① 怎么检验饮料中的大肠杆菌
大肠杆菌检验(包括(一)检验方法;(二)培养基 )
(一)检验方法
1.乳糖发酵试验。以无菌操作采取样品,采取量及稀释倍数,依据国家或当地卫生标准要求及样品污染情况而定。将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在l m J以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,lm1及1mI以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±l℃温箱内,培养24±2小时,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性;如有产气者,则按下列程序进行。
2.分离培养。将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±l℃温箱内,培养18~24小时,然后取出,观察菌落形态,并作革兰氏染色和证实试验。
3.证实试验。在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落l~2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃ 温箱内培养24±2小时,观察产气情况。凡乳糖管产气,革
兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
4.报告。根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每l 00ml(g)大肠菌群的最可能数。
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(二)培养基
①乳糖胆盐发酵培基
成分:蛋白胨:20g
猪胆盐(或牛,羊胆盐):5g
乳糖:10g
0.04%溴甲酚紫水溶液: 25m1
蒸馏水: 1 000m1
制法:将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管l 0ml,并放入一个小倒管,高压灭菌115℃15分钟。
附注:双料乳糖胆盐发酵培基除蒸馏水外,其他成分加倍。
用途:乳糖发酵试验用。
原理:细菌分解糖类是依靠细菌细胞所产生的各种酶类的作用,细菌产生的分解糖类的酶,随细菌种类不同而异,可以此来鉴别细菌。
乳糖是双糖,细菌分解双糖的酶大多是胞外酶。乳糖被乳糖酶水解成葡萄糖和半乳糖,葡萄糖可直接被细菌利用,而半乳糖则需在细胞内转化为葡萄糖后再被利用。
糖发酵试验主要是测定细菌分解糖类以后所产生的酸,以培基pH降低(指示剂变色)作为观察结果的指标。
大肠杆菌等细菌在酸性环境中,由于甲酸脱氢酶的作用,可使甲酸分解成CO2和H2,在培基中产生大量气体,进入倒管中,以便观察。
注:常用于供发酵试验的各种糖类、醇类和糖苷类(见表3-1)
②伊红美蓝琼脂培基
成分:蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 17g
2%伊红Y溶液 20ml
0.65%美蓝溶液 10ml
蒸馏水 1000ml
pH7.1
制法:将蛋l白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内,高压灭菌121℃15分钟备用。临用时加入乳糖,并加热溶化琼脂,冷至50一55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。
原理:大肠菌群细菌发酵乳糖产酸,使伊红与美蓝结合而成黑色化合物,故菌落呈黑紫色,有时还可产生金属光泽。黑色程度与光泽产生情况与伊红、美蓝二者比倒有关。不发酵乳糖的细菌(如沙门氏菌、志贺氏菌)则为无色菌落。
③乳糖发酵培基
成分:蛋白胨 20g
乳糖 10g
O.04%溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸馏水 1000ml
pH7.4
制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30ml、10ml或3ml,并放入一个小倒管,高压灭菌115℃15分钟。
