薄层色谱和纸色谱常用的显色剂是

生物碱的薄层色谱和纸色谱常用的显色剂是改良的碘化铋钾。根据查询相关资料信息，上海科哲生化是中国薄层色谱仪器的优质品牌，专注于薄层色谱，是国内知名薄层色谱扫描仪生产商，生物碱的薄层色谱和纸色谱常用的显色剂是改良的碘化铋钾。

Ⅶ 常用的生物碱提取,分离方法是什么

一、生物碱的提取：
1.水或酸水提取法
（1）生物碱在植物体内都以盐的形式存在，常以无机酸水提取。使生物碱的大分子有机酸盐变为小分子无机酸盐，增大在水中的溶解度，且方法比较简便。
（2）常用0.1%～l%的硫酸、盐酸或醋酸、酒石酸溶液作为提取溶剂，采用浸渍法或渗漉法提取。
（3）主要缺点是提取液体积较大，浓缩困难，且水溶性杂质多。故用酸水提取后，一般可采用下列纯化和富集生物碱的方法：
1）阳离子树脂交换法
生物碱盐在水中可解离出生物碱阳离子，能和阳离子交换树脂发生离子交换反应，被交换到树脂上。交换完全后，用中性水或乙醇洗除柱中的杂质。最后，再用适当的方法（酸水或酸性乙醇）将生物碱从树脂上洗脱下来。
2）萃取法
将酸水提取液碱化，生物碱游离后，如沉淀，过滤即得；如不沉淀，以适当亲脂性有机溶剂萃取，回收溶剂，即得总生物碱。
2.醇类溶剂提取法
（1）游离生物碱或其盐均可溶于甲醇、乙醇，可用醇回流或渗漉、浸渍等方法提取。
（2）优点：适应性广，不同碱性的生物碱和盐均可用，提取出来的水溶性杂质较少。缺点：脂溶性杂质多。
（3）还可配合酸水-碱化-萃取法处理去除脂溶性杂质。
具体方法是醇提液回收醇后加稀酸水搅拌，滤过，滤液调碱性后以亲脂性有机溶剂萃取，回收溶剂即得总生物碱。
3.亲脂性有机溶剂提取法
（1）大多数游离生物碱都是亲脂性的，故可用氯仿、苯、乙醚等提取游离生物碱。可采用浸渍、回流或连续回流法提取。
（2）但一般要将药材用少量碱水湿润后提取，以便使生物碱游离，也可增加溶剂对植物细胞的穿透力。
（3）挥发性生物碱如麻黄碱可用水蒸气蒸馏法提取。可升华的生物碱如咖啡碱可用升华法提取。
二、生物碱的分离：
1.利用碱性差异进行分离
（1）总碱中各生物碱的碱性不同，可用pH梯度萃取法进行分离。
（2）将总生物碱溶于氯仿等亲脂性有机溶剂，以不同酸性缓冲液依pH由高至低依次萃取，生物碱可按碱性由强至弱先后成盐依次被萃取出而分离，分别碱化后以有机溶剂萃取即可。
（3）将总生物碱溶于酸水，逐步加碱使pH值由低至高，每调一次pH值，即用氯仿等有机溶剂萃取，则各单体生物碱依碱性由弱至强先后成盐依次被萃取出而分离。
2.利用溶解度差异进行分离
（1）游离生物碱：如苦参中苦参碱和氧化苦参碱的分离，可利用氧化苦参碱极性稍大难溶于乙醚，苦参碱可溶于乙醚的性质，将苦参总碱溶于氯仿，再加入10倍量以上乙醚，氧化苦参碱即可析出沉淀。汉防己中汉防己乙素极性大于甲素，故在冷苯中的溶解度小于甲素，借此可用冷苯法将两者分离。
（2）生物碱盐：不同的生物碱与不同酸生成的盐是溶解度也不同：如麻黄中分离麻黄碱、伪麻黄碱，即利用二者草酸盐的水溶性不同，提取后经处理得到的甲苯溶液，经草酸溶液萃取后浓缩，草酸麻黄碱溶解度小而析出结晶，草酸伪麻黄碱溶解度大而留在母液中。
3.利用特殊官能团进行分离
（1）酚性或含羧基生物碱在碱性条件下成盐溶于水，可与一般生物碱分离。
（2）内酯或内酰胺结构的生物碱可在碱性水液中加热开环生成溶于水的羧酸盐而与其他生物碱分离，在酸性下又环合成原生物碱而沉淀。
4.利用色谱法进行分离
（1）吸附柱色谱：常用氧化铝或硅胶作为吸附剂，有时也用纤维素、聚酰胺等。
（2）分配柱色谱：对某些结构特别相近的生物碱，可采用分配色谱法。
（3）其他：高效液相色谱、制备性薄层色谱、干柱色谱、中压或低压柱色谱等也常用于分离生物碱。

Ⅷ 生物碱薄层色谱和纸色谱常用的显色剂是

生物碱薄层色谱和纸色谱常用的显色剂是碘化铋钾。碘化铋钾与生物碱的显色原理是，化反应，碘化铋钾在酸性溶液中与生物碱反应生成白色或淡黄色沉淀。

Ⅸ HPLC用于分析生物碱应该注意什么

1、生物碱HPLC的分析模式
根据HPLC分析生物碱时所使用固定相性质、流动相组成及极性不同,其分析模式大致可分为：正相吸附色谱法、正相硅胶反相洗脱系统色谱法、反相色谱法及离子交换色谱法.
正相吸附色谱法：通常以硅胶基质为吸附固定相,流动相为不同极性的有机溶剂或不同比例混合溶剂,分离过程主要依靠生物碱与吸附剂吸附作用的差异实现,为了改善分离,提高溶洗脱能力,常于流动相中加浓氨液、二乙胺、三乙胺等.该法应用于生物碱分析的文献较少.
正相硅胶一反相洗脱系统色谱法(NS-RE)：通常采用未经化学改性的普通硅胶为固定相,以极性有机溶剂(甲醇、乙腈)和高pH缓冲溶液为流动相,分析包括生物碱在内的碱性药物.该法柱效高,峰形对称,是简便有效的方法.在实际应用中,流动相的组成是主要的影响因素,流动相中除含有调节pH 的缓冲盐外,有时还要三乙胺、溴化四丁基铵等竞争离子或烷基磺酸钠等对离子.因此,影响保留与分离的主要因素是流动相pH、竞争离子种类及浓度 .
反相高效液相色谱法(RP-HPLC)：近年来RP-HPLC应用于生物碱分析方面的文献很多,已成为常规的方法.但普通存在色谱峰的展宽拖尾,导致分离效能低,这主要缘于生物碱结构中碱性氮原子与固定相未键台酸性硅醇基的相互作用.即使是所测生物碱在较低浓度下,仍常产生峰漂移及峰对称性差等现象.针对此缺陷,研究工作者从适用于碱性物质分析的反相填料的设计选择,流动相中缓冲盐的使用,流动相添加剂(离子对试剂、有机胺改性剂)等几方面进行了较为广泛细致的研究,并取得了一定的进展.
离子交换色谱法：该法以阳离子交换树脂为固定相,利用质子化的生物碱阳离子与离子交换剂交换能力的差异而达到分离生物碱的目的,有关生物碱高效液相离子交换色谱法的应用报道较少.
2、生物碱HPLC分析检测方法
目前,生物碱HPLC分析检测方式多以紫外法为主,在定性分析方面,紫外法检测选择性低,定性专属性差.随着二极管阵列检测器使用的普及,显着提高了液相分析检测的选择性.此外,根据生物碱的理化性质,其它检测方式如荧光法、电化学法、蒸发光散射法亦得到了应用.近年来,液相色谱-质谱联用技术已应用于生物碱分析,增强了对生物碱的定性检测能力,提高了检测灵敏度.新的接口技术及离子化方法的发展．使得HPLC-MS在生物碱的分析中得到较广泛的应用,近年的文献报道日渐增多.
3、生物碱HPLC分析的样品处理方法
因生物碱常具有一定的碱性,一般常用碱化液液萃取或酸水提取等方法从中草药、中成药及生物样品等较复杂体系中提取纯化,以达到富集和去除杂质的目的.近年来,固相萃取(SPE)技术及超临界流体萃取等现代提取纯化技术亦应用于样品的提取纯化.