附注: ’
(1)双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。
(2)30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用.3ml乳糖发酵管供大肠菌群
证实试验用。
4.蛋白胨水
成分:蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g
氯化钠 5g
蒸馏水 1 000ml pH7.4
② 饮料瓶盖微生物怎么检测
1、现用无菌袋取样,一般5-10个瓶盖
2、往无菌袋中加入适量无菌水,与瓶盖充分接触。
3、无菌袋中取10ml液体,加入灭菌后的90ml蒸馏水中混均(稀释10倍)
4、梯度稀释,取适当稀释浓度涂平板,37摄氏度培养48h后查菌落数。
③ 如何检测玻璃瓶内的微生物指标
可以采用分离培养,长出菌落菌苔后,革染,最后确定菌属,再用指示平皿判定类别确定到某一种细菌。
④ 微生物的传统检测方法有哪些
传统检测有三种方法
1、直接显微镜观察,正常情况,在一定的培养条件下(相同的培养基、温度以及培养时间),同种微生物表现出稳定的菌落特征。可以通过显微镜观察菌落特征对微生物种类进行判断。
2、选择培养基培养微生物或人为提供有利于目的菌株生长的条件,选择培养基,其作用是允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养一般是通过观察微生物的同化作用类型或某一特征进行间接判断,得到的微生物往往并不只有一种,但是能够大致确定这些微生物存在的共有特征从而对其分类。
3、鉴别培养基,根据微生物的代谢特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品。与选择培养相比,鉴别培养基的鉴别所得结果的范围比较小,一般可直接测定某微生物的种类。
现代定义
微生物:个体难以用肉眼观察的一切微小生物之统称。
微生物包括细菌、病毒、真菌、和少数藻类等。(但有些微生物是肉眼可以看见的,像属于真菌的蘑菇、灵芝等。)病毒是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的“非细胞生物”,但是它的生存必须依赖于活细胞。
根据存在的不同环境分为空间微生物、海洋微生物等,按照细胞机构分类分为原核微生物和真核微生物。
主要特征
1、体小面大
2、吸多转快
3、生长繁殖快
微生物的这一特性使其在工业上有广泛的应用,如发酵、单细胞蛋白等。微生物是人类不可或缺的好朋友。
⑤ 纯化水中的微生物检测怎么做 要详细
1检测前的准备
1.1仪器:微生物限度检验仪
微生物限度培养器
1.2培养基:TGYA琼脂培养基、R2A琼脂培养基
上述培养基均须做培养基的促生长试验,TGYA琼脂培养基的促生长试验参见微生物计数操作检查法SOP07-QC-3-017,R2A琼脂培养基促生长试验中选择的菌种是铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄糖球菌,操作方法同微生物计数操作检查法SOP07-QC-3-017中培养基的促生长试验。
75%的酒精
1.3开启净化工作台,把微生物限度检验仪连接电源。
2检测
2.1薄膜过滤法
使用孔径大小不超过0.45μm的薄膜过滤器。
2.2在净化工作台下,用火焰喷枪对泵头端面和过滤片进行消毒。把微生物限度培养器固定在微生物限度检验仪上,打开微生物限度培养器盖子。
2.3取50ml的纯化水,倒入微生物限度培养器中,打开微生物限度检验仪开关,立即过滤。过滤完成后,取下过滤器,在过滤器膜的另一面中,倾注TGYA琼脂培养基,盖上盖子。
2.4取50ml的纯化水,倒入微生物限度培养器中,打开微生物限度检验仪开关,立即过滤。过滤完成后,取下过滤器,在过滤器膜的另一面中,倾注R2A琼脂培养基,盖上盖子。
2.5每个样品过滤后均做2单个培养,检测完毕,取一微生物限度培养器固定在微生物限度检验仪上,注入100ml的75%酒精过滤,关闭仪器、电源。
3培养
倾注TGYA琼脂培养基的,在30℃-35℃培养48h-72h,并计数。倾注R2A琼脂培养基的,在20℃-25℃培养5d-7d,并计数。
分别计算和报告两种培养基每1ml纯化水中的cfu值。
⑥ 请教表面微生物检测如何操作
1、采样与检测方法:1.1表面微生物的采样与测试方法1.1.1样品采集:用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面取25cm2的面积,在其内涂抹10次,然后剪去手接触部分棉棒,将棉签放入含10mL灭菌生理盐水。
⑦ 微生物的传统检测方法有哪些
微生物的传统检测方法有哪些通过显微镜直接观察。一般来说,在一定的培养条件下(相同的培养基、温度以及培养时间),同种微生物表现出稳定的菌落特征。这些特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面。因此可以通过显微镜观察菌落特征对微生物种类进行判断。使用选择培养基培养微生物或人为提供有利于目的菌株生长的条件。
⑧ 食品微生物检测的程序
(1)采集样品
采样前要了解所采样品的来源、加工、储藏、包装、运输等情况,采样时必须做到:使用的器械和容器需经灭菌,严格进行无菌操作;不得加防腐剂;液体样品应搅拌均匀后才去采样,固体样品应在不同部位采取以使样品具代表性;取样后及时送检。
国际食品微生物标准委员会(ICMSF)制定的食品微生物学分析采样方法,目前已在国内外被逐步推广采用。ICMSF根据以下原则来规定不同的采样数:①各种微生物本身对人的危害程度各有不同;②食品经不同条件处理后,其危害程度可分为3种情况:危害度降低;危害度未变;危害度增加。依据ICMSF采样方法规定,其中:n:指一批产品采样个数;c:指该批产品中检样菌数超过限量的检样数;m:指合格菌数限量;M:指附加条件后判定为合格的菌数限量。
(2)样品送检
采集好的样品应及时送到食品微生物检验室,一般不应超过3h,如果路程较远,可将不需冷冻的样品保持在1~5℃的环境中,勿使冻结,以免细菌遭受破坏。
样品送检时,必须认真填写申请单,以供检验人员参考。
检验人员接到送检单后,应立即登记,填写序号,并按检验要求,立即将样品放在冰箱或冰盒中,并积极准备条件进行检验。
(3)样品处理
样品处理应在无菌室内进行,若是冷冻样品必须事先在原容器中解冻,解冻温度为2~5℃不超过18h或45℃不超过15min。
a.固体样品
用无菌刀、剪或镊子称取不同部位的样品,剪碎放入灭菌容器内,加一定量的水混匀,制成1: 10混悬液,进行检验。在处理蛋制品时,加入约30个玻璃球,以便震荡均匀。生肉及内脏,先进行表面消毒,再剪去表面样品,采集深层样品。
b.液体样品
原包装样品用点燃的酒精棉球消毒瓶口,再用经石炭酸或来苏儿消毒液消过毒的纱布将瓶口盖住,用经火焰消毒的开关器开启。摇匀后用无菌吸管吸取;含有二氧化碳的液体食品,按上述方法开启瓶盖后,将样品倒入无菌磨口瓶中,盖上消毒纱布,将盖开一小缝,轻轻摇动,使气体逸出后进行检验;将冷冻食品放入无菌容器内,融化后检验。
c.罐头
罐头进行密闭试验、膨胀试验和检验。将被检验罐头置于85℃以上的水浴中,使罐头沉入水面以下5 cm,观察5 min,如有小气泡连续上升,表面漏气;另外将罐头放在(37±2)℃环境下7d,如是水果、蔬菜罐头,放在20~25℃环境下7d,观察其盖和底有无膨胀现象。检验时,先用酒精棉球擦去罐上油污,然后用点燃的酒精棉球消毒开口的一端,用来苏儿消毒纱布盖上,再用灭菌的开罐器打开罐头,除去表层,用灭菌匙或吸管取出中间部分的样品进行检验。
(4)检验
每种指标都有一种或几种检验方法,可根据不同的食品、不同目的来选择恰当的检验方法。通常所用的常规检验方法为现行国家标准,或国际标准,(如FAO标准、WHO标准等),或食品进口国的标准(如美国FDA标准、日本厚生省标准、欧共体标准等)。
食品卫生微生物检验室接到检验申请单,应立即登记,填写试验序号,并按检验要求立即将样品放在冰箱或冰盒中,积极准备条件进行检验。
一般阳性样品发出后3d(特殊情况可适当延长)方能处理样品;进口食品的阳性样品,需保存6个月方能处理。阴性样品可及时处理。
(5)结果报告
样品检验完毕后,检验人员应及时填写报告单,签名后送主管人核实签字,加盖单位印章,以示生效,并立即交给食品卫生监督人员处理。
⑨ 药品生产中塑料瓶怎么检查微生物,除了滤膜法
交给你一个简单的方法:
把塑料瓶外壁除菌后,在无菌操作箱中打开。接种环在内壁上不断环刮,然后划线。
一个瓶刮十次左右,然后静置培养。
看看有没有菌落生长。